Consideraciones sobre el establecimiento de materiales de

CONSIDERACIONES SOBRE EL ESTABLECIMIENTO DE MATERIALES
DE REFERENCIA DE TRABAJO PARA VACUNAS
Mario Landys Chovel Cuervo1
1
Licenciado en Ciencias Farmacéuticas. Master en Farmacología Experimental.
Investigador Agregado. E-mail: [email protected]
Instituto Finlay. Avenida 27. No. 19805. La Lisa, La Habana, Cuba.
RESUMEN
La complejidad de los procesos tecnológicos y de control de las vacunas, la
imposibilidad de que sean caracterizadas por métodos físico – químicos exclusivamente
y la gran variabilidad de las pruebas biológicas actualmente en uso constituyen
elementos a tomar en cuenta durante el proceso de fabricación de materiales de
referencia de trabajo para vacunas. Dado que la generación de estos patrones entraña
ventajas para los centros fabricantes, tanto económicas, como técnicas y científicas, el
presente trabajo se propone brindar una serie de pautas que contribuyan a la
elevación del estándar de calidad de los materiales de referencia de trabajo para
vacunas producidos en nuestro país, basado en las más actuales normas
internacionales y en la experiencia que se ha acumulado a nivel nacional. Estas
consideraciones abordan aspectos sumamente polémicos e importantes de este
proceso como son la preparación, la caracterización, los estudios de homogeneidad y
estabilidad, la necesidad o no de realizar ensayos clínicos y el monitoreo sistemático
del desempeño de los patrones de trabajo.
ABSTRACT
Vaccine standards cannot be fully characterised by chemical and physical methods
alone due to the complexity of their processes and control. Besides, the current
potency tests for these products have many limitations, among them its inherent
variability. That’s why these aspects must be taken into consideration for the
production of working standards for vaccines. As the generation of standards has
economical, technical and scientific advantages, this paper aimed to provide some
considerations addressed to increase the quality of the reference materials for vaccines
produced in our country. For that, we considered the most updated international
guides and the more recent national experience in the field. These recommendations
focused on important issues on the preparation, characterisation, homogeneity and
stability of the standards for vaccines, as well as the need to perform clinical trials and
the ongoing monitoring of the working standards performance.
INTRODUCIÓN
Los materiales de referencia (MR) son aquellas sustancias o materiales de los cuales
uno o más de sus valores propios son suficientemente homogéneos y están bien
establecidos para ser usados en la calibración de un instrumento de medición o para la
asignación de valores a otros materiales. Ellos son ampliamente usados en todas las
ramas de la economía y resultan indispensables en el marco de los programas de
calidad. Con ellos se puede garantizar la trazabilidad de las mediciones, la calibración
de instrumentos y procesos de medición, validar métodos, establecer la incertidumbre
de la medición y los controles de calidad internos, así como contribuir al
aseguramiento de la calidad de los laboratorios mediante ensayos de aptitud para
evaluar el desempeño y las comparaciones interlaboratorios.1-3
Desde el punto de vista jerárquico, los MR se clasifican en patrones primarios,
secundarios y de trabajo. Los patrones secundarios y de trabajo son establecidos sobre
la base de la trazabilidad contra los patrones primarios.1,4-5
En la industria biofarmacéutica los MR aseguran la precisión y veracidad de los
métodos de medición utilizados para el control de calidad de sus producciones. En
función de los métodos de ensayo, o sea, del propósito para el cual será utilizado, los
MR que se emplean en este campo se clasifican en químicos y biológicos, siendo éstos
últimos aquellos cuya identidad, seguridad y potencia no resulta posible caracterizar
por métodos físico – químicos exclusivamente. La complejidad de los procesos
tecnológicos y la gran variabilidad entre los lotes de los productos resultantes, ya sean
proteínas, polisacáridos y demás productos biológicos y biotecnológicos implican la
necesidad de disponer de MR primarios con fines de calibración y al servicio de los
procesos de estandarización y armonización globales. Es por ello que diferentes
instituciones de reconocido prestigio tienen el mandato de producir, caracterizar,
custodiar y comercializar patrones biológicos primarios conocidos como MR
internacionales (MRI), entre los cuales destaca el National Institute for Biological
Standards and Control (NIBSC), de Inglaterra.
