CARACTERES DISTINTIVOS DE LOS PROCARIOTAS Células procariotas Procariotas vs. Eucariotas CÉLULA MATERIAL GENÉTICO ORGANIZACIÓN DEL CITOPLASMA MEMBRANA PLASMÁTICA MOVILIDAD PROCARIOTA Una sola molécula circular de ADN doble cadena. Está contenido en una región concreta del citoplasma (nucleoide), sin estar separado por membrana. Es frecuente encontrar unidades de replicación autónomas extracromosómicas (plásmidos). No hay histonas unidas al ADN. No existe un sistema de endomembranas. Los ribosomas son 70S Carecen de esteroles, salvo los micoplasmas (pero en este caso los esteroles proceden del hospedador), algunas especies de cianobacterias y de bacterias melitotrofas. Mediante flagelo (diferente al eucariota) EUCARIOTA Varios cromosomas de ADN doble cadena lineal. El extremo de los cromosomas contienen secuencias teloméricas. Existe membrana nuclear e histonas adheridas al ADN. Sistema de endomembranas interno que forma las organelas (mitocondrias, cloroplastos, retículo endoplásmico, Golgi, lisosomas, etc.) Los ribosomas son 80S Poseen esteroles. Mediante cilios y flagelos PARED CELULAR Peptidoglicano Celulosa en plantas y quitina en hongos. CONTENIDO CITOPLASMÁTICO 70% H2O Las macromoléculas constituyen la porción mayoritaria de la masa celular (96%), las proteínas representan más de la mitad. Poseen una proporción de ARN superior a la de los eucariotas. 90% H2O La mayor parte de los compuestos son semejantes a los de eucariotas, pero hay dos que son exclusivas de los procariotas: lipopolisacárido (exclusivo de Gram-negativas); peptidoglicano (presente en eubacterias Grampositivas y Gram-negativas). 1 Estructura de la célula procariota Cápsula o capa mucilaginosa (glucocalix) Capa externa a la pared celular (también es una capa mucilaginosa). Su composición varía según el tipo de microorganismos. Los polisacáridos que la forman intervienen en la fijación de microorganismos a tejidos específicos del huesped. Capa S paracristalina Capa que, en muchas eubacterias envuelve a la pared celular. Está formada por el ensamblaje de subunidades idénticas de proteínas o glicoproteínas. En Gram negativas la capa S se une a la membrana externa, mientras que el Gram positivas lo hace al peptidoglucano. En muchas Arqueas es la única capa que rodea al protoplasto, por lo que en ellas cumple funciones de auténtica pared celular. Pared celular Estructura rígida que le da forma y resistencia (a excepción de micoplasmas). Químicamente está formada por péptidoglicano o mureína, un polisacárido. Vaina Son estructuras tubulares compuestas de un heteropolímero (proteína, lípido y polisacárido) que engloban a conjuntos de células bacilares en cadenetas o filas. La vaina está en contacto con la pared celular subyacente, pero no hay enlaces entre ambas. Botones de anclaje Son acúmulos de mucopolisacáridos ácidos, segregados en puntos concretos de la célula, a nivel de pared celular. Facilitan la unión de las bacterias que los poseen a sus sustratos pared celular 2 Protoplasto Formado por la membrana plasmática (puede presentar ciertas invaginaciones hacia el citoplasma denominadas mesosomas) y el citoplasma. Nucleoide Región del citoplasma que contiene una única molécula de ADN circular denominada genóforo o cromosoma bacteriano y diversas proteínas (ARNpol, ADN Pol y proteínas básicas que cumplen una función parecida a las histonas eucariotas permitiendo y estabilizando el superenrollamiento del ADN). Genóforo o genoma bacteriano Constituido por un cromosoma y en algunas especies uno o varios plásmidos (elementos genéticos extracromosómicos). Ribosomas Son 70s, estructuralmente diferentes a los eucariotas (80s). Están compuestos por dos subunidades (50s y 30s) que se pueden encontrar libres en el citoplasma o unidos a moléculas de ARNm formando los polirribosomas Inclusiones Son sustancias inertes presentes en el citoplasma, donde son almacenados nutrientes, productos de excreción, y gránulos de pigmento (ej: gránulos de azufre en bacterias reductoras). Gránulos de reserva Los principales son de ácido polihidroxibutírico, polifosfato o polímeros de glucosa (similares a glucógeno y almidón) Apéndices filamentosos Las bacterias pueden presentar apéndices de naturaleza proteica que se clasifican en dos grandes tipos: flagelos, relacionados con la movilidad y las fimbrias y pelos, relacionadas con los procesos de adherencia. 