AGAR DE DEXTROSA Y PAPA USO Para cultivo y recuento de hongos y levaduras en productos lácteos, bebidas embotelladas y alimentos. Como medio preparado (Catálogo 1059-P) para la cuenta de hongos y levaduras en líquidos. PRINCIPIO La infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias. Cuando se va a usar para el recuento de hongos y levaduras, agregar al medio de cultivo una vez esterilizado y enfriado aproximadamente a 45ºC, 14 ml de una solución estéril de ácido tartárico al 10% para obtener un pH aproximado de 3.5. Sembrar el medio de cultivo por estría en la superficie o adicionar la muestra para la técnica de vaciado en placa. Incubar hasta 7 días a temperatura ambiente. FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA Agar..... ....................................15.0 Dextrosa...................................20.0 Infusión de papa.......................4.0 Ph............................................. 5.6 ± 0.2 PREPARACION Rehidratar 39 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar de acuerdo a la técnica a seguir en cajas de Petri estériles. Cuando se requiera el medio inclinado en tubo, distribuirlo antes de esterilizar. Si se acidifica el medio, no sobrecalentar y fundir solo una vez, para evitar la hidrólisis del agar. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Candida albicans Saccharomyces cerevisiae Trichophyton mentagrophyte Aspergillus niger CEPA RESULTADO ATCC 10231 Colonias crema, lisas ATCC 9763 Colonias crema, lisas ATCC 9533 Colonias blancas, reverso blanco A marrón, algodonosas. ATCC 16404 Colonias de apariencia lanosa de blanco a negro, reverso amarillo BIBLIOGRAFIA Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 13th De. APHA. Inc, New York 1960 American Public Health Association. Compendium of Methods for the Microbiological examination of foods. Segunda Edición. 1984 Medio SIM El medio SIM se utiliza para la diferenciación de microorganismos sobre la base de la producción de sulfuro de hidrógeno, la producción de indol y la motilidad en un entorno de laboratorio. El medio SIM no está destinado a ser utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones en humanos. Los medios semisólidos se han utilizado ampliamente en la determinación de la motilidad bacteriana. La producción de sulfuro de hidrógeno, formación de indol y motilidad son pruebas diagnósticas útiles en la identificación de Enterobacteriaceae, especialmente Salmonella spp. y Shigella spp. En 1940, Sulkin y Willett demostraron la motilidad, producción de sulfuro de hidrógeno y fermentación de carbohidratos por miembros de los grupos de Salmonella y Shigella. Señalaron el “crecimiento parecido a un cepillo” o la motilidad de los organismos tifoideos. Greene et al. Usaron el medio SIM para detectar la motilidad en una amplia gama de cultivos de organismos tifoideos. Fórmula Litro Digerido enzimático de caseína ..............20 g Digerido enzimático de tejido animal........6.1 g Citrato amónico férrico .............................0.2 g Tiosulfato de sodio.....................................0.2 g Agar............................................................3.5 g pH Final:..................................................... 7.3 ± 0.2 a 25°C La fórmula se puede ajustar y/o complementar según sea necesario para cumplir con las especificaciones de rendimiento. Instrucciones 1. Disuelva 30 g del medio en un litro de agua purificada. 2. Caliente con agitación frecuente para disolver completamente el medio. 3. Autoclave a 121°C durante 15 minutos. CARACTERISTICAS Medio de cultivo deshidratado: color beige, homogéneo, libre des- lizamiento. Medio de cultivo preparado: color ámbar. ALMACENAMIENTO Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC. PROCEDIMIENTO SIEMBRA por punción profunda utilizando aguja de inoculación recta. inocular el centro del tubo, y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. INCUBACION En aerobiosis. a 35-37 °C, durante 18-24 horas. INTERPRETACION DE RESULTADOS observar la movilidad y el color del medio de cultivo. luego realizar la prueba de indol. MOVILIDAD Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra. PRODUCCION DE SH2: Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color. PRUEBA DE INDOL: Agregar al medio de cultivo 3 a 5 gotas de indol reactivo (ReF B1550361). Resultado positivo: color rojo. Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece in- coloro-amarillento. Agar extracto de glucosa triptona (Agar de glucosa y tripcaseina) El agar extracto de glucosa triptona se utiliza para el cultivo y enumeración de microorganismos en productos lácteos y agua embotellada en un entorno de laboratorio. El agar extracto de glucosa triptona no está destinado a ser utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones en humanos. En los 1930, Bower y Hucker desarrollaron un medio para detectar bacterias en la leche y otros productos lácteos. Prickett utilizó un agar glucosa que contenía triptona para estudiar bacterias termófilas en la leche. En 1948, la Asociación Americana de Salud Pública (APHA) adoptó el agar extracto de glucosa triptona para su uso en las pruebas de leche y productos lácteos. Actualmente, la APHA especifica el agar extracto de glucosa triptona para el procedimiento de recuento heterotrófico en placa en pruebas de agua embotellada. El agar extracto de glucosa triptona también se conoce como agar levadura dextrosa. Fórmula Litro Extracto de carne de res......................3 g Digerido enzimático de caseína...........5 g Dextrosa...............................................1 g Agar......................................................15 g pH final: ...............................................7.0 ± 0.2 a 25°C La fórmula se puede ajustar y/o complementar según sea necesario para cumplir con las especificaciones de rendimiento. Instrucciones Suspenda 24 g del medio en un litro de agua purificada. Caliente con agitación frecuente e hierva durante un minuto para disolver completamente el medio. Autoclave a 121°C durante 15 minutos.
