Universidad Industrial de Santander Facultad de Salud Escuela de Microbiología Hematología I Guía de Laboratorio Docentes Martha Lucia Sánchez Jaimes Nataly Cruz Rodriguez FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA El frotis de sangre periférica (FSP) Es el reporte de la morfología de las células sanguíneas glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas, que se realiza en un extendido de sangre teñido con alguno de los colorantes de Romanowsky. El FSP es el reflejo de un buen o mal funcionamiento de la médula ósea y de los diferentes factores que influyen en la presencia de células sanguíneas, en calidad y cantidad normales en el frotis de sangre periférica. Equipos, materiales y reactivos Muestra de sangre total anticoagulada con EDTA obtenida por punción venosa o capilar Micropipetas de 1-20 microlitros Puntas para micropipetas Algodón y alcohol Láminas portaobjeto limpias y desengrasadas Laminillas 22 X 22 ó 22 X 30 Gradilla de coloración. Colorante de Wright. Líquido de contraste (Buffer Giordano, líquido tampón de fosfato de pH 7.2, agua destilada ó agua del chorro), Cronómetro. Toalla de papel húmeda Aceite de inmersión Microscopio Procedimiento 1. Realice el extendido y coloréelo con el colorante de Wright teniendo en cuenta las recomendaciones realizadas en las sesiones previas de laboratorio. 2. Una vez realizado el extendido y la coloración coloque una gota de aceite de inmersión unos milímetros arriba de la cola del extendido. 3. Utilizando el objetivo 10X ubique un campo donde los glóbulos rojos apenas se toquen entre sí, cuente el número de glóbulos blancos y haga su apreciación en un promedio mínimo de 3 campos si están entre 15 y 35 reporte los glóbulos blancos como normales en número o aumentados o disminuidos si es mayor o menor el número encontrado en el promedio. 4. Pase al objetivo de 100X y en estos mismos campos proceda a observar la morfología de glóbulos rojos, blancos y plaquetas en un mínimo de diez campos, vaya tomando nota de las anormalidades que va encontrando para poder sacar los promedios posteriormente. Evaluación de glóbulos rojos Con el objetivo de 100X se debe observar la morfología de los glóbulos rojos teniendo en cuenta los parámetros descritos en la siguiente tabla: 1 Universidad Industrial de Santander Facultad de Salud Escuela de Microbiología Hematología I Guía de Laboratorio Martha Lucia Sánchez Jaimes Nataly Cruz Rodriguez Docentes Cada alteración debe ser valorada teniendo en cuenta el número de células alteradas en el promedio de diez campos. El reporte se debe realizar teniendo en cuenta los valores de las siguientes tablas: Valoración de la anisocitosis Normal 0-5 Ligera 6-15 Moderada 16-30 Marcada Mayor a 30 Ligera (+) 6-15 Moderada (++) 16-30 Marcada (+++) Mayor a 30 Ligera (+) 6-15 Moderada (++) 16-30 Marcada (+++) Mayor a 30 Valoración de microcitosis y macrocitosis Normal Hasta 5 Valoración de la poiquilocitosis Normal Hasta 5 En el caso de observar variaciones en la forma de los glóbulos rojos (poiquilocitosis), aparte de informar la valoración general (ligera, moderada o marcada), se debe aclarar qué tipo de formas están presentes y la intensidad de cada una en el promedio de 10 campos. Nombre Informe Moderada (++) 6-15 Descripción Normal Célula espinosa o espicular, esferoidales y exhiben múltiples proyecciones Células muy delgadas, de forma irregular, sobre la membrana celular se observa una pequeña cantidad de Hb . 0 Ligera (+) 1-5 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Codocitos Células hipocrómicas con una distribución en diana de la hemoglobina 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Dacriocitos Células de cola o periforme 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Acantocitos Anulocitos Marcada (+++) Mayor de 15 Drepanocitos Célula delgada, elongado Curvada en forma de hoz fusiforme. 0 1-5 6-15 Mayor de 15 Esferocitos Células que han perdido la forma biconcava, no se observa centro claro. 