practica 4 - Biología de Procariotas

Manual de biología de procariotas
PRACTICA 4
Preparación, fijación y coloración simple de frotis
Objetivos
1. Aprender las técnicas de preparación de frotis, de fijación y coloración más
utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos
2. Identificar las principales formas bacterianas y la importancia de las tinciones
simples en la caracterización morfológica de estos microorganismos.
Introducción
Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un
microscopio óptico, ya sea de campo claro o de campo oscuro para hacer descripción
morfológica de éstos. El microscopio de uso más común es el de campo claro, en el que la
observación de células vivas es limitada debido a que las células son incoloras y permiten el
paso de una gran cantidad de luz, por tal motivo, la observación de frotis teñidos es más
recomendable. De acuerdo al número de soluciones (colorantes) y a los objetivos de estudio se
pueden realizar diferentes tipos de tinciones como son: simple, diferencial, negativa y selectiva.
Materiales de laboratorio por equipo
Cultivos líquidos y sólidos
1 Microscopio compuesto.
Papel para lente.
Aceite de inmersión.
3 Portaobjetos y cubreobjetos.
Asa bacteriológica
Pipeta Pasteur
Azul de metileno
2 Mecheros
Etanol absoluto
Materiales del equipo
Colores
Marcador indeleble o lápiz graso
Actividad de la práctica
Preparación del frotis
1. Delimitar su área de trabajo y limpiarla
2. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y etiquetarlos, dibujar un
circulo aproximadamente de 2 cm. de diámetro.
3. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al
rojo vivo.
4. Dejar enfriar el asa. Acercar el cultivo (líquido) al mechero y tomar cuidadosamente la
muestra, extendiéndola suavemente en el círculo dibujado. Dejar secar el frotis al aire.
5. Si el cultivo es sólido, previamente se colocará en el centro del círculo una gota de agua
destilada estéril, en la cual se mezclará una pequeña muestra del cultivo. Dejar secar
al aire.
Fijación del frotis
1. Fijar el frotis de cultivos líquidos con dos gotas de etanol absoluto y dejar secar al aire
(hacer esto en zonas lejanas al mechero). Repetir este paso 2 o 3 veces.
2. Fijar el frotis de cultivos sólidos, completamente secos se fijaran con calor (se pasa
rápidamente el frotis por la flama amarilla de la flama, 2 o 3 veces). Palpar la parte
inferior del portaobjeto con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que
no hubo sobrecalentamiento.
Nota: cuida la presentación del trabajo, la ortografía y la redacción, recuerda que es un entrenamiento para tu carrera
profesional y/o científica.
mmgj
Manual de biología de procariotas
Tinción
1. Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 min.
2. Eliminar el exceso de colorante con lavado suave al agua corriente. Dejar secar al aire.
3. observación al microscopio.
Resultados
 Reportar las observaciones de forma, agrupación y tamaño relativo de cada uno de los
microorganismos en el cuadro de resultados.
 Compara sus observaciones con las reportadas en la literatura.
Cultivo sólido:
Forma:
Agrupamiento de células:
Aumento:
Cultivo líquido:
Forma:
Agrupamiento de células:
Aumento:
Cuestionario.
1. Investigue cuales son las estructuras celulares o moleculares responsables de la tinción
simple realizada. De ejemplos de otros colorantes que podrían utilizarse.
2. ¿Por qué se recomienda fijar los frotis de cultivos líquidos con alcohol y no con calor?
3. ¿Por qué se deben poner varias veces muestras del cultivo líquido y solo una muestra
de cultivos sólidos al preparar el frotis?
4. ¿Cuáles son las desventajas o limitaciones de la tinción simple?
Nota: cuida la presentación del trabajo, la ortografía y la redacción, recuerda que es un entrenamiento para tu carrera
profesional y/o científica.
mmgj