3 Tamaño y forma de las células bacterianas Tamaño Las bacterias suelen presentar un tamaño menor que el de una célula eucariótica, sin embargo, existe un amplio rango de tamaños, según las especies: Una bacteria grande es Beggiatoa gigantea, con un tamaño similar al de muchas células eucarióticas (40 mm), o Epulopiscium, un comensal del intestino del pez cirujano que mide 0,5 mm de longitud. Thiomargarita alcanza Una bacteria relativamente pequeña es Haemophilus influenzae, que mide 0.25 x 1.2 mm. Los organismos celulares cultivables más pequeños que existen son los micoplasmas, muchos de los cuales no superan los 0.2 mm de diámetro. Las nanobacterias o ultramicrobacterias miden en torno a 0.05 mm. Forma 4 Cocos Forma redondeada. Según el plano de división y si se produce la separación completa de las células hijas después de la división pueden ser: Micrococos (células individuales) Diplococos (parejas) Tétradas (4 célula agrupadas en un plano) Sarcinas (8 células formando un cubo) Estreptococos (en cadenas) Estafilococos (en agrupaciones en forma no definida que recuerdan a los racimos de uvas). Bacilos Cocobacilos: cortos, de forma ovoidal Bacilos rectos: extremos planos Bacilos fusiformes: extremos en punta Diplobacilos: en parejas Estreptobacilos: en cadena. Bacilos en empalizada: debido a giros de 180°. Bacilos en ángulo: en forma de letra V o L. Bacilos formando “letras chinas”. Vibrio Son ligeramente curvos, recordando a una coma ortográfica. Espirilos Son espirales rígidas de pocas espiras. Espiroquetas Son hélices flexibles muy finas y con un gran número de espiras. Posición del Flagelo Otro aspecto importante en la morfología bacteriana es la disposición de sus apéndices locomotores o flagelos. Aunque existen bacterias inmóviles carentes de flagelos, existen cinco tipos básicos de flagelación: Polar (un flagelo en un extremo) Bipolar (un flagelo en cada extremo) Lofotrica (un grupo de flagelos en un extremo) Anfitrica (un grupo de flagelos en cada extremo) Peritrica (los flagelos se distribuyen uniformemente por toda la superficie). 5 Pared celular La mayor parte de los procariotas posee una pared celular (P.C.) rígida rodeando al protoplasto. Las excepciones son los micoplasmas y algunas arqueas, como Thermoplasma. Las paredes celulares más frecuentes en eubacterias siguen dos modelos alternativo: Gram-positivo o Gramnegativo. Unas pocas eubacterias (como las del gén. Planctomyces) poseen paredes a base de proteínas. Las Arqueas poseen paredes diferentes a las de eubacterias y se pueden agrupar en diversos tipos. Paredes de las eubacterias Peptidoglicano Consisten en una capa rígida de peptidoglicano (= mucopéptido o mureína), que en Gram-positivas se encuentra inmerso en una matriz aniónica de polímeros azucarados y en Gram-negativas está rodeada por una membrana externa, e inmersa en un espacio periplásmico. En las bacterias Gram-positivas el peptidoglucano representa el componente mayoritario de la pared celular (50-80% en peso), mientras que en Gram-negativas supone sólo del 1 al 10%. En Gram-positivas forma una capa mucho más gruesa que en Gram-negativas. En ambos casos está formado por: Cadenas lineales de un polisacárido formado por residuos alternativos de Nacetilglucosamina y N-acetilmurámico unidos mediante un enlace (1β 4) El N-acetilmurámico está unido a un tetrapéptido (segmento de 4 aminoácidos) que se caracteriza por poseer D-aminoácidos. La composición del tetrapéptido es ligeramente distinta en Gram-positivas y Gram-negativas Los distintos tetrapéptidos están conectados entre sí, bien a través de puentes de pentaglicina (pentapéptido formado por 5 glicinas), como ocurre en las Gram-positivas, bien directamente, como ocurre en las Gramnegativas. 