correccion dna de doble hebra de caminos metabolicos

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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
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ES 2 075 835
kInt. Cl. : A61K 31/70
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ESPAÑA
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C07H 21/00
TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA
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kNúmero de solicitud europea: 88306419.8
kFecha de presentación : 13.07.88
kNúmero de publicación de la solicitud: 0 299 745
kFecha de publicación de la solicitud: 18.01.89
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54 Tı́tulo: Corrección con ARN de doble cadena de una insuficiencia en la ARN-asa L.
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73 Titular/es: Hem Pharmaceuticals Corp.
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72 Inventor/es: Carter, William A.
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74 Agente: Carpintero López, Francisco
30 Prioridad: 17.07.87 US 74649
12280 Wilkins Avenue
Rockville, MD 20852, US
45 Fecha de la publicación de la mención BOPI:
16.10.95
45 Fecha de la publicación del folleto de patente:
16.10.95
Aviso:
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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes,
de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar
motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposición (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas).
Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid
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DESCRIPCION
Desde el punto de vista histórico, numerosas linfoquinas humanas (interferones, interleuquinas, factores de necrosis tumoral, etc.) han
demostrado tener una modesta utilidad clı́nica,
hasta la fecha, en la mayor parte de las neoplasias
e infecciones vı́ricas crónicas en el ser humano.
Principalmente, se puede deber a que estas linfoquinas sólo potencian la parte “corriente arriba”
de una compleja cascada bioquı́mica; por ejemplo, pueden operar al nivel de un receptor de la
superficie celular para los polipéptidos o en el mecanismo precoz de inducción del enzima 2’-5’ A
sintetasa.
Por el contrario, describo en el presente documento un nuevo defecto en un componente más
crı́tico y terminal de la vı́a de acción de la linfoquina/defensa natural, concretamente una anomalı́a en la ARN-asa L, anomalı́a o defecto que,
de no corregirse puede conducir a un crecimiento
incontrolado de células tumorales, ası́ como a
la proliferación de diversos virus en las células
huéspedes. Ahora describo tanto el nuevo defecto bioquı́mico en la modulación de la ARNasa L, ası́ como el procedimiento absolutamente
nuevo para corregir de forma estable los citados
defectos. La corrección estable de estos defectos
mediante ARNds en general y ARNds mal emparejados, en particular, se halla asociada a espectaculares cambios clı́nicos, que incluyen la renovación de diversos tumores por el organismo, ası́
como la reaparición de una capacidad de amplio
espectro para inhibir diversos patógenos vı́ricos y
fúngicos que, a menudo, afectan a los pacientes
de cáncer y a otros individuos de varios grupos
de “alto riesgo”.
Antecedentes de la invención
Las linfoquinas tienen una eficacia limitada en
el control de los tumores humanos (Carter y col.,
J. Biol. Res. Mod., Vol. 4:613, 1985), o de los
virus humanos (véanse las referencias citadas en
Montefiori y Mitchell, Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S., Vol. 84, página 2985, 1987). En un intento
de potenciar sus actividades, los cientı́ficos han
estudiado la posibilidad de combinar estos polipéptidos naturales con otros diversos compuestos.
2-5A Sintetasa : Por ejemplo, Rosenblum y
Guterman (Proc. Am. Assoc.Cancer Research,
Vol. 26, Marzo 1985, página 280, Abstract
n◦ 1105), combinaron interferón (IFN) con ARNds. Comunicaron una “impresionante actividad
sinérgica antiproliferativa” sobre el melanoma humano en cultivo celular mediante concentraciones
subeficaces de ARNds e IFN administrados conjuntamente. Sin embargo, observaron que la sinergia estaba “limitada a la actividad antivı́rica
antiproliferativa del IFN”. Registraron incrementos de la 2’-5’ oligo A sintetasa mediante el enfoque de combinación, pero reconocieron que las
“propiedades antiproliferativas sinérgicas de esta
combinación pueden no estar mediadas por un
efecto sobre la 2’-5’A.” Por el contrario, se registra un incremento de la 2’-5’ A sintetasa tras
la terapia con IFN solo en el tratamiento de la
infección vı́rica de la hepatitis B crónica (CHB)
(Furuta y col., J. Interferon Res., Vol 7, página
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111). Por lo general, sin embargo, los intentos
de utilizar la actividad de la 2’-5’ A sintetasa en
los linfocitos de sangre periférica (PBL) como un
marcador para determinar el grado de sensibilidad de diversos tumores o virus a las linfoquinas
han sido, en cierta medida, decepcionantes.