Ahora bien, no siempre estos MRI existen para todos los tipos de productos o suelen
resultar muy costosos o no estar disponibles en la cantidad requerida, de modo que los
centros fabricantes de productos biológicos deben desarrollar sus propios materiales de
referencia de trabajo (MRT) para ser utilizados en el control de calidad rutinario. Estos
MRT deben garantizar una suficiente disponibilidad a lo largo de varios años,
homogeneidad y estabilidad demostradas, un análisis de certificación interno que
asegure la demostración de la trazabilidad y la ausencia de sesgo así como una
incertidumbre cuantificada que satisfaga la requerida para la calibración.
Sin embargo, el establecimiento de MRT para productos biológicos y en particular para
las vacunas enfrenta numerosos retos. La imposibilidad de que estos productos, de
gran variabilidad inherente por las propias características de sus procesos de
fabricación, sean caracterizados por métodos físico – químicos exclusivamente
constituye sólo uno de los problemas. Ello trae como consecuencia que se deba acudir
a ensayos biológicos, muchos de ellos pruebas en animales, que resultan costosas,
altamente variables y en muchas ocasiones de relevancia dudosa. A esto se suma
aspectos tan sensibles en el caso de los MR biológicos como la determinación de la
incertidumbre, la estabilidad y el monitoreo del MR una vez establecido, la
homogeneidad, la trazabilidad, la selección de los métodos y el diseño experimental
para realizar la caracterización del MR, entre otros.
Además, la falta de experiencia y la poca información sobre el tema son dos obstáculos
adicionales que se oponen a la generación confiable de los patrones de trabajo. La
Organización Mundial de la Salud (OMS) publicó en 1978 las recomendaciones para la
preparación, caracterización y establecimiento de MRI biológicos, en la cual se definían
también ciertas pautas para otros patrones biológicos6, pero aún cuando estos
requerimientos han sido revisados y actualizados en varias oportunidades (1986, 1990,
2004) todavía no abordan de forma exhaustiva aspectos vinculados al desarrollo de
MRT para productos biológicos.
Según ISO el proceso para la fabricación de un MRT consta de las siguientes etapas:
selección y control de la materia prima activa, preparación del MRT, pruebas de
homogeneidad, pruebas de estabilidad, caracterización del MRT, procesamiento
estadístico, establecimiento del valor de la característica de interés y su incertidumbre
y certificación del MRT.7 El presente trabajo ofrece una panorámica que se basa en las
tendencias internacionales y la experiencia nacional en el tema a fin de brindar pautas
que contribuyan al proceso de preparación, caracterización, certificación y monitoreo
de materiales de referencia de trabajo para el control de calidad de vacunas.
MÉTODOS
Para realizar este trabajo se consultaron regulaciones como la Serie de Guías ISO 3035 relacionadas con el proceso de establecimiento de materiales de referencia
certificados, así como la Guía ISO-IEC 17025 sobre Sistema de Calidad en
Laboratorios. De igual forma se consideraron las pautas establecidas en la Serie de
Informes Técnicos No. 800 (Anexo 4) de la Organización Mundial de la Salud y otras
normas internacionales definidas para el proceso de preparación, caracterización y
certificación de MR como es el caso de las Normas LGC/VAM. Dentro de las
Regulaciones nacionales se consultaron la regulación 22-2006, específica para el
establecimiento de MR para medicamentos (incluyendo los productos biológicos) y
otras Regulaciones sobre Buenas Prácticas de Fabricación (16-2006) y de Laboratorio
(37-2004) respectivamente. Otros artículos científicos sobre la temática, en particular
los publicados en los últimos 5 años en prestigiosas revistas internacionales de la
Editorial Elsevier como Biologicals y Vaccine y uno de los boletines de la Farmacopea
Europea (Pharmeuropa Bio) fueron igualmente revisados. Toda esta información fue
confrontada a fin de disponer de suficiente material actualizado que permitiese
transmitir los elementos que deben ser considerados durante el establecimiento de
MRT a partir de las recomendaciones contenidas en los documentos antes relacionadas
y la experiencia que en el país existe en esta temática.
