Preparación de Dosis Seminales Porcinas: Guía Completa

GRANJA PORCINA LOS ELENES
1/07/2025
Riobamba
TEMA: PREPARACION DE DOSIS SEMINALES PORCINAS
SELECCIÓN DEL SEMENTAL: Valorar con respecto a las exigencias del
mercado, rusticidad, prolificidad, velocidad de crecimiento, aspecto fenotípico,
una mala selección tendrá repercusiones en la progenie, así para un semental
terminal influye en el tiempo de salida de su progenie al mercado o en un
semental materno, hasta que sus hijas alcancen su primer destete.
Características para la selección de sementales: las características que se
deben seleccionar en los verracos son, características de producción,
características reproductivas y características de conformación.
1.- características de producción: se mide en el individuo en su etapa de
crecimiento o al final de la etapa de engorda, son de herencia media a alta y
son:
1.1 Velocidad de crecimiento o ganancia diaria de peso (GDP), etapa que va
desde el destete (20kg) hasta que los cerdos alcanzan los 100kg de peso.
1.2 Espesor de la grasa dorsal (EGD): mediante ultrasonido se mide la grasa
dorsal a nivel de la 10ma costilla (esto se hace al final del periodo de engorda,
cuando el animal pesa 100kg)
1.3 Conversión alimenticia: difícil de medir, kg de alimento que necesita para
producir 1 kg de peso vivo ganado.
Otros: area del ojo de la chuleta (AOC), índice de crecimiento de tejido magro
(ICTM) y conversión de tejido magro (CTM).
2.- características reproductivas: incluyen tamaño de la camada, peso de la
camada a los 21 días, características seminales, tamaño testicular y numero de
dosis por eyaculado.
3.- características de conformación: distribución adecuada de sus partes
corporales
ENTRENAMIENTO Y MANEJO DEL SEMENTAL
Condiciones del cerdo para el entrenamiento
1.- tener como mínimo 6.5 meses (ideal de 7 a 9 meses)
2.- contar con un excelente aparato locomotor
3.- alto nivel de libido (este es mas afectado por factores medioambientales que
por problemas hormonales)
4.- buen temperamento y salud impecable.
5.- dimensiones del corral de colecta 2 x 3 m2 permite que el verraco no se
distraiga.
6.- la parte baja del potro debe ser colocado a la altura de los ojos, o nivel de la
articulación escapulohumeral del macho esto en machos ya entrenados, en
proceso de entrenamiento se recomiendo unos 10 a 15 cm por debajo de lo
indicado.
PROCEDIMIENTO PARA EL ENTRENAMIENTO
El area de entrenamiento debe ser tranquila, con el potro en el centro que le
llame la atención, idealmente impregnado con el olor de otro semental, recordar
que cada cerdo es diferente en su comportamiento, debe aplicarse aquí la
paciencia y perspicacia del operador para lograr un buen resultado, se
recomienda un entrenamiento de 2 días consecutivos por 1 día de descanso,
por un periodo de 4 semanas, hasta lograr que el verraco monte solo el potro,
entonces se extraerán 1 vez por semana a menores de 1 año y máximo 2
veces por semana a mayores de 1 año.
Un máximo de sesiones de entrenamiento es entre 2 y 3 veces al dia, entre las
horas mas frescas el dia no cerca del horario de alimentación.
Los casos muy efectivos de entrenamiento de sementales, se produce al
presentarse estos 2 factores de forma unánime: la estimulación sexual y
mantener su atención.
Es muy recomendable no dejar pasar mas de 6 días de una recolecta exitosa,
para que el verraco no pierda disciplina en cuanto a la extracción.
USO DE HORMONAS EXOGENAS
La aplicación intramuscular sintética de PG f2 alfa puede mejorar el nivel de
libido en sementales jóvenes, en sementales acostumbrados a monta natural o
a los que presentan libido reducido. (hormona sintética Lutalyser)
PROCESAMIENTO DE SEMEN DE CALIDAD Y PREPARACION DE DOSIS
El éxito de la fecundación mediante inseminación artificial requiere de dosis
seminales de calidad:
1.- Selección del semental
2.- Establecer un manejo reproductivo de rutina para el semental
3.- Preparación para la colecta del semen y obtención del semen.