Creo que ello se debe a que la 2’-5’ A sintetasa
es sólo uno de los diversos enzimas situados precozmente en la cascada bioquı́mica inducida por
las linfoquinas y, en especial, porque la 2’-5’ A
sintetasa puede ejercer principalmente una acción
antivı́rica o antitumoral a través de la activación
de un enzima más distal en la(s) vı́a(s) denominada(s) ARN-asa L. Una reciente descripción de
la 2’-5’ oligo A sintetasa demostró que era altamente inestable en presencia de ARNds (Rovnak
y Ranu, J. Interferon Res. Vol 7, página 231,
1987).
El uso de ARNds mal emparejado en el tratamiento del cáncer, enfermedades inmunológicas o
vı́ricas aparece descrito en el documento EP-A-0
213 921.
Recientemente, he establecido un nuevo papel
para el ARNds, en el sentido de corregir numerosas aberraciones en la ARN-asa L, las cuales
puedo demostrar que son también de importancia terapéutica para el éxito del tratamiento del
cáncer y enfermedades inmunológicas y vı́ricas.
ARN-asa L: LA ARN-asa L, cuando se activa
adecuadamente, se asocia con el desdoblamiento
especı́fico del ARN vı́rico y, presuntamente, de los
ARN celulares aberrantes asociados con el fenotipo de las células malignas (proliferación incontrolada). En una reciente publicación (Lancet, 6
de Junio de 1987, Vol. 1, pág. 1286), he descrito
un defecto diferente en la ARN-asa L, secundario
a la elaboración de un inhibidor del VIH (Virus
de la Inmunodeficiencia Humana) de ARN-asa L.
He diseñado un régimen terapéutico eficaz consistente en esquemas de dosificación de ARNds que
permiten, ya sea por mecanismos directos o indirectos de acción, el desplazamiento del inhibidor
del VIH de la ARN-asa L, lo que da como resultado una mejorı́a del estado clı́nico del paciente y
una reducción de la carga de VIH.
Breve descripción de los dibujos
Las FIGURAS 1 a 3 son fotografı́as de placas
de electroforesis sobre gel de poliacrilamida que
muestran el número indicado de pistas y bandas
o zonas a lo largo de cada pista, y
la FIGURA 4 es un gráfico en tres partes que
muestra tres diferentes pacientes, el cual compara
el recuento leucocitario (la lı́nea conectada con 0)
con la cantidad de 2-5 A sintetasa (la lı́nea conectada con deltas), en comparación con los dı́as de
tratamiento.
Descripción detallada de la invención
En el presente documento, describo una nueva
anomalı́a adicional, completamente diferente, en
la función de la ARN-asa L. Una vez más, la
anomalı́a está asociada a una grave enfermedad
clı́nica, pero el uso acertado de los ARNds permite la corrección de la anomalı́a de la ARN-asa
L, con una simultánea mejorı́a clı́nica.
La
invención
incluye
procedimientos
diagnósticos para evaluar los defectos y aberraciones bioquı́micas en la ARN-asa L y los procedimientos terapéuticos de tratamiento para co-
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rregir tales defectos, cuando se les encuentra administrando un ARNds, preferentemente un ARNds mal emparejado, opcionalmente antes o simultáneamente con la administración de una linfoquina, como un interferón o una interleuquina.
También se describen los procedimientos para determinar la presencia de productos de desdoblamiento caracterı́sticos de un déficit de ARN-asa
L en una muestra la sangre del paciente, en particular las células mononucleadas del paciente, y
utilizando la presencia y/o tiempo de formación
de tales productos de desdoblamiento como marcador para iniciar la terapia con ARNds.
En esta invención se incluyen los procedimientos terapéuticos para tratar cánceres, en especial
aquéllos que tienen células tumorales resistentes
al tratamiento con un interferón solamente, ası́
como de afecciones vı́ricas, incluidas las enfermedades causadas por miembros de la familia de los
retrovirus.
