Elaboración y conservación de dosis seminales

(Bonet et al., 2009)
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Elaboración y conservación de dosis seminales
z
Cálculo del número de dosis seminales por eyaculado: (concentración útil)
A x 107 x V
AxV
Nº de dosis (N) = ----------------- = ----------N
300
3 x 109
V = Volumen del eyaculado en cc
A=E
Espermatozoides
t id contados
t d en 40 cuadrados
d d (0,01
(0 01 mm3)
Número de espermatozoides totales por eyaculado:
¾
¾
¾
¾
z
70
en 1 mm3 = A x 100
en 1 cc = ((A x 100)) x 1.000
en semen puro (dilución 1/100): (A x 100) x 1.000 x 100 = A x 107
Totales en el eyaculado = A x107 x V
El cálculo de la cantidad de diluyente necesario para la preparación de las
dosis seminales (para dosis seminales de 100 cc):
N x 100 = Volumen total (volumen de diluyente + volumen de eyaculado)
N x 100 – V = Volumen del diluyente necesario a añadir
Título de la dilución (1/10 – 1/25): volumen total (N x 100)/Volumen
del eyaculado
z
Los diluyentes deben cumplir dos objetivos principalmente:
–
–
z
Un diluyente permite la conservación de las células espermáticas por:
–
–
–
–
–
–
–
–
z
aumentar el volumen del eyaculado,
eyaculado sin afectar la calidad seminal,
seminal para
aumentar el número de inseminaciones
conservar la capacidad fecundante de los espermatozoides durante el mayor
tiempo posible
su aporte nutritivo (glucosa)
su capacidad
id d tampón
t
ó (bicarbonato
(bi b t sódico,
ódi citrato
it t sódico,
ódi TRIS…
TRIS )
el control de los parámetros físico-químicos (presión osmótica, pH, pK y
fuerza iónica de interacción con el espermatozoide y plasma seminal)
l captación
la
t ió de
d iones
i
C ++, Mg
Ca
M ++ y Zn
Z ++ (sustancias
( t i quelantes
l t como ell EDTA)
el control en la precipitación de las proteínas
el control de la acción enzimática sobre el semen
el control que ejerce sobre el metabolismo de la célula espermática y la
preservación de su membrana
su control sobre la contaminación: la adición de antibióticos (penicilina,
estreptomicina,
i i gentamicina,
i i etc.)) a los
l diluyentes
dil
es esencial
i l para controlar
l ell
crecimiento bacteriano en el esperma de verraco
Tipos de diluyentes:
–
–
–
–
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Diluyente de corta duración: 1-3 días de conservación
Diluyente de media duración: 4-5 días
Diluyente
y
de larga
g duración: 6-8 días de conservación
Diluyente extra-larga duración: hasta 10-14 días de conservación
Composición de varios diluyentes porcinos (1) (Flowers, 2004)
Ingredientes
BTS
Kiev
Modena
Zorlesco
Androhep
37,00
66,00
27,50
11,70
-
-
-
-
-
26 00
26,00
6,00
3,75
6,90
11,70
8,00
Bicarbonato sódico, g/l
1,25
1,25
1,00
1,80
1,20
EDTA (disodio), g/l
1,25
3,70
2,35
2,10
2,40
Cloruro de potasio
potasio, g/l
0 75
0,75
-
-
-
-
Ácido cítrico, g/l
-
-
2,90
3,80
-
Tris buffer (base), g/l
-
-
5,65
6,50
-
HEPES, g/l
-
-
-
-
-
-
-
-
0 10
0,10
-
-
-
-
-
2,50
Neomicina sulfato, g/l
-
-
-
1,00
-
Penicilina G (Na), g/l
0,60
0,60
0,60
-
0,60
Dihid t t i i
Dihidrostreptomicina,
g/l/l
1 00
1,00
1 00
1,00
1 00
1,00
-
1 00
1,00
Sustrato energético
Glucosa (anhidra), g/l
Glucosa (monohidrato),
(monohidrato) g/l
Sistema tampón
Citrato sódico
(2)
, g/l
Estabilización de la membrana
Cisteína g/l
Cisteína,
BSA (fracción V)
Antibióticos
(3)
(1) las fórmulas de los diluyentes se han obtenido de informaciones originales publicadas en artículos.
(2) el EDTA, citrato sódico y otros agentes quelantes también ayudan a la estabilización de las membranas.
(3) el tipo y la cantidad de antibióticos agregados se ajustan a menudo según las situaciones individuales.
72
Conservación en refrigeración:
´
Para que ell semen diluido
P
dil id mantenga
t
su capacidad
id d
fecundante a lo largo de su almacenamiento (15 ºC) es
indispensable cumplir con las siguientes condiciones:
«
«
«
«
«
«
«
«
«
«
«
El material debe estar limpio y esterilizado,
esterilizado sin residuos
químicos
Utilizar agua bidestilada
Utilizar diluyentes
y
de larga
g conservación
Recoger exclusivamente la fracción espermática
Diluir a un período inferior a 15-30 minutos desde la
recogida del semen (grado de dilución óptimo 1:10) a 37 ºC.
C
Concentración
t ió por dosis
d i 2-4
2 4 x 109 espermatozoides
t id en 100
cc
Descender lentamente la temperatura de 37 ºC a 15 ºC
Conservar en anaerobiosis a 15
15-16
16 ºC
C
Evitar las oscilaciones de temperatura durante el período de
conservación. La temperatura crítica en la cual se produce
un daño irreversible en la membrana espermática se
encuentra
t por debajo
d b j de
d los
l 12 ºC
No exponer durante períodos largos de tiempo a la luz
directa
El semen almacenado debe ser rotado (mezclado)
suavemente cada 12 h con objeto de mantener a los
espermatozoides en suspensión con el diluyente
Control de la dilución y conservación: las dosis seminales
almacenadas antes de ser utilizadas deben ser observadas
con el microscopio (motilidad 3 y 70 %)
(Quiles y Hevia, 2008)
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Acondicionamiento de las dosis seminales
Botellas flexibles (60-100 ml)
Bolsas (blisters) (60-100 ml)
Máquina de
envasado
automático
(30-45 ml)
(30-45 ml)
Unidades de inseminación (dosis + catéter)
Tubos soldables (80-100 ml)
(20 cm)
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