4.- Evaluación de la calidad seminal
5.- Preparación de las dosis seminales y conservación antes de su uso para
inseminación artificial.
PREPARACION DEL SEMENTAL
Su propósito, verificar al verraco su estado de salud, condición corporal y aseo
para evitar contaminación del semen al momento de la colecta.
Descripción del procedimiento:
Antes de manipular al semental en el corral de extracción:
Lavarse las manos con agua y jabón.
Limpiar el area ventral del abdomen del semental y su prepucio (exprimir su
divertículo prepucial) con toallas limpias y humedas antes de ingresar al area
de colecta, si existe demasiado pelo en la zona es necesario rasurar.
Material y equipo requerido: agua, jabón, cepillo, tijeras o rasuradora, toallas
desechables y bote de basura.
PROCESO DE COLECTA
Una vez preparado al semental, se debe extraer el semen mediante la técnica
de la mano enguantada, garantizando que las características del semen sean
las óptimas para su procesamiento.
Procedimiento:
Lavarse las manos con agua y jabón
Usar guantes limpios y secos
Usar un termo limpio y seco
Colocar en el interior del termo una bolsa plástica (especial para la colecta),
doblada en forma de acordeón.
Se colocan 2 filtros para evitar la filtración de tapioca u otros contaminantes.
Es importante que los filtros queden fijados con una liga alrededor de la boca
del termo colector
Realizar un pequeño fondo, para evitar que el eyaculado se escurra por el
termo recolector
El termo ya preparado y los guantes que se utilizarán para la colecta se
mantendrán cerca de la cámara para atemperar (encender previamente el foco
hasta alcanzar 37°C.
TECNICA DE LA MANO ENGUANTADA
Usar doble guante, ajustar el potro a la altura de los ojos del semental, se debe
estimular al semental masajeando el prepucio y escroto hasta que logre el salto
al potro (banco de colección)
Se requiere tener el material y equipo básico como son:
Potro fijo con ajuste de altura
Tapete anti derrapante
Bote de basura
Termo colector preparado (bolsa, filtros)
Cámara de atemperamiento para mantener a 37° el termo colector
Guantes desechables de vinil, poliuretano o nitrilo (no usar guantes de látex)
Toallas desechables, ropa especifica para esta area, gorra y cubrebocas.
Posteriormente que el semental monte el potro se le estimulara, hasta que
exteriorice el glande, con la mano enguantada limpia se agarra el glande de tal
manera que encaje con su forma de espiral, dejando libre la punta del glande a
1cm para no entorpecer una colecta normal, se le estimula hasta una completa
erección, pene firme y se lo extrae de manera perpendicular al abdomen,
teniendo precaución de no lastimarlo.
FRACCIONES DEL EYACULADO: pre espermática, espermática, post
espermática
Fracción pre espermática: es la primera emisión del eyaculado (10 -15 ml
aproximadamente) y no debe colectarse, ya que es pobre en espermatozoides
y tiene una carga alta de contaminantes, es transparente y muy liquida puede
contener grumos gelatinosos secretados por las glándulas bulbouretrales
(tapioca)
Fracción espermática: a partir de esta fracción se colecta todo hasta el final de
la eyaculación, que es rica en espermatozoides, es de color blanco y tiene un
aspecto denso lechoso, tiene un volumen de 50 a 150 ml aproximadamente.
Fracción posespermatica: es pobre en espermatozoides y esta constituida por
las secreciones de las glándulas accesorias del aparato reproductor del
semental, es de color blanquecino, casi transparente se obtiene un volumen de
200 a 300 ml aproximadamente y puede estar intercalada con emisiones
intermitentes e la fracción espermática, aparece algo de tapioca que es
importante retirarla para evitar riesgos de contaminación del semen obtenido
para su procesamiento.
Cuando el pene del semental queda flácido, se suelta y con ello se da por
terminado el proceso de colecta, duración promedio 15 minutos.
El termo se entrega al técnico de laboratorio para su análisis y procesamiento,
no sin antes retirar los filtros.
CALENDARIO DE COLECCIÓN DEL SEMEN
Para evitar sobre utilizar al macho o lo contrario se be llegar un registro de
colectas mensuales.