En el artı́culo antes citado de Lancet, figura 5,
las muestras de ARN-asa L de pacientes infectados por VIH no mostraron ninguna bioactividad
detectable. En particular, las zonas “SCP”, es
decir, las zonas de Productos Especı́ficos de Desdoblamiento, carecı́an de fragmentos de ARN, lo
que puso de manifiesto que la ARN-asa L de estos
pacientes habı́a sido eficazmente inactivada por el
inhibidor. Por el contrario, los individuos normales sanos mostraron in vivo ARN-asa L activada
con bastante facilidad. De esta forma, la ARNasa L aberrante en tumores humanos se encuentra
asociada con nuevos productos de desdoblamiento
(NCP).
Los nuevos productos de desdoblamiento
(NCP) son diferentes de los productos especı́ficos
de desdoblamiento (SCP) e identifican células humanas exentas de los mecanismos normales para
controlar el crecimiento celular y la proliferación
vı́rica. La figura 1, una fotografı́a de una placa de
electroforesis sobre gel de poliacrilamida (PAGE),
muestra la cinética de la actividad de ARN-asa L
obtenida de los linfocitos periféricos de un individuo normal, similar a la Pista 2, figura 5 de mi
artı́culo anterior (Lancet, antes citado). Tal como
se ha descrito anteriormente, el procedimiento
analı́tico consistió en medir la ARN-asa L activada en el extracto citoplásmico de células mononucleadas, mediante la determinación de la capacidad de generar productos especı́ficos de desdoblamiento al incubarla con una fuente de ARN
28S y 18S. Los procedimientos empleados se atienen a los descritos por K. Kariko y J. Ludwig,
Biochem. Biophysics. Research Communication,
Vol 128, pág. 695, 1985 y Wreschner y col, Nucleic Acid Research, Vol. 9, pág 1571, 1981.
El ARN ribosómico se obtuvo de células HL929,
que carecen genéticamente de ARN-asa L. Estas
células LH929 están depositadas bajo los términos
del Tratado de Budapest en la American Type
Culture Collection, Rockville, Maryland, USA,
con código de acceso ATCC n◦ CRL9659. Con
la observación durante perı́odos prolongados de
tiempo, de 1700 minutos (aproximadamente 26
horas), descubrı́ que la ARN-asa L de los individuos normales era finalmente capaz de formar
NCP (Pista 8 de la figura 1). Obsérvese que el
punto más precoz de detección de NCP en un in-
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dividuo normal se encuentra tras muchas horas
de incubación.
Sin embargo, los NCP se observan en el plazo
de minutos de incubación de ARN-asa L, cuando
se utilizan linfocitos de pacientes con leucemia.
Esto se aprecia claramente en la figura 2, comparando células de 3 pacientes leucémicos (leucemia
mielógena crónica) de los pacientes de CML A y
B, con células comparables de un individuo normal, paciente C. Obsérvese que en los pacientes
de leucemia (pacientes A y B, figura 2) no se registran nunca SCP y se detectan incluso NCP tras
incubaciones breves, del orden de 1 a 4 minutos.
En llamativo contraste, en un individuo normal
(voluntario designado C), sólo se observan SCP y ningún NCP en absoluto- en muestras cinéticas
tomadas tras hasta 60 minutos.
En consonancia, he observado una anomalı́a
previamente no detectada en la que un enzima
clave (ARN-asa L), asociado con los mecanismos de defensa del organismo contra el cáncer y
enfermedades inmunológicas y vı́ricas, opera de
forma acelerada y aparentemente incontrolada.
En ensayos separados, comparé las capacidades
relativas de estas dos células diferentes (células
con ARN-asa L anormal) para resistir el ataque vı́rico. Observé que los tı́tulos (resultados)
de virus de progenie eran significativamente más
elevados en aquellas células con una actividad
anormal de ARN-asa L, que generaban NCP tan
rápidamente.
He descubierto, y aquı́ lo describo, un procedimiento en el que los ARN de doble cadena,
especialmente ARNds mal emparejados, restituyen la normalidad de la cinética y productos de
degradación de la ARN-asa L y que la tasa de
restitución de la normalidad mediante ARN de
doble cadena se puede acelerar a través de una
exposición previa a linfoquinas.
Por el término “ARNds mal emparejado”
se entienden aquéllos en los que el enlace de
hidrógeno (apilamiento de bases) entre las cadenas contrarias se encuentra relativamente intacto,
es decir, está interrumpido, en promedio, menos
de un par de bases por cada 29 residuos de bases
consecutivos. El término “ARNds mal emparejado” se debe entender de acuerdo con ello. El
ARNds puede ser un complejo de un poliinosinato y un policitidilato, que contiene una proporción de bases de uracilo o bases de guanidina,
por ejemplo, de 1 en 5 hasta 1 en 30 de tales bases (poli I · poli (C4 -C29 x > U ó G). De forma
alternativa y bajo ciertas circunstancias, se pueden formar complejos con oligonucleótidos (pequeños fragmentos de nucleótidos) adecuados con
polinucleótidos u oligonucleótidos complementarios apropiados.