ESTABLECIMIENTO DE MRT
Preparación de MRT
En la preparación de un MRT para vacunas, el primer paso crítico es la propia selección
del material, la cual dependerá del uso previsto. Se puede utilizar un material
comercial de pureza y actividad conocidas y bien caracterizadas, o bien escoger un lote
o parte de un lote de fabricación, siempre tratando de garantizar que la fuente del
material sea única. La pureza debe ser elevada o al menos se debe garantizar la no
presencia de sustancias interferentes sobre el valor de la característica de interés u
otra propiedad relevante del material. En función de lo anterior, pueden requerirse
técnicas de purificación o semipurificación que reduzcan o eliminen la presencia de
contaminantes. En cualquiera de los casos y siempre que resulte posible, el material
debe ser de características muy similares a los lotes de producción que se van a
evaluar contra él. Este material debe tener una estabilidad y una actividad específica
elevadas. Bajo ninguna circunstancia deben utilizarse materiales con actividad cercana
a los límites de especificación de la vacuna como producto o que presenten problemas
de calidad, aún aquellos que directamente pudiesen no tener impacto negativo en la
estimación de la característica de interés del MRT.8,9
Durante este proceso se debe cumplir un principio que es común para cualquier lote de
producto: el material en cada contenedor debe ser idéntico en términos de
composición, cantidad, potencia y estabilidad. La preparación del material debe
realizarse en una sola sesión de trabajo a fin de garantizar su homogeneidad. La
extensión de este proceso dependerá de la naturaleza del material que va a ser
dispensado, es decir si el mismo es una solución, un coloide o una suspensión. Algunos
materiales pueden ser distribuidos como polvos, aunque esto es menos común. En
algunos casos pueden requerirse pasos de tratamiento químico o físico para evitar la
contaminación microbiana o para remover partículas o agregados del material activo.
De igual forma, puede requerirse la adición de sustancias estabilizantes antes del
proceso de liofilización.6,10
El material a granel sólido debe conservarse seco pues el proceso de secado por regla
general no afecta la actividad biológica del MR. En el caso de los materiales líquidos,
usualmente son almacenados a temperaturas de congelación, aunque debe ponerse
mucha atención para alcanzar la temperatura de congelación apropiada. Estos también
pueden conservarse a temperaturas entre 2 y 8 C, pero siempre que se garantice su
esterilidad o la presencia de algún agente preservante.6
El proceso de llenado debe realizarse a temperatura constante y, de ser necesario, con
agitación continua. Debe existir en todo momento protección de la exposición directa a
la luz solar y el llenado debe realizarse de manera tal que se evite la contaminación
microbiana, utilizando un cuarto limpio o un gabinete de seguridad biológica o flujo
laminar equipado con un filtro HEPA. El material de envase a ser utilizado en el llenado
debe ser de vidrio neutro y debe facilitar dicho paso y no provocar ningún tipo de
interacción con el MR. Durante este proceso al menos entre el 1-2 % de los viales debe
ser seleccionado aleatoriamente y chequear su peso a fin de garantizar la
homogeneidad en el llenado. Esta variabilidad no debe exceder el 1%, aunque para MR
internacionales se aceptan valores de coeficiente de variación menores. Especial
cuidado debe tenerse en el sellado de los viales y en el control de la humedad durante
el proceso de llenado a fin de reducir la misma al mínimo posible, independientemente
de la naturaleza higroscópica o no del MRT que se esté llenando.