Por lo general cada macho es colectado 1 vez por semana, en casos
especiales o si se trata de un semental en especifico hasta 2 colectas
semanales
Descanso de 3 días entre colectas, en caso de 2 extracciones en 1 semana en
sementales < 1 año, el descanso debe ser de 1 semana.
Sementales > a 1 año 2 colectas semanales
Sementales adultos > 4 años 1 vez por semana, para que no haya baja calidad
del eyaculado.
SEMINOGRAMA
Es el estudio macro y microscópico del semen, para determinar la calidad del
semen del macho antes de su procesamiento
Descripción del procedimiento para la evaluación macroscópica
Una vez recibido el termo se analiza: color, olor, volumen, temperatura y pH.
Temperatura: es importante mantener el semen a 35-36° C para hacer la
dilución, con una mano sujetar la bolsa y envolver el termómetro en la bolsa de
semen, no directamente, obtener una lectura constante, se sugiere la utilización
de un termómetro laser para facilitar la lectura.
Termómetro de inmersión: permite medir la
temperatura en sustancias liquidas y
viscosas
Termómetro laser: se lo recomienda para facilitar la
lectura
VOLUMEN: según la edad, el tamaño testicular y su estado fisiológico, este
oscila en 150 a 500ml, es recomendable utilizar una toalla sobre la balanza
para evitar muerte de espermatozoides por choque de frio, una vez realizada la
lectura se convierte los gr en ml ( 1gr es = a 1 ml), restar el peso de la bolsa
que contiene al eyaculado.
Modelo de balanza de laboratorio
COLOR: es variable conforme la concentración espermática y se tienen las
siguientes categorías: blanco transparente, blanco lechoso y blanco cremoso.
Nota: el semen se desechará si contiene sangre o un tono similar (de rojo a
café que indica hemospermia), los tonos verdosos o reflejos metálicos indican
contaminación con tapioca oxidada y los tonos amarillos son sugerentes de
contaminación con orina.
OLOR: es inoloro, cualquier tipo de olor indica contaminación
PH: para la determinación de este parámetro se utilizan tiras reactivas, solo se
coloca 1 gota de semen sobre los cuadros de colores, esperar 5s y compararla
con la escala de colores del fabricante, los valores normales oscilan de 7.2 a
7.8
PREDILUCION DEL SEMEN
Se hace para mantener la estabilidad metabólica de los espermatozoides.
El diluyente ya preparado desde un inicio (precalentado a la temperatura del
semen), se agrega con cuidado (que resbale) por la bolsa de semen, en una
proporción de 1:1, ejemplo si se obtuvieron 150 ml de semen se añaden 150 ml
de diluyente.
Se toma la bolsa por la boca, se evita salida del contenido y se agita
suavemente e un lado a otro para homogenizar la muestra.
La bolsa de semen prediluido se mantiene en el termo colector, mientras tanto
se realiza la evaluación de las características microscópicas del semen:
motilidad, aglutinación, agregación, concentración, anormalidades, pruebas de
vitalidad y viabilidad, integridad del acrosoma y prueba de host corto.
DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO PARA LA EVALUACION
MICROSCOPICA
Motilidad: evalúa el movimiento progresivo de los espermatozoides, aunque es
un parámetro subjetivo, se emplea con eficacia en programas de inseminación
artificial (entre 70-90%), la ausencia de motilidad se conoce como
astenozoospermia.
La evaluación de la motilidad sigue los siguientes 3 pasos:
1.- se aplica una gota de semen en el portaobjetos, se coloca el cubreobjetos
(deberán estar limpios, secos, a 35°C y de preferencia usar una termoplatina) y
se observa al microscopio con el objetivo 10X, se apreciará el movimiento en
masa de los espermatozoides, el porcentaje de motilidad se calcula contando
100 espermatozoides con el objetivo de 40X y se registran los que están en
movimiento y los que no, por ejemplo, 85 espermatozoides moviéndose de un
total de 100, el porcentaje de motilidad es del 85%.
Para una mayor confiabilidad obtener en promedio 3 gotas, la evaluación
individual se hace a partir de las mismas gotas, cambiando de objetivo 10x a
40x.