El ARNds puede ser poli I · poli U, en donde
la proporción de C a U es de aproximadamente
13 a 1 y los coeficientes de sedimentación de poli
I y poli C,U son inferiores a 9 y en el intervalo de
2 unidades de cada uno, siendo preferentemente
ambos de aproximadamente 6,5 a 7,5.
El ARNds puede ser de la fórmula general
rIn . r(C11−14 ,U)n y, especı́ficamente, rIn .
r(C12 ,U)n . Más adelante se analizan otros ejemplos adecuados de ARNds.
Los ARNds mal emparejados preferidos para
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utilizar en la presente invención están basados en
copolinucleótidos seleccionados de poli (Cn ,U) y
poli (Cn ,G), en donde n es un número entero
que tiene un valor comprendido entre 4 y 29 y
son análogos mal emparejados de complejos de
polirribocitidilato (rCn ), por ejemplo, mediante
la inclusión de residuos de 2’-O-metil ribosilo.
Estos análogos mal emparejados de rIn .rCn , de
los cuales los preferidos tienen la fórmula general rIn .r(C12 ,U)n, han sido descritos por Carter
y Ts’o en las patentes de EE.UU. 4.130.641 y
4.024.222. Los ARNds allı́ descritos son, por lo
general, adecuados para usar de acuerdo con la
presente invención.
Los ejemplos especı́ficos de ARNds mal emparejados para usar en la invención incluyen:
poli (I) · poli (C4 ,U)
poli (I) · poli (C7 ,U)
poli (I) · poli (C13 ,U)
poli (I) · poli (C22 ,U)
poli (I) · poli (C20 ,G)
poli (I) · poli (C29 ,G) y
poli (I) · poli (Cp ) 23 G>p
La cantidad de ARNds mal emparejado administrado es, preferentemente, suficiente para alcanzar una concentración máxima en sangre de
0,01 microgramos por milı́metro de ARNds hasta
1.000 microgramos por milı́metro de ARNds en la
circulación sistémica de sangre, inmediatamente
después de la administración distal desde el punto
de inyección.
En el presente documento comunico los casos de tres individuos con leucemia (CML) que
evidenciaron el nuevo defecto de la ARN-asa L
en asociación con un crecimiento incontrolado de
sus células tumorales malignas y un significativo
deterioro clı́nico (malestar, pérdida de peso, incapacidad para soportar múltiples infecciones), con
numerosas infecciones vı́ricas asociadas, incluidos
herpes zóster, CMV, EBV, herpes simplex o hepatitis. Varios pacientes experimentaron asimismo
infecciones fúngicas crónicas en la región bucal.
Dilucidé el nuevo trastorno bioquı́mico y
diseñé un esquema de administración de ARNds,
solo o en combinación con una linfoquina, que corrigió eficazmente la anomalı́a de la ARN-asa L,
conduciendo ası́ a una llamativa mejorı́a clı́nica,
caracterizada por una significativa reducción del
peso del tumor y una significativa mejorı́a de
las defensas antivı́ricas e inmunológicas generales,
según se evidenció por la reducción de las infecciones vı́ricas y fúngicas simultáneas.
Las linfoquinas incluyen interferones (alfa,
beta, gamma), preferentemente interferón alfa,
las interleuquinas, especı́ficamente las interleuquinas (1, 2 ó 3) y la interleuquina-2 recombinante (rIL-2), ası́ como el factor de necrosis tumoral (TNF). Se incluyen también las células asesinas (“killer”) activadas por linfoquinas (LAK),
formadas en animales en respuesta a la exposición
a una linfoquina.
Cuando se utiliza interferón (alfa) como linfoquina, se administra una cantidad desde 0,01
hasta 100.000 IRU por milı́metro de fluido corporal del paciente. Cuando la linfoquina es IL-2,
preferentemente rIL-2, la cantidad administrada
se encuentra dentro de un intervalo de aproximadamente 102 unidades de IL-2 por kg de peso
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corporal del paciente, hasta un valor que se aproxima a niveles inaceptables de toxicidad en dicho
paciente, que puede llegar a ser de 106 unidades
de IL-2. No obstante, los valores más eficaces,
con reacciones tóxicas manejables, se hallan en el
intervalo desde aproximadamente 103 hasta aproximadamente 104 unidades de IL-2 por kg de peso
corporal.
