Práctica 2: OBTENCIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO Realización

Práctica nº2
Práctica 2: OBTENCIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO
Realización del frotis sanguíneo:
Material:
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Dos portaobjetos
Lanceta para punción digital
Guantes
Alcohol de 70º
Método:
1. Desinfectar el dedo que va a ser punzado.
2. Realizar la punción con la lanceta y presionar el dedo para desechar la
primera gota.
3. Colocar una gota en un extremo (no justo en el borde) del portaobjetos.
4. Deslizar por encima del portaobjetos, otro portaobjetos, por la parte
anterior a la gota y con una inclinación de 45°.
5. Al encontrarse el 2º portaobjetos con la gota y expandirla, deslizarlo de
manera continuada (sin frenar-reanudar) en el sentido contrario de manera a
dejar sobre el porta una fina capa de sangre.
6. Antes de llegar al final del portaobjetos dejar de expandir la sangre
levantándolo.
7. Dejar secar la preparación.
La zona ideal para el estudio del frotis es la zona intermedia (cuerpo) donde existe
un reparto equilibrado de células.
Tinción del frotis sanguíneo:
Tinción de Giemsa
Material:
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Frotis sanguíneo
Práctica nº2
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Colorante de Giemsa (Constituido por una mezcla de azul de metileno,
eosina y varios azures en solución acuosa).
Alcohol metílico absoluto (libre de acetona)
Microscopio de inmersión
Aceite de inmersión
Tampón PBS
Agua destilada
Guantes
Pipetas
Portaobjetos
Cubeta
Colorante Giemsa/PBS
Método:
Lancetas
Alcohol
1. Dejar secar el frotis a temperatura ambiente
2. Fijar el frotis con alcohol metílico absoluto, empezando por la gota por si
aún no está seca la muestra, ya que esa parte no la utilizaremos para la
visualización. Dejar durante 3 minutos para que se fije bien.
Fijación del frotis con alcohol
3. Sumergir el porta en una solución de Giemsa /tampón PBS (1 volumen de
colorante y 9 de PBS) y dejarlo durante 10 minutos.
Práctica nº2
Portas sumergidos en solución de Giemsa
4. Lavar el frotis con agua destilada y dejar secar.
5. Aplicar el cubreobjetos sobre la preparación. La fijación de éste se hará con
DPX.
NOTAS:
Partes de un frotis:
Podemos dividir un frotis sanguíneo en varias partes: la cabeza es la parte
donde se colocó la gota de sangre, tiene gran concentración de los eritrocitos,
se encuentran apilados.
El cuerpo es la parte que sigue la cabeza, en él no hay pilas de eritrocitos por lo
que es la parte que utilizaremos para la visualización al microscopio.
Seguidamente vienen la cola y la zona terminal. Es el final de la extensión por lo
que no son buenas zonas para la visualización ya que los leucocitos son
grandes, los eritrocitos están deformados y encontramos abundantes plaquetas.
Cabeza
Cuerpo Cola
Zona terminal