NOTA: el vigor espermático tiene una correlación directa con la fertilidad que no
ha podido comprobarse con el porcentaje de motilidad, por lo tanto evaluar el
vigor tiene mejor impacto, no obstante se recomienda diariamente y de rutina
monitorear el vigor de las muestras diluidas y almacenadas a una temperatura
de 15-17°C, debido a la gran variabilidad que se presenta durante el
almacenaje de las muestras de los diferentes sementales e incluso entre los
eyaculados de un mismo semental, cuando se presente un tipo de movimiento
con calificación 2 o menos, ese eyaculado no deberá usarse para
inseminación, este procedimiento es útil, ya que permite verificar la capacidad
de almacenaje del eyaculado individual de cada semental (el tiempo que
mantiene una motilidad adecuada).
AGLUTINACION: esta se observa durante la evaluación de la motilidad, se
define como la unión directa entre espermatozoides por una alteración en sus
membranas y se clasifica como sigue:
No se observa aglutinación
Aglutinación baja (x)
Aglutinación moderada (xx)
Aglutinación severa (xxx)
AGREGACION: consiste de la unión de espermatozoides a detritos, basura o
leucocitos, se clasifica como baja, moderada y severa.
CONCENTRACION: esta característica permite saber el numero total de
espermatozoides por eyaculado.
El cálculo de la concentración espermática se logra usando diferentes métodos
como son: el espectrofotómetro, el colorímetro o el fotómetro, las cámaras de
neubauer, thoma, bÜrker, este ultimo es uno de los mas ampliamente usados
en la industria porcina y se describe a continuación.
CAMARA DE BURKER
Procedimiento
1.- realizar una dilución 1:100:99ml de la solución citrato formol (previamente
preparado 2.9gr de citrato de sodio, 4ml de formaldehido (40%) y 100 ml de
agua bidestilada) y 1 ml de semen fresco esto se realiza en un matraz aforado.
2.- Homogenizar la dilución Matraz Aforado
3.- Tomar con una pipeta de trasferencia una muestra de la dilución
de
4.- Llenar las 2 platinas de la cámara de Burker sin formar burbujas niPipeta
deben
Transferencia
quedar espacios libres en las platinas.
Cámara de Burker
5.- colocar la cámara en el microscopio e iniciar el conteo con el objetivo de 25x
Se cuentan los espermatozoides que hay en 40 cuadrados pequeños según la
técnica presentada en la imagen para los espermatozoides limítrofes, a partir
del margen superior izquierdo y desplazándose hacia la derecha, al final de la
hilera pasar a la inferior desplazándose hacia la izquierda.
El total de hileras que se contabilizan son tres mas un cuadro de la cuarta
hilera para completar los 40 cuadro.
Después de contar dos series de 40 se obtiene un promedio de ambas platinas.
Es importante recordar que se cuentan únicamente espermatozoides normales,
no se consideran aquellos con: colas en látigo, ovillos, gota citoplasmática,
diferentes formas de cabeza, etc.
Baja concentración oligozoospermia, ausencia azoospermia.
CALCULO DE LA DOSIS
Se multiplica el promedio de espermatozoides de las 2 platinas por 10.000.000
para obtener la concentración por ml y el resultado se multiplica por el volumen
del eyaculado sin diluir entre la concentración por dosis expresada en miles;
por ejemplo, 41 espermatozoides x 10 x 180ml del eyaculado / 3500
(concentración de dosis) = 21.08= 21 dosis seminales.
ANORMALIDADES
Se dividen según su origen en primarias, secundarias y terciarias
La presencia de espermatozoides anormales se conoce como
teratozoospermia
Las anormalidades primarias ocurren en el testículo durante el proceso de la
espermatogénesis, son malformaciones en el desarrollo del espermatozoide
dentro del testículo (dobles cabezas, macro o microcefalia, dobles colas)
Las anormalidades secundarias se originan durante el proceso de maduración
en el epidídimo (gota citoplasmática)
Las anormalidades terciarias (iatrogénicas) son originadas por un manejo
inadecuada de la muestra, como puede ser un choque térmico, como se
menciona estos cambios se deben sobre todo al cambio brusco en la
temperatura ambiental de los espermatozoides (colas dobladas, colas
enroscadas).