Con el propósito de incrementar la estabilidad de los MRT, éstos generalmente se
someten a procesos de liofilización. Los líquidos en los viales deben congelarse bien
por debajo de la temperatura de congelación aparente, pues es conocido que aunque
la temperatura de congelación aparente del suero, por sólo citar un ejemplo, es
aproximadamente -22 C, en realidad esta solución se congela verdaderamente a
temperaturas que oscilan entre -50 y -60 C. Esto se debe a que el punto de
congelación de una solución eutéctica de cloruro de sodio (el principal electrolito del
suero) es aproximadamente -22 C, sin embargo las otras pequeñas moléculas
presentes no permiten que éste sea el verdadero punto de congelación. De igual forma
éste valor debe ser capaz de preservar la actividad y la solubilidad del material. En
relación con el proceso de secado, es recomendable mantener la temperatura del
material baja, aunque ello represente prolongar el tiempo de liofilización.6
Caracterización de MRT
Una vez preparado el MRT, se procede a su caracterización con el propósito de evaluar
si el material es adecuado para el uso que se le desea dar. El proceso de
caracterización implica la evaluación de la característica en sí, la estimación de la
estabilidad del material y de su homogeneidad.
Estudios de homogeneidad
La determinación de la homogeneidad juega un papel sumamente importante en el
proceso de establecimiento de un MRT porque un material que no resulte lo
suficientemente homogéneo, o sea, que no rinda el mismo valor dentro de una
incertidumbre definida independientemente del vial que se tome para el ensayo, no
debe ser caracterizado. Las pruebas de homogeneidad deben ser diseñadas de modo
tal que demuestren que la variabilidad entre viales no exceda la variabilidad analítica.
Es por ello que los métodos para la determinación de la homogeneidad deben poseer la
mejor repetibilidad y especificidad posibles.
Como se comprenderá esto resulta complejo en el caso de los productos biológicos. Si
el ensayo a través del cual se realizará la demostración de homogeneidad es la prueba
de potencia, la gran variabilidad que es inherente a este ensayo para la inmensa
mayoría de las vacunas impedirá un análisis objetivo sobre la homogeneidad del lote,
pues el hecho de que se obtenga una variabilidad entre viales muy inferior a la
analítica no necesariamente será un índice de homogeneidad sino de las limitantes del
ensayo para evaluar heterogeneidad en el material en cuestión. Ello ha llevado a
considerar otros ensayos en vacunas como es el caso de la determinación de
adyuvante (gel de hidróxido de aluminio fundamentalmente). Dado que el gel es una
suspensión su satisfactoria distribución entre viales puede resultar un parámetro
indicativo de homogeneidad, siendo más conveniente utilizar un ensayo físico –
químico, de menor variabilidad que los ensayos biológicos. Además, partiendo del
hecho de que la actividad biológica en vacunas adyuvadas depende en gran medida del
grado de adsorción, la demostración de que el adyuvante está homogéneamente
distribuido entre viales indicaría a su vez que la actividad biológica también tendrá la
misma distribución homogénea. Sin embargo, pese a que este acercamiento resulta
válido, debe tratarse con sumo cuidado ya que se han obtenido MRT de vacunas en los
cuales el contenido de aluminio estaba adecuadamente distribuido y no ocurrió lo
mismo con la actividad biológica. Más apropiado resultaría la determinación del
contenido de antígeno o de la concentración de proteínas totales como indicador de
homogeneidad.
Las Normas ISO consideran que la homogeneidad absoluta constituye un ideal. En su
lugar cada fabricante debe determinar el grado de heterogeneidad y si la misma
influye en la incertidumbre de la estimación de la característica de interés. Para ello
resulta muy importante la definición del número de muestras a utilizar y el diseño
experimental a seguir durante el estudio de homogeneidad. El número de muestras,
las cuales serán seleccionadas aleatoriamente, debe estar entre 10 y 30 viales, aunque
para biológicos resulta muy común la selección de 12 viales analizados en condiciones
que impliquen la menor variabilidad posible.11
Estudios de estabilidad
Los estudios de estabilidad están dirigidos a demostrar el mantenimiento de las
propiedades de interés del MRT en el tiempo. Diversos estudios pueden realizarse,
entre los que se incluyen los estudios de estabilidad acelerada, de vida de estante, de
bulbo abierto y reconstituido, entre otros.
