EXTRACCIÓN DE ADN DE CÉLULAS VEGETALES (Plátano) PRÁCTICA 14 PROFESORA: ESPERANZA PADILLA GÓMEZ. OBJETIVO • En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de pulpa de plátano poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de larguísimas cadenas de esta molécula. Tras la extracción se realizará una tinción específica del ADN obtenido. MATERIALES NECESARIOS - Un plátano - Batidora de mano o mortero, - Matraz - Filtro tipo cafetera - Embudo para filtrar - Alcohol 96º muy frío - Pipeta Pasteur - Tubo de ensayo - Gradilla - Vaso para batir - Agua destilada - Espátula - Vaso de precipitados - Detergente tipo lavavajillas - Un poco de sal común FUNDAMENTO • El ADN se encuentra en el interior del núcleo de las células (también algo de ARN. Para extraerlo habrá que romper membranas y posteriormente provocar su precipitación. Una vez precipitado (masa blanquecina) realizaremos una tinción para facilitar su visualización. PROCEDIMIENTO • 1.- Poner a enfriar alcohol etílico en tubos de ensayo. Es muy importante que el alcohol esté bien frío y preservar en frío hasta que sean necesarios. • 2.- Batir un plátano en 250 mL de agua destilada o en su defecto agua mineral. En el caso de no disponer de batidora en el laboratorio, machacar un trozo pequeño de plátano en un mortero y añadir agua mineral (aprox 20 mL) hasta formar un puré homogéneo. PROCEDIMIENTO • 3.- Por otra, parte en un vaso de precipitado mezclaremos una cucharada de detergente con un poco un poco de sal común. (0.2 g aprox). • 4.- Añadir a la mezcla de detergente 5 mL de agua destilada o mineral. • 5.- Añadir ahora tres cucharaditas del puré de plátano a la mezcla anterior y mezclar con espátula durante 5 o 10 minutos evitando formar espuma. PROCEDIMIENTO • 6.- Con los pasos anteriores hemos conseguido liberar el ADN en la disolución acuosa, la cual contendrá también diversos restos tisulares y celulares. Para eliminar estos restos dejamos filtrar la solución durante varios minutos en papel de filtro de cafetera o un paño de algodón suave, hasta obtener unos 3-4 mL de filtrado. • 7.- Para precipitar el ADN separándolo de la disolución, se toma una parte del filtrado con una pipeta pasteur y se añade suavemente al tubo de ensayo que contiene alcohol muy frío. El filtrado, más denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 o 3 minutos sin moverlo en absoluto. PROCEDIMIENTO • 8.- Veremos precipitar ADN de color blanco en la interfase con el alcohol y ascender lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso. • 9.- Podemos teñirlo añadiendo unas gotas de azul de metileno o verde metilo al tubo o después en el porta. • 10.- Se puede extraer el ADN con unas pinzas metálicas o con una varilla de vidrio. PROCEDIMIENTO • 11.- Ahora se pone ese ADN en un porta y se tiñe con azul de metileno durante tres minutos. Se cubre con un cubre y se observa al microscopio. • 12.- Otra posibilidad es conservar el ADN obtenido en un tubo bien cerrado con alcohol etílico al 70%.