El porcentaje de anormalidades aceptado es de 25%
A continuación, se muestran unos cuadros con la clasificación completa de las
anormalidades, así como las mas frecuentes en un seminograma y sus
posibles causas.
VITALIDAD Y VIABILIDAD (células vivas y muertas): se pueden utilizar
diferentes técnicas de tinción para identificar espermatozoides vivos y muertos,
como la de tripán azul, con esta tinción el espermatozoide se observa blanco y
el muerto azul; con la tinción eosina- nigrosina el espermatozoide vivo se ve
blanco y el muerto rojizo.
Procedimiento: se colocan 25ul de semen y 10ul de tinción de vitalidad
previamente atemperado a medio ambiente, se homogenizan las gotas sobre el
portaobjetos y deja el frotis secar a temperatura ambiente. Para obtener un
porcentaje de células muertas (hasta 25% como máximo) se evalúan 200
espermatozoides. El mismo proceso se aplica para determinar anormalidades.
Estado del acrosoma: un espermatozoide con el acrosoma en perfectas
condiciones se pueden distinguir claramente tres regiones en la cabeza: región
acrosómica con un borde apical, región ecuatorial y región posacrosomal,
existen otras técnicas que no se nombran aquí (para más información consultar
el libro base).
PRUEBAS DE FUNCIONALIDAD ESPERMATICA
Estas pruebas permiten tener mayor conocimiento sobre la funcionalidad de la
membrana, que puede estudiarse desde el punto de vista estructural mediante
el empleo de tinciones, o bien, valorar su función mediante la aplicación de test
de osmolaridad.
Las distintas pruebas que evalúan la respuesta osmótica de la membrana: test
de resistencia osmótica (ORT); test de resistencia hiperosmótica (HRT) y test
de endosmosis o hipo osmolaridad (HOST).
SEMINOGRAMA
PREPARACION DE DOSIS SEMINALES
La preparación de las dosis seminales consiste en dividir el volumen total del
eyaculado que ya ha sido previamente analizado y preparar las dosis que
contendrán una concentración de espermatozoides viables que garantice la
fecundación.
El proceso de producción de dosis seminales comprende algunos factores en
los que se debe de poner atención para lograr el éxito de la inseminación
artificial (IA) sin comprometer la viabilidad de las dosis preparadas.
Estos factores pueden incorporarse en 3 pilares fundamentales:
1.- el primero contempla la calidad de agua del laboratorio y del diluyente
2.-el segundo la temperatura ambiental del area de trabajo y donde se hace la
conservación de las dosis seminales
3.- y el tercero comprende bioseguridad, higiene y desinfección.
Calidad del agua: requisitos en propiedades y contenido que debe cumplir
como mínimo, conductividad <10 microsiemens/cm, pH entre 5 y 8, dureza
cálcica < 3 mg CaCO3/L y presencia de bacterias < 50Ufc/ml.
DILUYENTE
Para conservar a los espermatozoides periodos prolongados de tiempo es
necesario reducir su actividad metabólica, esto se hace mediante la dilución en
un diluyente, este es una solución acuosa que permite aumentar el volumen del
eyaculado y preserva las características funcionales de los espermatozoides
manteniendo el nivel de fertilidad adecuado.
Existe una clasificación de los diluyentes basada en el tiempo de viabilidad
espermática y en la temperatura de conservación (15-17°C), esta es:
Diluyente de corta duración (3dias)
Diluyente de duración media (4-5dias)
Diluyentes de larga duración (7-8dias)
Diluyentes de extralarga duración (10 -12 días)
TEMPERATURA: es de suma importancia específicamente en 2 momentos
1.- durante la colecta, el procesado y envasado que se hace a una temperatura
de 35 a 37°C
2.- durante la conservación de las dosis seminales a una temperatura de 1518°C
BIOSEGURIDAD, HIGIENE Y DESINFECCION
Los contaminantes potenciales resultan de un mal manejo desde la obtención
del eyaculado y el proceso hasta su envasado, donde interviene el operador, el
semental o el manejo de los instrumentos a utilizar las posibles causas de
contaminación de las dosis seminales.
