PRÁCTICA 2

PRÁCTICA 2
OBTENCIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO
Objetivos de la práctica
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Conocer las propiedades de las diferentes tinciones usadas para realizar el frotis sanguíneo.
Conocer y entender cada uno de los pasos necesarios para realizar el frotis sanguíneo.
Familiarizarse con el material de laboratorio y aprender su manipulación.
Realizar un frotis sanguíneo con sangre del alumno, etiquetarlo y guardarlo para analizarlo más adelante.
Habilidades a adquirir
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Ser capaz de preparar un frotis sanguíneo.
Dominar las tinciones básicas del frotis sanguíneo.
Principios básicos
La realización de un frotis sanguíneo es de gran importancia ya que el diagnóstico de muchas enfermedades
hematológicas se basa en la morfología y proporción de las células sanguíneas.
Es por ello que la técnica debe ser impecable, evitando que el frotis sea excesivamente fino o excesivamente
grueso. Con ello conseguimos una distribución adecuada de las células en diferentes áreas del frotis.
No utilizaremos anticoagulante ya que se mirará al momento.
Realización del frotis sanguíneo
Para la práctica usaremos el método de los dos portaobjetos, si se parte de la punción digital debe desecharse la
primera gota.
Material
1.
2.
3.
4.
Dos portaobjetos
Lanceta para punción digital
Alcohol 70%
Gasas
MÉTODO
Utilizaremos el método tradicional de realizar frotis sanguíneos. Haremos una recolección de una muestra
sanguínea punzando la piel.
Nos colocamos guantes y bata.
Primero de todo masajeamos el dedo en dirección a la punta del dedo acompañando los capilares.
Desinfectamos la zona con gasas y alcohol. Punzaremos con la lanceta el
lateral del dedo.
Colocamos una gota de sangre sobre el lateral del portaobjetos (imagen A).
Colocamos el otro formamos un ángulo de 45º colocado sobre el porta
objetos que se sitúa horizontal (y es el cual contiene la gota de sangre), lo
acercamos a la gota y esperamos que al tocarla se extienda por toda la
superficie del lateral (junta).
Después (imagen C) lo arrastramos por todo el porta objetos con decisión. Dejamos que se seque a temperatura
ambiente.
La zona ideal para el estudio del frotis es la zona intermedia donde existe un reparto equilibrado de células.
Tinción de Giemsa
Material
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Frotis sanguíneo
Colorante de Giemsa (Constituido por una mezcla de azul de metileno, eosina y varios azures en solución
acuosa)
Alcohol metílico absoluto (libre de acetona)
Microscopio de inmersión
Aceite de inmersión
Tampón PBS a PH= 7,6
Agua destilada
Método
Dejar secar el frotis a temperatura ambiente.
1. Cuando se vea seco lo fijamos con el metanol, que quede bien cubierto, pero no llegue a estar ahogado. Esto lo
hacemos colocando el portaobjetos inclinado. Esperamos 3 minutos.
2. Diluimos 1ml de Giemsa con 9ml de PBS, cubrimos el portaobjetos y esperamos 10 minutos.
3. Lo lavamos con agua destilada. Colocando otra vez el portaobjetos de forma lateral, esto sirve para quitar el
exceso de Giemsa.
4. Aplicamos el cubre objetos y observamos por el microscopio. Si se ve bien lo fijamos con BPX.
Otras tinciones
Tinción de May-Günwald-Giemsa
Se conoce con el nombre de tención panóptica. Resalta las granulaciones leucocitarias.
Tinción de Wright
Resalta las granulaciones leucocitarias.
Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo
o
o
o
o
Coloración excesivamente azul: Frotis muy grueso, lavado insuficiente, tinción muy prolongada, colorante
demasiado alcalino
Coloración muy rosada: El agua del lavado, el colorante o el tampón demasiado ácidos.
Aparición de artefactos debido a suciedad, deterioro o presencia de grasa en portaobjetos.
Hidratación de los hematíes: Fijación inadecuada por uso de alcohol metílico no absoluto.
Características y propiedades físicas de los colorantes usados en hematología
Los colorantes usados hoy en día son variaciones del colorante que usó Romanowsky para teñir el núcleo de la
malaria, para crear ese colorante, se mezcló un colorante básico con uno ácido para obtener un colorante nuevo al
que llamó “colorante neutro”.
De esta forma combinando eosina (colorante ácido) con azul de metileno (colorante básico) obtuvo no solo una
buena visualización del parásito del paludismo sino también un una amplia gama de colores para las células
sanguíneas. Este colorante fue perfeccionado pero manteniendo los principios básicos. El colorante de Giemsa es
un derivado de lo colorantes tipo Romanowsky.
Estos principios fundamentales son, la fijación de la sangre en el portaobjetos antes de aplicar el colorante y el
empleo junto a la eosina del azul de metileno o sus derivados (azures) responsables de la coloración púrpura de la
cromatina de los leucocitos y de algunas granulaciones citoplasmáticas.
En líneas generales la eosina (rosa y colorante ácido) tiñe las estructuras de carácter básico (hemoglobina de los
hematíes) y el azul de metileno y sus derivados azures (azul y de carácter básico) tiñen los componentes ácidos
(núcleos celulares con ADN nucléolo o ribosomas en el citoplasma con ARN).
Apéndice 3. Coloración de las diferentes estructuras de la sangre.Núcleo celular y
cromatina
Citoplasma
linfocitos
Citoplasma
monocitos
Granulaciones
eosinófilos
Granulaciones
basófilos
Granulaciones
neutrófilos
Hematíes
Color Púrpura
Reticulocitos
Color azulado
Color azul
Color grisáceo
Color naranja
Color azul intenso
Color pardo
Color rosado