INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ Ingeniería bioquímica Microbiología 18 de marzo del 2018 PRACTICA 3 MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVO Y DIFERENCAL García Aguilar Mayela, Sarmiento Gómez Erick Javier, Velasco Velasco Diana Karen, Victoria Ruiz Laura Lizeth Resumen Se realizó la inoculación por estría cruzada en condiciones de asepsia de Escherichia coli y Bacillus subtillis en agar SalmonellaShigella, XLD, Bilis verde brillante y MacConkey, así también de Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermis en agar Estafilococos y ASM. Enseguida se incubo a 35°C, habiendo realizado previamente prueba de esterilidad de 48 horas. Finalmente, se evaluó el crecimiento, la morfología macroscópica y se realizó tinción de Gramm en las cajas donde hubo crecimiento. Palabras clave: Medio selectivo, Medio diferencial, crecimiento bacteriano. Introducción Gran parte de los estudios en microbiología depende de la capacidad de cultivar y mantener microorganismos en un laboratorio y esto es sólo posible si se dispone de los medios de cultivo adecuado. Un medio de cultivo es una preparación líquida o sólida utilizada para el crecimiento, transporte o mantenimiento de microorganismos. Si se desea utilizar para el crecimiento, deberá contener todos los nutrientes esenciales para ese microorganismo concreto. (Prescott, 2004) Los medios de cultivo se utilizan para diferentes propósitos: aislamiento de ciertos tipos de bacterias, el mantenimiento de los cultivos para su uso posterior y para facilitar el reconocimiento de algún tipo de bacteria en particular. Para estos fines se han desarrollado una gran cantidad de medios, los cuales, con base en su uso o función, se han clasificado como medios selectivos, diferenciales, de mantenimiento, entre otros. (Garcia, 2007) La selección del medio de cultivo depende, principalmente, del tipo de microorganismo empleado y del producto que se quiera obtener. Por ejemplo, si se desea producir biomasa, se debe emplear un medio de cultivo que incentive la reproducción del microorganismo. (Hernandez, 2003) Los medios selectivos favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Las sajes biliares o colorantes favorecen el crecimiento de bacterias Gram negativas. al inhibir el crecimiento de las Gram positivas, sin afectar a las primeras. Los medios diferenciales son medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de los microorganismos, según sus características biol6gicas. (Prescott, 2004) Objetivo Seleccionar los medios de cultivo en base a su función y composición química. Determinar la morfología macroscópica de las cepas en los diferentes medios. realizar tinción de Gramm en las cajas donde hubo crecimiento. Metodología Se prepararon los medios de cultivo siguientes conforme a las indicaciones del fabricante: XLD, Salmonella Shigella agar, Agar para estafilococos, Agar bilis verde brillante, Agar sal y manitol y Agar Mc. Conkey y fueron sometidos a prueba de esterilidad. Posteriormente cuando se verificó en los medios dicha prueba, se procedió a inocularlos por técnica de estría cruzada con los siguientes microorganismos: para XLD, Agar Salmonella Shigella, Agar verde bilis brillante y Agar Mc. Conkey E. coli, B. subtillis y muestra problema; Agar para estafilococos y Agar sal y manitol S. aureus, S. epidermis y muestra problema. Las cajas inoculadas fueron incubadas de 24-48 horas a 35°C. A continuación, se procedió a realizar la tinción de Gram para las cajas que mostraron mayor crecimiento de colonias de las cepas E. Coli, S. aureus y muestra problema del siguiente modo. Colocar el puente de tinción sobre el cristalizador, con el portaobjetos, sobre él una gota pequeña de agua destilada, seguidamente se tomó en condiciones asépticas inoculo de la cepa, se suspendió en el portaobjetos con ayuda del asa, y se secó al mechero, se colocó cristal violeta por 1 minuto, después se lavó con agua para que se agregara yodo-Lugol por 1 minuto y se enjuagó, se cubrió la muestra alcoholacetona entre 15 seg – 30 seg y se lavó. Finalmente se añadió safranina por 15 seg- 1 minuto, se lavó, se dejó secar y se observó al microscopio. INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ Ingeniería bioquímica Microbiología 17 de abril del 2018 Conclusion Resultados y discussion Bibliografía Garcia, V. (2007). Introduccion a la microbiologia . EUNED. Hernandez, A. (2003). Microbiologia industrial . Prescott, L. M. (2004). Microbiologia. McGrawHill/Interamericana.