La definición del tiempo de vida útil de una vacuna se realiza sobre la base de los
resultados de los estudios de estabilidad de vida de estante debido al valor predictivo
limitado que tienen los estudios de estabilidad acelerada para este tipo de productos,
pues es conocido que la cinética de degradación para ellos suele no ser lineal y por lo
tanto las extrapolaciones resultan poco objetivas. Sin embargo, la aprobación de un
MRT no puede esperar a la conclusión de un estudio de estabilidad de vida de estante,
ya que éstos, aún siendo vacunas u otros materiales de origen biológico, no son
generados con el objetivo de ser utilizados en humanos, sino para asignarle valores a
lotes de producto. Es por ello que no se les asigna fecha de vencimiento, sino que se
utilizan mientras demuestran estar aptos para el uso previsto, por lo general más allá
de la fecha aprobada para su utilización como producto en la clínica.
En este sentido, los estudios de estabilidad acelerada adquieren un papel fundamental
durante la fase de caracterización de los MRT para vacunas. Estos se basan en la
ecuación de Arrhenius, la cual relaciona el nivel de degradación y la temperatura, y
requieren colocar las muestras del MRT a temperaturas elevadas y compararlas con
muestras mantenidas a la temperatura ideal de conservación. Tomando como
referencia lo anterior, Kirkwood y colaboradores describieron un procedimiento
iterativo que permitió realizar estimaciones de los parámetros de dicha ecuación, a
través del cual se puede llegar a predecir el porciento de pérdida anual del material
que se está evaluando y esto a su vez brinda valiosa información sobre el tiempo de
uso del MRT.12
Los estudios acelerados no sólo aportan información sobre el perfil de degradación del
material, sino que también permiten detectar la potencial afectación del MRT por la
exposición a temperaturas más drásticas que las recomendadas para su conservación.
De esta forma resulta posible conocer en qué grado se afectaría el MRT bajo
condiciones inapropiadas de conservación durante actividades como la transportación.
Igualmente, siempre que proceda, se evalúa el impacto de los ciclos de congelación –
descongelación.
Para la realización de estos estudios se sigue un diseño que permita evaluar, durante
un período que oscila entre el mes y los 3 meses, un rango de temperaturas en el cual
ocurran potenciales cambios graduales en el material que se está caracterizando. En el
caso de las vacunas es común hallar estudios que contemplen las siguientes
temperaturas: -20 (y/o –70), 4, 25, 37 (o 40) y 55 (o 60) C. Para obtener resultados
que aporten la información verdaderamente relevante para los fines propuestos,
suelen combinarse pruebas de actividad biológica y ensayos físico –químicos dirigidos a
determinar impurezas y/o productos de degradación.
Aún cuando no tienen los estudios de vida de estante para MRT el mismo valor que
poseen en la asignación de la fecha de vencimiento para las vacunas de uso humano,
es habitual la realización de estudios a tiempo real cuyo propósito es la demostración
de la confianza en el estado de calibración del MRT durante el almacenamiento por
tiempo prolongado. Estas evaluaciones se ejecutan con la frecuencia definida por cada
fabricante (generalmente una vez al año) y suelen realizarse bajo condiciones de
repetibilidad.13-15
Durante los estudios de vida de estante, los valores obtenidos en cada tiempo de
muestreo son comparados con los valores a tiempo cero, o sea, con las
determinaciones realizadas durante la caracterización del material, y se evalúa si no
hay diferencias significativas entre ellas. Es común incorporar estos valores a gráficos
de control que permitan estimar si la tendencia del comportamiento del MRT refleja
inestabilidad o mantenimiento de las propiedades evaluadas durante la caracterización.
Por regla general, una señal que indique pérdida en el valor de la característica de
interés u otra propiedad relevante durante este tipo de estudios genera la necesidad
de una recaracterización, pero estos resultados deben analizarse siempre con mucha
precaución pues por una parte pueden estarse utilizando ensayos muy variables que
enmascaren con sus valores una posible degradación o puede estarse sobreestimando
el resultado obtenido, recaracterizando el material innecesariamente. Es por ello que
resulta apropiado no realizar una única determinación en cada tiempo de muestreo,
sino emplear como mínimo 3 determinaciones, y utilizar métodos que hayan sido
validados.