Cuando se administran ambos agentes, el ARNds y la linfoquina, tal como se ha descrito anteriormente, se les puede administrar como una
mezcla, de forma separada pero simultánea, o de
modo secuencial.
La administración de un ARNds y una linfoquina “en combinación” incluye presentaciones
en las que ambos agentes se administran conjuntamente como una mezcla terapéutica, ası́ como
procedimientos en los que ambos agentes se administran por separado, pero simultáneamente, por
ejemplo, a través de vı́as intravenosas separadas
en el mismo individuo. La administración “en
combinación” incluye, además, la administración
por separado de uno de los fármacos, en donde
uno de los medicamentos se administra en primer
lugar, seguido al poco tiempo por el segundo.
La figura 3 muestra la tı́pica restitución de la
recuperación bioquı́mica en 3 pacientes (TATR,
DEFP, DALR) expuestos inicialmente a una baja
dosis de linfoquina (IFN alfa a dosis de 0,5 hasta
3,0 millones de IRU/4-7 veces a la semana). Cada
paciente pesaba aproximadamente 60 kilogramos.
Obsérvese que en cada caso, la introducción de
linfoquina sola fue manifiestamente insuficientemente para provocar cualquier mejorı́a detectable
del defecto de la ARN-asa L. De forma especı́fica,
todos los pacientes sólo mostraban NCP mientras
recibı́an la linfoquina. Un paciente (DALR) tuvo
un breve perı́odo de respuesta a la quimioterapia
convencional (hidroxiurea, etc.), durante el cual
sus linfocitos recuperaron temporalmente la actividad de SCP; sin embargo, su enfermedad experimentó una recidiva, con una conversión de SCP
a NCP, asociada en el tiempo con el deterioro
clı́nico, y se le empezó a tratar con linfoquina,
con una mejorı́a clı́nica o bioquı́mica mensurable.
En cada caso en que se introdujo a continuación
el ARNds, conjuntamente con la linfoquina, se
produjo de forma aparentemente simultánea una
llamativa mejorı́a clı́nica y la restitución de la normalidad bioquı́mica de la ARN-asa L.
La figura 3 muestra la eficacia del ARNds mal
emparejado rIn . r(C11−14,U)n o AMPLIGENR
(marca registrada de HEM Research, Rockville,
Maryland, USA) administrado con un intervalo
de dosificación de 40 a 300 mg (administrado por
vı́a intravenosa dos veces a la semana). Observé
que podı́a alcanzar efectos clı́nicos similares monitorizando el enzima (ARN-asa L) y administrando ARNds mal emparejado solo, pero que la
cantidad de ARNds necesaria era, a menudo, entre 2 y 20 veces mayor, retrasándose significativamente el establecimiento de la respuesta clı́nica.
Mediante la combinación del ensayo de la
ARN-asa L y utilizando acertadamente el ARN
mal emparejado solo o en combinación con linfoquinas, he podido mejorar de forma uniforme el
estado clı́nico general (disminución de las infec-
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ciones vı́ricas y fúngicas), reduciendo a la vez el
peso del tumor de forma significativa (como muestra la figura 4, analizada más adelante). Resulta
importante señalar que ahora es posible realizar
estos significativos cambios clı́nicos con un costo
apropiado para la eficacia y minimizar, si no eliminar, la toxicidad del paciente a estos agentes.
Ası́, mi invención tiene una amplia aplicación sobre diversas linfoquinas, ası́ como sobre una extensa familia de ARN de doble cadena que, de
otra forma, serı́an de escaso o nulo uso clı́nico si
no se empleara esta estrategia.
