INFORME DE PRACTICA N°3 Extracción e identificación de lípidos del suero sanguíneo INTEGRANTES: SALDARRIAGA PONCE, VENUS DAYAN TICONA ARTEAGA, MARIAFERNANDA ROMERO QUISPE, JOSE TARAZONA SALAZAR, JHONATAN FÉLIX DOCENTES: Dr. KARIM LIZETH JIMÉNEZ ALIAGA DRA. AMPARO IRIS ZAVALETA PESANTES DRA. YADIRA FERNÁNDEZ JERÍ MG. ADRIAN ARTURO INTIQUILLA QUISPE 2021 - I INTRODUCCIÓN: Los lípidos son un grupo de compuestos químicamente diversos que van a desempeñar funciones bioquímicas muy variadas. Los lípidos en el organismo provienen tanto de la síntesis “de novo” como de la dieta. Estos lípidos al ser compuestos apolares (insolubles en agua) necesitan un sistema de transporte para su distribución por el organismo. Para poder circular en el plasma, se unen a las apolipoproteínas (proteínas específicas) formando estructuras complejas denominadas lipoproteínas. Las lipoproteínas son estructuras esféricas cuyo núcleo central, hidrofóbico, contiene el colesterol esterificado y los triacilgliceroles (triglicéridos; TG) y está rodeado por una capa hidrofílica externa compuesta de fosfoacilgliceroles, proteínas y colesterol libre. Existen diversos tipos de Lps. Las principales Lps del plasma son: Quilomicrones (QM), lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de densidad intermedia (IDL) lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad (HDL). Entre estas lipoproteínas, los quilomicrones son la que transportan el mayor porcentaje de triglicéridos(90%), las VLDL es el segundo tipo de lipoproteína que más transporta triglicéridos(65%)y las HDL es una importante lipoproteína que se encarga de la eliminación del exceso de colesterol de los tejidos. El mantenimiento de concentraciones de lipoproteínas en sus valores normales es importante para un adecuado funcionamiento de los procesos vitales; si ante un diagnóstico del perfil lipídico encontramos una concentración superior de los valores normales podrían dar problemas como formación de placas ateromatosas generando aterosclerosis; por ello, es importante tener una dieta saludable que permita el mantenimiento en los valores normales de lipoproteínas. (1) Túnez y Galvan indican que la cuantificación de colesterol y triglicéridos en suero es un procedimiento analítico básico en el diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias. Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. (2) En la presente práctica de extracción e identificación de lípidos en el suero sanguíneo se presentarán las principales características de las lipoproteínas que transportan los lípidos en la sangre. Así mismo, se explicará la importancia de la cromatografía (revelado cromatográfico) en la separación de componentes de mezclas basándose en las propiedades fisicoquímicas de los componentes a evaluar. RESULTADOS 1. En función de la estructura deduzca el perfil cromatográfico de los diferentes tipos de lípidos que se obtendrían mediante cromatografía en capa fina. Sugiera los estándares que necesitaría. Revelado cromatográfico Se introduce la placa, una vez finalizado el desarrollo de la muestra, en una cámara saturada de vapores de yodo. Se compara el desarrollo de las muestras con el de los controles y tablas. Tras pocos minutos de exposición al sublimado de yodo, aparecen una serie de fracciones o manchas cuya intensidad y superficie varía con la cantidad de muestra aplicada. El desarrollo cromatográfico de estas muestras proporcionará las fracciones que se muestran esquemáticamente en la siguiente imagen. Representación esquemática de las fracciones lipídicas esperadas para el sistema de solventes empleado. Lehiniger: “Los vapores de yodo reaccionan reversiblemente con los dobles enlaces de los ácidos grasos, confiriendo a los lípidos que lo contengan un color amarillo o marrón”. TIPOS DE LÍPIDOS ESTRUCTURA ESTÁNDARES Ésteres de colesterol Ester de colesterol puro Triglicéridos Trioleína Ácidos grasos Ácidos grasos libres puros Colesterol Campesterol Diacilgliceroles Esfingoielina Fosfolípidos Fosfatidilcolina DISCUSIÓN Durante la realización de la práctica “Extracción e identificación de lípidos del suero sanguíneo” se procedió a colocar en un tubo de ensayo con tapa 1 ml de suero, posteriormente se agrega 2 ml de cloroformo-metanol en relación 2:1. La muestra se colocó en un baño termostatizado a 50°C durante 30 min. Se deja enfriar y esperar pacientemente la separación de las fases. Una vez obtenida la separación de las fases, se procede a centrifugar a 3000 rpm durante 10min y se separa la fase clorofórmica, pasándola a un tubo de vidrio hasta su total desecación. Para la aplicación y desarrollo cromatográfico se re-extrae el extracto seco con 0,5 ml de cloroformo. Además se debe resaltar en la placa cromatográfica, la línea de aplicación, se debe colocar por encima de la mezcla del eluyente presente en la cámara separadora. Se colocan las muestras en determinados volúmenes (5,10 y 20 μL) y se colocan los controles. La placa preparada y lista, se debe introducir en la cámara separadora, conteniendo el solvente adecuado. Para los diferentes tipos de lípidos presentes en la muestra, se debe utilizar el solvente adecuado porque un solvente incorrecto podría interferir en las reacciones, afectando la solubilidad de la muestra.(3) Por último se dejó desarrollar la placa,donde se analizó los lípidos contenidos en suero sanguíneo mediante cromatografía de capa fina, comparando y obteniendo diferentes tipos de lípidos. Estos resultados nos permiten indicar que el suero analizado posee diferentes tipos de lípidos, dichos valores se observan mediante el desplazamiento de la muestra. La muestra se desplaza en la fase estacionaria por acción de la fase móvil. (4) Con la ayuda de los vapores de yodo se mejora la visualización de los lípidos, otorgándole una coloración más amarilla-marrón. CONCLUSIONES - Dada la estructura y funciones de los lípidos es que lo hacen diferentes unos a otros, y deriva en sus funciones biológicas, como en el transporte de proteínas, colesterol, tamaño, etc. - Los diferentes lípidos extraíbles mediante cromatografía son gracias a sus polaridades, ya que esto permite su mayor o menor retención en la fase estacionario usada, utilizando también estándares con caracteres similares a los lípidos sanguíneos. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Bioquímica Humana [Internet]. Ucm.es. 2021 [citado el 5 de noviembre de 2021]. Disponible en: https://www.ucm.es/data/cont/docs/261-2018-11-21-CUADERNO%20DE%20PR%C3%81CTIC AS%20DE%20BIOQU%C3%8DMICA%20HUMANA-2018-19 % 20 (1) .pdf 2. Túnez I, Galván A . Perfil lipídico . Bioquímica y Biología Molecular.https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/25%20PERFIL%20LIPIDICO.pdf 3. Hollum, "Fundamentos de la química general, organica y bioquimica", Editorial Limusa, 2da edición, México, 2011. 4. McMurry, “Química orgánica”, CenaGe Learning, 7ma edición, México, 2008