Estudios de caracterización
La caracterización de un MR es la determinación de uno o más valores propios, tanto
físicos, como químicos, biológicos o tecnológicos que son apropiados para el uso final
proyectado. Resulta importante discriminar entre la característica de interés, que será
aquella que permita el uso confiable y trazable definido para el MRT, y otras
características que de forma complementaria se evalúan durante el estudio. En la
industria biotecnológica se suele caracterizar un MRT para ser utilizado en ensayos de
identidad, contenido (sea de Ingrediente Farmacéutico Activo o de algún componente
de la formulación), determinación de impurezas y actividad biológica o potencia.
Igualmente durante la caracterización se acostumbra a evaluar otras propiedades
como son la humedad residual (en el caso los MRT liofilizados) y la esterilidad,
debiendo ser consideradas ambas (y el resto de las características no representativas
del uso definido para el MRT en cuestión) como características no certificadas. También
durante el proceso de fabricación se evalúan otros parámetros tecnológicos como la
hermeticidad, que es un índice de que el material fue envasado de forma satisfactoria
y segura.
El proceso de caracterización de MRT puede realizarse por calibración contra un patrón
certificado, por utilización de un método absoluto o de referencia o a través de la
evaluación
por diferentes métodos y laboratorios en el marco de un estudio
interlaboratorio. En este último caso se requiere de la participación de un número de
laboratorios que posean un nivel de cumplimiento de Buenas Prácticas y/o Sistema de
Calidad en Laboratorios, posibilidades técnicas y experiencia muy similares para evitar
los sesgos, pero esto resulta muy difícil de alcanzar cuando se desea establecer un
MRT para vacunas, porque en ocasiones estos son producto – específicos y no existen
otros laboratorios con la experiencia necesaria para participar en el estudio. Ello obliga
a los fabricantes de MRT a involucrar a laboratorios de la propia institución, pero sobre
todo implica la necesidad de disponer de protocolos que se diseñen, elaboren y
cumplan de la forma más rigurosa posible. Estos protocolos deben incluir
detalladamente el diseño experimental a seguir en cada estudio, el cual será generado
por un grupo multidisciplinario en el cual no debe faltar un experto en bioestadística.
Los resultados deben ser igualmente reportados según se indique en el protocolo y
analizados de forma centralizada por personal experimentado.6,16
Durante la caracterización debe realizarse un número de determinaciones que permita
una adecuada estimación de la característica de interés y de su incertidumbre. Se
considera que entre 6 y 10 determinaciones resulta apropiado. En ocasiones, se utiliza
para la caracterización el mismo método en el cual se empleará el MRT, pero con un
diseño simplificado, ya sea por razones técnicas o logísticas. En tal caso, una vez
concluido el proceso de caracterización, se deberá realizar una comprobación del MRT
en el sistema de ensayo para el cual fue diseñado.
De igual forma deben emplearse todos los métodos de ensayo que se requieran para
una adecuada caracterización. Por ejemplo, para un buen número de vacunas
coexisten bioensayos (pruebas en animales) y ensayos de potencia in vitro (ensayos
inmunoenzimáticos y en cultivos celulares), los cuales han sido correlacionados entre
sí. En tal caso, resulta conveniente que durante la caracterización del MRT para
actividad biológica se utilicen ambos tipos de métodos, independientemente de que se
estén utilizando o no para la liberación de lotes de producto, puesto que de esta
manera se enriquece el proceso de caracterización. Luego, la estimación del valor de la
característica de interés se realizará a partir de la ponderación de las medias de los
resultados obtenidos por los diferentes métodos. Siempre que resulte posible deben
utilizarse ensayos compendiados o métodos desarrollados en el laboratorio validados.
Resulta imprescindible puntualizar que un análisis exacto no depende solamente de la
calidad metrológica, sino también de otros factores que incluyen los errores aleatorios
y sistemáticos.
La asignación de valor a la característica de interés se realiza a través de un proceso
conocido como calibración, el cual es vital para garantizar la trazabilidad del MRT.
Siempre debe utilizarse un estándar que permita la verificación del nivel de acuerdo
entre las calibraciones. Para ello se incorporan al estudio de caracterización patrones
primarios y/o secundarios con categoría de MRI, patrones regionales, nacionales o con
un nivel de reconocimiento internacional como los patrones de las farmacopeas
norteamericana (USP), europea (EP) y británica (BP). En el estudio de calibración debe
incorporarse igualmente el lote de MRT anterior.