La mayoría de los contaminantes son bacterias Gram negativas como,
Escherichia coli, salmonella spp y Pseudomonas spp que sobreviven y crecen
a las temperaturas de almacenamiento (15-18°C), utilizando el diluyente como
sustrato y saturando la capacidad buffer de la dosis preparada.
PROCEDIMIENTO
Preparación del diluyente: el diluyente se debe preparar antes de iniciar todo el
proceso, lo cual conlleva mezclar 1 litro de agua tridestilada por cada sobre de
diluyente en una bolsa especial para este proceso, disuelto el diluyente, se
coloca en baño maría y así se mantendrá hasta su uso, a una temperatura de
35-37°C.
Baño maría
CALCULO DE DOSIS Y DE DILUYENTE: se obtiene la concentración
espermática y en ese momento se hace el calculo de dosis y diluyente a
preparar.
Calculo de dosis con cámara de Burker: promedio de espermatozoides de las
dos platinas x 10 x volumen total del eyaculado sin diluir / concentración de
espermatozoides por dosis expresada en miles.
Diluyente necesario para el numero de dosis calculadas = numero de dosis x
95 ml (volumen final por dosis) – volumen del eyaculado (sin diluir).
NOTA: una vez realizado el calculo se procede a mezclar el eyaculado
prediluido con el diluyente para obtener el volumen final de acuerdo con el
numero de dosis calculadas. Se toma por la boca de la bolsa de semen ya
diluido y se agita suavemente de un lado a otro para homogenizar el contenido.
REVISION DE MOTILIDAD PREENVASADO
Evaluar la motilidad del semen en su dilución final de acuerdo al procedimiento
explicado anteriormente y cuidar que no exista una diferencia mayor de cinco
puntos porcentuales respecto a la motilidad evaluada en semen fresco. Si lo
hubiera se registra el dato y se hará un monitoreo mas riguroso de las dosis
durante el almacenamiento.
LLENADO MANUAL:
Finalmente, las dosis deben serán identificadas con etiquetas donde se indica
la identificación del macho, línea genética, fecha de elaboración y los datos de
la empresa. Después de esto las dosis serán almacenadas en el conservador a
17°C.
Durante el proceso de llenado se toma una muestra para la evaluación de
motilidad en los siguientes seis días. A cada recipiente utilizado se le pondrá la
identificación del macho y la fecha de elaboración
El volumen final para una dosis seminal estándar para IA es de 80-100ml, la
concentración dependerá de los resultados de las evaluaciones seminales, la
mínima será de 2.500 millones.
CONSERVACION DE DOSIS SEMINALES
El objetivo principal de la conservación del semen es de mantener la capacidad
fecundante de cada dosis, la temperatura de conservación es de 17°C.
La técnica comienza después del envasado y del etiquetado, cuando las dosis
son transportadas al conservador, el cual debe estar a una temperatura fija de
15 a 17°C.
El almacenamiento es inmediato procurando que las dosis no se encimen para
permitir un flujo adecuado de aire.
Una muestra de semen diluido por macho se almacena durante tres días para
su posterior evaluación, cuya información se anota en el registro de producción
de dosis.
NOTA: las dosis almacenadas tienen que homogenizarse suavemente (mover
de un lado a otro la bolsa) hasta que ya no se vea un precipitado, este se
realiza por la mañana y tarde, con ello se logra resuspender los
espermatozoides para que todos tenga la oportunidad de entrar en contacto
con los componentes del diluyente.
Las dosis recién procesadas no podrán salir inmediatamente a la venta, puesto
que necesitan alcanzar una temperatura de 17°C para luego empaquetar, lo
cual requiere aproximadamente de 3 horas.
NOTAS SOBRE LA EXTRACCION DE DOSIS SEMINALES O MANEJO A
TENER EN CUENTA
La frecuencia del ordeño del cerdo por semana varía según la concentración
espermática de la dosis seminal, si la concentración es de 3000 millones se
trabajará al semental una vez por semana, pero si la concentración
espermática es mayor se recolectará 2 veces por semana.