0 1-5 6-15 Mayor de 15 Eliptócitos Forma elíptica 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Esquistocitos Son células que han sufrido procesos de fragmentación 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Estomátocitos Disco uniconcavo posee zona de palidez central parecida a una hendidura 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Equinocitos Células crenadas. Por lo obedecen a errores técnicos general 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Excentrocitos Eritrocito con la hemoglobina desplazada hacia uno de sus extremos. 0 1-5 6-15 Mayor de 15 Leptocitos Células muy delgadas planas y anchas con diámetros hasta 10-11u 1 2-5 6-15 Mayor de 15 Ovalocitos Forma oval y de mayor tamaño. 1 2-5 6-15 Mayor de 15 2 Universidad Industrial de Santander Facultad de Salud Escuela de Microbiología Hematología I Guía de Laboratorio Martha Lucia Sánchez Jaimes Nataly Cruz Rodriguez Docentes Valoración de la hipocromía Normal 0-5 Ligera (+) 6-15 Moderada (++) 16-30 Marcada (+++) Mayor a 30 Ligera (+) 1.6-2.5 Moderada (++) 2.6-3.5 Marcada (+++) Mayor a 3.6 Valoración de la policromatofilia Normal 0-1.5 Si se observan normoblastos, se debe reportar el porcentaje de éstos en 100 células blancas contadas. Valoración de las inclusiones eritrocitarias Informe Nombre Normal Cuerpos de Howell-jolly 0 Ligera (+) 1-2 Moderada (++) 3-5 Marcada (+++) Mayor de 6 Cuerpos de Pappenheimer 0 1-2 3-5 Mayor de 6 Punteado basófilo 0 1-2 3-5 Mayor de 6 Anillos de Cabot 0 1-2 3-5 Mayor de 6 Valoración del fenómeno de Rouleaux Normal 0 Ligera (+) 1-5 Moderada (++) 6-15 Marcada (+++) Mayor a 15 Evaluación de leucocitos En el FSP se deben evaluar los siguientes parámetros de leucocitos: Numero, forma y recuento diferencial. Número de leucocitos: valorar con objetivo 10X, en tres a cinco campos donde los glóbulos rojos apenas de toquen entre sí, aproximadamente 3 mm arriba de la cola del extendido, se obtiene un promedio de los campos contados el cual debe estar entre 15 y 35 células nucleadas para decir que los leucocitos están normales en número, por el contrario, si está menor o mayor los mencionamos como disminuidos o como aumentados. Forma: a medida que realiza el recuento diferencial observe la forma de las células encontradas y anote cualquier tipo de alteración. Si no encuentra las anormalidades descritas anteriormente o alguna otra que no se haya incluido, informe los leucocitos como normales en morfología. Recuento diferencial: se debe hacer en cien células blancas sin importar su grado de madurez, y diferenciando las células maduras, teniendo en cuenta organizar el reporte en orden de madurez empezando desde la más inmadura. No se deben diferenciar los blastos por líneas, ya que, en la mayoría de los casos, la morfología no nos permite clasificarlos correctamente. Evaluación de plaquetas Se debe realizar la evaluación del número y la forma. Número: se realiza un recuento indirecto donde no se informa el número, sino que se realiza una apreciación para concluir si las plaquetas están aumentadas, disminuidas o normales en número. 3 Universidad Industrial de Santander Facultad de Salud Escuela de Microbiología Hematología I Guía de Laboratorio Docentes Martha Lucia Sánchez Jaimes Nataly Cruz Rodriguez Se considera normal encontrar un promedio de 7 a 21 plaquetas por campo donde los glóbulos rojos apenas se toquen entre sí. Forma: se debe evaluar el estado de agregación, gránulos y tamaño. Se debe informar presencia de macroplaquetas cuando exista más del 30% de la población plaquetaria con tamaño superior a 6 um de diámetro. Si la presencia de plaquetas con tamaño mayor a 6 um es inferior al 30% y superior al 5% y además se acompaña de aumento en el número, se debe informar anisocitosis plaquetaria. Si no se observan alteraciones en la forma y el tamaño, se reportan como normales en morfología. Bibliografía Atlas de Hematología. Aura Rosa Manscero. 1a edición 2014. Editorial Javeriana. Hematología, Principios Básicos para la Práctica. Aura Rosa Manascero, Hugo Diez, Viviana Rodríguez, Marlene Acosta. 2a edición 2011. Editorial Javeriana. Hematologia. Fundamentos y aplicaciones clínicas, Rodak. 2ª edición, editorial Panamericana. Reporte del cuadro hemático - automatización y su relación con el FSP, AURA ROSA MANASCEROS, Universidad Javeriana. 4