Sin embargo, no siempre está disponible para este tipo de estudios la referencia
internacional. En tal caso, se requiere del establecimiento de un patrón interno,
producto – específico, que garantice la trazabilidad. Estos patrones deben ser
elaborados en cantidades apreciables y caracterizados con el mayor rigor posible y
reciben el nombre de Materiales de Referencia de Trabajo Primarios (MRTP). Luego,
para el uso rutinario se elaborarán lotes de MRT más pequeños que serán calibrados
directamente contra el MRTP.
Un tema sensible para la caracterización de MRT para vacunas es la determinación de
la incertidumbre asociada a la caracterización. Es bien conocido que los ensayos para
la evaluación en matrices biológicas son muy variables, y como su incertidumbre
inherente excede la suma de factores que contribuyen a la incertidumbre del proceso
de caracterización, no es común determinar y/o reportar un valor de incertidumbre en
estos casos. Para algunos MRI se reporta un valor de incertidumbre basado en el
intervalo de confianza al 95% de la media de las determinaciones realizadas para la
caracterización, pero este acercamiento no procede para aquellos MRT que debieron
ser caracterizados utilizando bioensayos u otros métodos de variabilidad superior.
Una vez caracterizado el MRT el mismo debe someterse a un período de prueba a fin
de comprobar su desempeño en el terreno, o sea, en el mismo sistema de ensayo para
el cual fue preparado. Esto es necesario hacerlo debido a que en muchas ocasiones se
han encontrado problemas no esperados en el desempeño del MRT ya caracterizado en
los laboratorios de control de calidad, lo cual es hasta cierto punto lógico tomando en
cuenta que la caracterización se realiza durante un período relativamente corto de
tiempo y en condiciones operacionales que pretenden ser ideales, sin embargo durante
el uso rutinario comienzan a influir una serie de variables que pueden incidir en el
comportamiento del MRT. Para garantizar un proceso de puesta a prueba que aporte
información verdaderamente relevante sobre el desempeño del MRT los laboratorios
deben acumular entre 10 y 25 valores independientes. De esta manera se evita que
exista subestimación o sobreestimación sistemática del valor de la característica
durante el uso rutinario, por la influencia de factores ambientales y técnicos en los
laboratorios que utilizarán el MRT.
Otro elemento que ha ganado gran importancia en los últimos años es evaluar los lotes
de vacunas a caracterizar como MRT en ensayos clínicos, de modo que se asegure que
el material posee eficacia clínica y que por tanto los lotes que se evalúen
posteriormente frente a él y cumplan con la especificación establecida, también serán
eficaces cuando sean utilizados en la clínica. Una variante a este procedimiento resulta
la calibración del MRT frente a lotes de producto ya liberados de eficacia clínica
demostrada durante el estudio de caracterización. Los MRTP deben ser evaluados en
ensayos clínicos lo cual tiene una importante función predictiva pues de esta manera
se garantiza que cada MRT calibrado contra él y los lotes de producción que se
fabriquen posteriormente tendrán una respuesta clínica satisfactoria.17-18
Certificación y monitoreo de MRT
La certificación de MRT requiere de un documento habilitado para este fin (certificado)
que incorpore la información relevante que el cliente necesita para el buen uso del
material. La ISO Guía 17025 recomienda que el certificado contenga los siguientes
elementos: número del certificado (en función de su trazabilidad), descripción del
método de preparación, declaración sobre la homogeneidad y la estabilidad del MRT,
valor de la característica de interés e incertidumbre (cuando proceda), apartado de
valores no certificados, instrucciones para el uso y la transportación y una declaración
sobre la no reproducción o modificación del documento sin la autorización del
fabricante, amén de datos generales sobre el fabricante y el producto.4 Esta
información debe resultar lo más detallada posible dado que datos insuficientes,
ambiguos e incorrectos, pueden atentar contra el buen uso de un MRT por parte de los
laboratorios de control y echar por tierra el esfuerzo realizado y el costo de la
fabricación del MRT. Cualquier modificación en la información que contiene el
certificado debe realizarse de manera normalizada.4
EL MRT oficializado debe monitorearse de forma sistemática a fin de demostrar que su
desempeño es adecuado en el tiempo. Cada fabricante realizará este monitoreo
partiendo del reporte de los laboratorios usuarios y a través de gráficos de control,
cuyo parámetro de evaluación puede ser la pendiente, la dosis efectiva 50 (DE50), los
valores de potencia o la concentración, entre otros, definiendo medias y límites para
poder realizar eficientemente esta actividad. Los criterios para la elaboración e
interpretación de los gráficos han sido ampliamente reportados en la literatura por
Finney.19 Es éste uno de los aspectos que podemos considerar como más importantes
porque constituye un medidor esencial del desempeño del MRT en el tiempo y por
tanto un indicador sumamente eficaz del desempeño del laboratorio. Cualquier cambio
que indique pérdida de actividad o degradación del material debe implicar la toma de
medidas dirigidas a recaracterizar y/o reemplazar al material en cuestión.