El ritmo de recogidas seminales de acuerdo a su concentración espermática,
concentraciones de las que se obtengan menos de 15-18 dosis 1 vez por
semana, concentraciones superiores 3 veces en 2 semanas (manual KUBUS)
No mantener nunca mas de 15 minutos el semen puro en el baño de maría
antes e la dilución, para evitar daños en la membrana espermática. Como se
ha comentado, esta es una de las ventajas de recoger sobre 100cc de
diluyente, ya que esta practica permite alargar el tiempo de recogida y la
dilución.
Preparación de dosis seminales (KUBUS)
Una vez que la calidad del semen ha sido evaluada y se le ha considerado apta
para la IA, conociendo la concentración espermática por mm3, pasamos a
calcular el numero de dosis que se puede obtener de ese eyaculado.
Podemos considerar que la dosis mínima considerada para la IA convencional
tiene una concentración de 2 x 109 espermatozoides, sin embargo, la de uso
mas corriente es de 3 x 109 espermatozoides para semen de buena calidad
espermática, es decir que tenga niveles bajos de morfoanomalias y otras
alteraciones.
En resumen, la fórmula que tendríamos que aplicar dependiendo de la
concentración usada, seria esta:
Una vez envasadas las dosis seminales, deben permanecer a temperatura
ambiente (20-25°C) durante al menos 1.5 a dos horas, para que la temperatura
descienda lo mas gradualmente posible. Pasado este tiempo podemos
almacenarlas en la nevera de conservación de 16°C o en cuarto frio.
CONSERVACION DE DOSIS SEMINALES (MANUAL KUBUS)
Para que el semen diluido mantenga su capacidad fecundante a lo largo de su
almacenamiento en refrigeración a 16°C, es indispensable cumplir las
siguientes condiciones:
1.- el material que este en contacto con el semen debe estar previamente
limpio y esterilizado, sin residuos químicos ni biológicos
2.-utilizar agua purificada contrastada y que no esté alterada bioquímica ni
microbiológicamente
3.- utilizar diluyente de larga conservación
4.-recoger la fracción espermática del eyaculado para reducir las sales que se
encuentran en el plasma seminal
5.- diluir en un periodo inferior a 15 minutos desde la recogida del semen, con
una dilución semen: diluyente entre 1:4 y 1:25; (grado de dilución optimo 1:10)
a 37°C. concentración mínima por dosis 2 x 109 espermatozoides en 100cc y
máxima de 8 x 109 espermatozoides en 100cc.
6.-descener lentamente la temperatura de 37°C a 23°C (durante 1.5-2 horas) a
la temperatura ambiente del laboratorio (entre 20-25°C) y posteriormente
introducir en la estufa de 16°C
7.- conservar en anaerobiosis a 16°C, por lo que no se debe dejar en las
botellas un espacio de aire superior al 20% de su volumen.
8.- comprobar la temperatura en el interior de la nevera de conservación
mediante termómetro de máxima-mínima o la utilización de “data-loggers”
9.-no exponer durante periodos largos de tiempo a luz directa
10.-el semen almacenado debe ser rotado (cada 12 horas para mantener una
homogenización adecuada) que le permita el contacto con los componentes del
diluyente.
11.- las dosis seminales almacenadas antes de ser utilizadas deben ser
observadas en el microscopio (motilidad) para comprobar si guardan la
suficiente viabilidad para ser utilizadas.
12.- en el caso de eyaculados con concentración espermática elevada, que
producen un numero muy alto de dosis seminales, por ejemplo, superior a 30,
es recomendable, cuando se preparan dosis de 85-90cc, realizar una recogida
con mas volumen de semen: entre 100 y 150cc de fracción rica como mínimo,
para mantener una dilución próxima a 1:20-1:25, evitando diluciones superiores
que disminuyen el periodo de conservación.
CANTIDAD DE CELULAS DESTINADAS POR DOS: El número de células por
dosis varia entre centros y esta influenciado por múltiples factores, no se puede
dar una recomendación general para esto, lo más común alrededor del mundo
son recuentos entre 1.5 a 3 billones por dosis y volumen de 30-100ml.
La concentración de células por dosis no debe ser mayor a 60 millones por
mililitro, ya que podría reducir su vida útil.
ANEXOS
Técnicas de contrastación para semen porcino