6 Ácido Teicoico y Lipoteicoico Junto a los peptidoglicanos, forman parte de la pared de bacterias Gram-positivas: Los ácidos teicoicos: son polímeros de un polialcohol (glicerol o ribitol). Forman parte de la gruesa capa de peptidoglicano que rodea a la membrana plasmática y están directamente unidos a él mediante un enlace fosfodiéster. De este modo pueden conectar varias capas de peptidoglicano. Los ácidos lipoteicoicos: atraviesan totalmente la capa de peptidoglicano porque están integrados en la membrana plasmática por medio de dos cadenas de ácido graso. Constan de un polímero lineal formado por entre 16 y 40 unidades de glicerol-fosfato, unido a un glicolípido que varía según las especies y que permite a la molécula integrarse en la membrana plasmática. Lipopolisacáridos Los lipopolisacáridos (LPS), junto con los peptidoglicanos, forman parte de la pared de la pared celular de las bacterias Gram-negativas. Tienen carácter anfipático, presentan carga negativa, y repelen moléculas hidrofóbicas. Son tóxicos para el hombre, y también se llaman endotoxinas. El LPS se compone de dos partes: El lípido A, que está formado por dos N-acetilglucosaminas (GlcNAc) fosforiladas. Las GlcNAc están unidas a 6 cadenas saturadas de ácido graso y que permiten anclar el PLS en la membrana externa de las bacterias Gram-negativas. Una cadena de polisacárido compleja, en la que se distinguen dos zonas: el núcleo (un oligosacárido que está unido a una de las GlcNAc del lípido A) y el antígeno-O (3 a 5 monosacáridos que se repiten). Es el causante de la respuesta inmunológica que provocan estas bacterias. Pared Celular de las Arqueas Exceptuando el género Thermoplasma, carente de pared celular, las demás arqueas poseen por encima de la membrana citoplásmica algún tipo de estructura con funciones de pared celular. En muchos casos las funciones de pared celular son ejercidas simplemente por una capa S paracristalina, a base de disposición regular de subunidades idénticas de una proteína o glucoproteína. En ciertas arqueas de ambientes extremos, esta capa S está estabilizada por factores de esos ambientes: En el halófilo obligado Halobacterium las subunidades de glucoproteína se estabilizan por altas concentraciones de ión Sodio. 7 Tinción de Gram 1) Colocar un inóculo de la muestra en un portaobjetos y fijar por calor pasando la parte inferior del portaobjetos (donde no están las bacterias) por la llama de un mechero. La preparación se trata con un primer colorante llamado violeta cristal o violeta de genciana. El cristal violeta (colorante catiónico, se une a componentes celulares de carga negativa) penetra en todas las células bacterianas a través de la pared bacteriana. 2) A continuación se añade una solución de lugol, que está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio). Actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta (precipita). En este momento todas las bacterias están teñidas de color violeta. 3) Luego se realiza una descoloración una mezcla de etanol y acetona. La mezcla de alcohol-acetona puede disolver el complejo I2/cristal violeta. Las bacterias Gram-negativas pierden el color violeta, mientras que las Gram-positivas resisten el tratamiento, y retienen el colorante violeta. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de los microorganismos gram positivosy forma una barrera que el colorante no puede atravesar. En las células gram negativas, los lípidos de la pared (más abundantes que en las células grampositivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo. 4) Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste: se trata de un colorante de color rojo o rosa, como la fucsina o la safranina. Este colorante tiñe ahora a las bacterias previamente descoloradas por el etanol. Por lo tanto, el resultado en la observación al microscopio es que las bacterias Gram-positivas se ven de color violeta, y las Gram-negativas de color rosa o rojo. Las siguientes bacterias de naturaleza grampositiva se tiñen como gramnegativas: Mycobacterias (están encapsuladas). Mycoplasmas (no tienen pared). Formas L (pérdida ocasional de la pared). Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared, respectivamente). 8