De igual manera, para asegurar el buen uso y la estabilidad del MRT en el tiempo
deben cumplirse los principios de Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL) en lo relativo a
la recepción, manipulación, distribución, transporte y la conservación de estos
patrones.17,18
CONCLUSIONES
Las consideraciones descritas en este artículo permiten que los laboratorios fabricantes
de MRT tengan una guía que les permita preparar, caracterizar y monitorear MRT para
vacunas con el mayor estándar de calidad posible, lo cual tendrá un innegable impacto
económico, técnico y científico para nuestra industria biotecnológica en un futuro
cercano.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1.
2.
3.
4.
López S. y cols. Uso de los MR. Revista Cubana de Normalización. 2/2006.
NC ISO Guía 30. Términos y definiciones usados en relación con los MR. 1998.
NC ISO Guía 33. Usos de los MRC. 2000.
NC ISO-IEC 17025. Sistema de Calidad para Laboratorios de Calibración y Ensayo.
2006.
5. Riu J. y cols. Técnicas de Laboratorio. 2001, 261: 312-315.
6. OMS. Anexo 4. Guidelines for the preparation, characterization and establishment
of International and other standards and reference reagents for Biological
Substances. SIT OMS 800, 1990 (revisado 2006)
7. ISO Guía 35. Certificación de materiales de referencia.
8. LGC/VAM/2001/009. Low-Cost Quality Control Laboratory Reference Materials.
Investigation of Cost-Effective Production Procedures. April 2001.
9. Scopes R.K. Separation by precipitation. Protein purification. Edited by C.R. Cantor.
New Cork 41-60, 1987.
10.Gibson T.D. Protein stabilization using additives base don multiple electrostatic
interactions. Editated by Brown F. New approaches to stabilization of vaccines
potency. Basele K. 207-271, 1996.
11.Linsinger T. et al. Homogeneity and stability of reference materials.
Accred.Qual.Assur. 2001, 6:20-25.
12.Kirkwood T.B.L. Predicting the stability of biological standards and products.
Biometrics 1977; 33: 736-742.
13.CECMED. Regulación 23-2000. Requerimientos de los estudios de estabilidad para
el registro de productos farmacéuticos nuevos y reconocidos.
14.CECMED. Regulación 25-2000. Requerimientos de los estudios de estabilidad para
el registro de productos biológicos y biotecnológicos.
15.OMS. Guidelines on stability evaluation of vaccines. Draft 5. 2006.
16. NC-ISO/IEC Guía 43-1:2000. Ensayos de aptitud por comparaciones
interlaboratorio. Desarrollo y funcionamiento de programas de ensayos de aptitud.
17.CECMED. Regulación 37-2004. Buenas Prácticas para Laboratorios de Control de
Medicamentos. 2004.
18.CECMED. Regulación 22-2006. Certificación de Materiales de Referencia para
medicamentos. 2006.
19. Finney D.J. Chapter 4. Parallel line assays. In: Statistical Methods in Biological
Assay. 3rd Edition. London: Charles Griffin and Company Ltd 1978:69-104.