Documento 823557

Complejo Educacional Alberto Widmer
Departamento de Biología y Ciencias
Profesor: Solange Olivares Forton
Laboratorio: Aislamiento de ADN
El ADN (Acido Desoxirribonicleico) es el material hereditario presente en todas las células
vegetales, animales, bacterias y algunos virus. Existen diversas técnicas para obtenerlo, aislarlo y
trabajar con él en distintos ámbitos de Biología Molecular y Biotecnología.
Objetivos:
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Identificar de forma microscópica la estructura fibrilar del ADN.
Analizar la actuación de las sustancias empleadas para la obtención de ADN.
Materiales:
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1 par de guantes quirúrgicos
1 procesadora de alimentos (licuadora o similar)
300 grs. De una muestra biológica vegetal, lavada y cortada en trozos (plátano)
500 ml. De agua destilada
3ml. De alcohol absoluto (etanol) o alcohol isopropílico
2 grs. De NaCl (sal)
1 ml. De detergente liquido (no quix)
2 ml. De proteasa (Jugo de piña o papaya)
2 tubos de ensayo
1 vaso de precipitado de 1000 ml.
1 probeta de 50 ó 100 ml.
Pipetas de 5 ml. Y de 10 ml.
2 vasos o frascos de vidrio de 50 ml.
2 pipetas de Pasteur
1 paleta de plástico
papel filtro de cafe.
Instrucciones:
1.- Lavar, cortar y poner en la procesadora toda la muestra vegetal. Agregar 500ml. De agua
destilada, tapar y procesar hasta obtener un preparado cremoso. El objetivo es la ruptura o lisis del
tejido.
2.- En un vaso de 50 ml, separe 30 ml. De la muestra ya procesada.
3.- En un tubo de ensayo, solución tampón salina con: 2grs. De NaCl, 1 ml de detergente, 5ml. de
agua destilada.
4.-Agregue el tampón a su muestra. Mezcle con la paleta plástica, sin hacer espuma. El tampón
provoca la rotura de las membranas citoplasmatica y nuclear, por acción conjunta de sal y
detergente, que rompen las células y liberan sus componentes y al ADN y proteínas asociadas (por
ejemplo las histonas).
5.- Agregue 2ml. De proteasa. Mezcle bien, cuidando de no producir exceso de espuma. Así
destruye las proteina asociadas al ADN.
6.- En un vaso o frasco de vidrio limpio, filtre la muestra con grasa o papel filtro.
7.- Pipetee 10 ml. Del filtrado y póngalo en un tubo de ensayo limpio.
8.- Incline un poco este tubo de ensayo y con una pipeta limpia, deje deslizar suavemente 5 ml. De
alcohol sobre el filtrado. Observe la formación de una interfase entre el filtrado y el alcohol. El ADN
migra hacia el alcohol, aislandose de los otros componentes celulares, que permanecen en la fase
acuosa.
9.- Con una pipeta Pasteur, revuelva suavemente a nivel de interfase. Observe la reacción.
Describa lo obtenido en relación a su estructura y color.
10.- Anote el resultado final ¿Cuál es su conclusión respecto a la estructura del ADN?
11.- Describa 5 etapas en la obtención del ADN y el rol del equipo y reactivos usados en esta
actividad práctica.