Comparación de la calidad y ... muestras de sangre periférica utilizando ...

Comparación de la calidad y cantidad de ADN obtenido a partir de
muestras de sangre periférica utilizando tres métodos diferentes de
conservación
Iglesias-Besteiro N.1, Isidro-Marrón P.1, Martínez-Camblor P.2, Astudillo-González A.1
1Biobanco
2
del Principado de Asturias (BPA), Oviedo
Oficina de Investigación Biosanitaria del Principado de Asturias (OIB-FICYT), Oviedo
INTRODUCCIÓN
El BPA cuenta actualmente con más de
15000 alícuotas de ADN.
Habitualmente, la purificación de ADN tiene lugar el mismo día de la extracción
de la muestra, pero puntualmente puede retrasarse algunos días. Siguiendo las
indicaciones del kit comercial, las muestras de sangre pueden mantenerse en
agitación a temperatura ambiente (TA) hasta 7 días y proceder a la purificación
del ADN posteriormente. Tras observar algunas desviaciones en la calidad y
cantidad de ADN obtenidas en muestras conservadas de esta manera, hemos
probado dos tipos de conservación diferentes, comparándolos con el método
habitual usado en nuestro biobanco.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se han utilizado 11 muestras de sangre-EDTA. Cada una de ellas se ha
dividido en tres alícuotas:



Método A: purificando el ADN el mismo día de la extracción (proceso
habitual)
Método B: conservación agitando a TA durante 4 días
Método C: conservación a 4°C durante 4 días.
El kit de extracción utilizado ha sido el ArchivePure© de 5-Prime y las medidas
de concentración y absorbancia se han realizado con el Nanodrop- Fisher.
RESULTADOS
En cuanto a los ratios de Absorbancia 260/280 que son indicadores de la
calidad del ADN, no existen diferencias significativas, obteniéndose medias de
1.84; 1.95 y 1.96 respectivamente.
En cuanto a la cantidad de ADN obtenido, las medias han sido de 89.29; 35.02
y 50.52 µg respectivamente, observándose diferencias estadísticamente
significativas, siendo el método A el que más cantidad de ADN recupera (pvalor 0.003), seguido del método C y por último el método B (p-valor 0.006).
CONCLUSIONES
Aunque el tamaño muestral es excesivamente pequeño, esta primera
aproximación parece indicar, que evidentemente el mejor método es la
purificación del ADN el mismo día de la extracción y que si esto no es posible,
es mejor conservar las muestras a 4°C que en agitación a TA.