El gráfico de la figura 4 muestra los llamativos
efectos bioquı́micos y clı́nicos alcanzados en los 3
pacientes con leucemia, cuyos perfiles de ARN-asa
L se exponen en la figura 3. En la figura 4, se trazan en el tiempo el recuento leucocitario (células
por milı́metro cúbico, representado por las O conectadas) y las actividades de la 2’-5’ A sintetasa
de los linfocitos periféricos (representadas por las
deltas conectadas). Para aislar los linfocitos para
la medición de la 2’-5’ A sintetasa, se purificaron en primer lugar aproximadamente 1 x 106
células mononucleadas en la sangre periférica por
la técnica Ficol Hypaque estándar. En los tres casos, la quimioterapia anterior o la terapia con linfoquinas previa habı́a sido de muy limitada utilidad, tal como lo evidencia el elevado recuento leucocitario , es decir, superior a 3.000 por milı́metro
cúbico, y baja 2’-5’ A sintetasa, expresada en nanomoles por mg de proteı́na celular. Sin embargo,
el ARNds mal emparejado, añadido a células que
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habı́an sido “cebadas” anteriormente con una dosis baja de linfoquina, mostró una reducción simultánea del número de células tumorales circulantes (recuento leucocitario), un retorno a la
normalidad de la ARN-asa L linfocitaria y una
mejorı́a del estado antivı́rico general. La eficacia clı́nica de tales regı́menes es de duración inusualmente prolongada y algunos de los pacientes
pueden satisfacer, por último, los estrictos criterios clı́nicos de “curación”. He evaluado esta
posibilidad en importantes modelos animales, en
los que puse de manifiesto no sólo la inhibición
del crecimiento tumoral, sino también una supervivencia incrementada (p<0,001) instaurando el
tratamiento con ARNds, solo o en combinación
con linfoquinas, basado en el nivel relativo de recuperación de la ARN-asa L y la recuperación
de toda la vı́a 2’-5’ A/sintetasa/ARN-asa L. Observé también que tales tratamientos aumentan
la inmunovigilancia natural (células NK, células
LAK, etc.), al tiempo que resulta directamente
beneficioso al reducir el número de células tumorales viables.
Estudios adicionales de confirmación han indicado que estos tratamientos planificados, es decir, ARNds solo en combinación con linfoquinas,
han tornado las diversas células tumorales realmente más sensibles a la lisis, incluso cuando las
linfoquinas solas, por lo general, no aumentaron
eficazmente ni la sensibilidad de la célula tumoral diana ni estimularon de forma importante la
función inmune.
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REIVINDICACIONES
1. Uso de un ARN de doble cadena en la preparación de una composición para la corrección de
un déficit en la ARNasa L, el cual se manifiesta
por la generación de productos de desdoblamiento
diferentes de los Productos Especı́ficos de Desdoblamiento (SCP), cuando la ARNasa L deficitaria
se incuba con ARNr 18 S y 28 S, en donde la corrección del déficit es eficaz en el tratamiento de
una enfermedad.
2. Uso de un ARN de doble cadena, según
la reivindicación 1, en donde el ARN de doble
cadena es cualquier ARN de doble hélice capaz
de actuar como cofactor para la 2’-5’ A sintetasa intracelular, y como generador de 2’-5’ A
oligómeros bioactivos, capaces de activar la ARNasa L.
3. Uso de un ARN de doble cadena, según
la reivindicación 1, en donde se utiliza un
ARNds mal emparejado, preferentemente rIn .
r(C11−14,U)n .
4. Uso de un ARN de doble cadena, según la
reivindicación 3, en el que el ARNds mal emparejado se administra en una cantidad que da como
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resultado un nivel de 1 a 1.000 microgramos del
ARNds mal emparejado por milı́metro de fluido
corporal del paciente.
5. Uso de la reivindicación 1, opcionalmente
en combinación con terapia de linfoquinas, en
donde la enfermedad es cáncer, un trastorno inmunológico o una infección vı́rica.
6. Uso de la reivindicación 5, en donde la
enfermedad es cáncer y las células tumorales son
resistentes al tratamiento con interferón solo.
7. Uso de la reivindicación 5, en donde el
ARNds se construye a partir de complejos oligoméricos, complejos poliméricos o ambos.
8. Uso de la reivindicación 7, en donde el
ARNds se construye a partir de oligonucleótidos
hibridados con ARN complementario de cadena
única, para formar un dúplex de ARNds.
9. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 5
a 8, en donde el ARNds contiene regiones de rotura de enlaces y exhibe la proporción terapéutica
favorable propia del rIn . r(C11−14 ,U)n .
10. Uso de la reivindicación 5, en donde se
administra una linfoquina simultáneamente con
el ARNds.
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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva
del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD
2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación
del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del
7-10-1992, no producirán ningún efecto en España
en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales.
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Esta información no prejuzga que la patente esté o
no incluı́da en la mencionada reserva.
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