IMAGEN Chlamydia - Thermo Fisher Scientific

IMAGEN Chlamydia
K610111-2
50
ES
Prueba de inmunofluorescencia directa para la detección de
Chlamydia.
1.
INDICACIONES DE USO
El ensayo IMAGEN™ Chamydia es una prueba de
inmunofluorescencia directa cualitativa para la detección de
clamidias en muestras urogenitales y oftálmicas humanas y para
la confirmación de la presencia de clamidias en cultivos celulares.
2.
RESUMEN
Las clamidias son parásitos intracelulares obligados
estrechamente emparentados con las bacterias Gram negativas1.
El género Chlamydia contiene tres especies conocidas: Chlamydia
trachomatis (C. trachomatis), Chlamydia psittaci (C. psittaci) y
Chlamydia pneumoniae (TWAR).
El ciclo vital de las clamidias es complejo, pero se reconocen dos
estructuras principales: el cuerpo elemental infeccioso y el cuerpo
reticulado. La infección celular se inicia cuando el cuerpo elemental
se adhiere a la superficie de la célula huésped y entra en la célula
por endocitosis. El cuerpo elemental aumenta de tamaño dentro
de la vacuola formada por la membrana de la célula huésped y
se diferencia formando un cuerpo reticulado. El cuerpo reticulado
está implicado exclusivamente en la multiplicación de las clamidias
y se divide por fisión binaria utilizando el suministro de energía de
la célula huésped. Aproximadamente 24 horas tras la infección,
los cuerpos reticulados se diferencian dentro de la inclusión en
expansión, formando cuerpos elementales. El ciclo replicativo
dura 48-72 horas y termina con la ruptura de la inclusión y la
liberación de los cuerpos elementales. Una inclusión madura
puede contener aproximadamente 104 cuerpos elementales
clamidiales y ocupar el 75% del volumen de la célula huésped.
C. trachomatis está reconocida como una causa frecuente de
enfermedades de transmisión sexual1,2 y se ha demostrado que
causa una variedad de infecciones en el ser humano, algunas de
las cuales pueden ser asintomáticas. En los adultos, C. trachomatis
puede causar también conjuntivitis folicular aguda o subaguda,
que puede derivar en queratitis punctata. En ocasiones, también
puede aparecer tracoma cicatricial y endémico. La mayoría de
estos síntomas aparecen en pacientes con infecciones genitales
sin detectar1,3. Otra complicación, que aparece en los hijos
nacidos de una madre infectada, es la oftalmia del recién nacido.
Las áreas anatómicas que se utilizan habitualmente para obtener
muestras de cara al diagnóstico de Chlamydia son la conjuntiva,
el endocérvix y la uretra. En los varones, especialmente varones
adolescentes y asintomáticos investigados tras rastreo y
seguimiento de contactos, puede que no sea posible obtener
muestras uretrales de forma invasiva. En tales casos, se ha
sugerido recoger muestras del chorro de la primera orina del día y
examinar el depósito centrifugado4. Asimismo, en la investigación
de las infecciones respiratorias, se han examinado directamente
muestras respiratorias (por ejemplo, esputo) para la detección de
C. psittaci y C. pneumoniae5,6.
Actualmente, para la detección de clamidias en muestras clínicas
se utilizan 3 métodos de diagnóstico principales. El primero, por
aislamiento del microorganismo y visualización, en el que los
cuerpos elementales viables presentes en las muestras clínicas
infectan los cultivos celulares y las inclusiones resultantes se
detectan mediante técnicas de tinción, por ejemplo, yodo o
inmunofluorescencia. El segundo, mediante la demostración
directa de la presencia de clamidias en muestras clínicas
utilizando un anticuerpo monoclonal marcado con fluoresceína.
El tercero, mediante inmunoensayo enzimático (por ejemplo,
IDEIA Chlamydia), con el que se determina la presencia de
antígeno clamidial en muestras clínicas7.
Se ha demostrado que las técnicas de inmunofluorescencia
directa en las que se utilizan anticuerpos monoclonales marcados
con fluoresceína8,9,10 presentan una buena correlación, en
comparación con las técnicas de cultivo celular, para la detección
de C. trachomatis.
El ensayo IMAGEN Chlamydia es una prueba de
inmunofluorescencia directa para la detección e identificación de
clamidias en muestras clínicas o cultivos celulares. En la prueba
se utiliza un anticuerpo monoclonal específico de género contra
el antígeno lipopolisacárido clamidial presente en todas las cepas
conocidas de Chlamydia.
3.
PRINCIPIO DEL ENSAYO
El reactivo del ensayo IMAGEN Chlamydia contiene anticuerpo
monoclonal conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC).
Este anticuerpo monoclonal específico de género detecta
los cuerpos elementales de todas las serovariantes humanas
conocidas de C. trachomatis, así como de las cepas de C. psittaci
y C. pneumoniae.
El anticuerpo conjugado se utiliza en una técnica de
inmunofluorescencia directa de un solo paso. Las muestras se
incuban durante 15 minutos con el reactivo conjugado con FITC. A
continuación, el exceso de reactivo se elimina mediante lavado con
solución salina tamponada con fosfatos (PBS), y las áreas teñidas
se montan y visualizan usando iluminación epifluorescente. Si
hay clamidias presentes en la muestra clínica, aparecen en forma
de cuerpos elementales fluorescentes de color verde manzana
brillantes que destacan contra el fondo de material contrateñido.
Los cultivos celulares monocapa infectados teñidos con el
anticuerpo monoclonal conjugado con FITC contienen inclusiones
clamidiales intracitoplásmicas de color verde manzana brillantes
que destacan contra el fondo de material celular contrateñido.
Agradecimientos
El anticuerpo monoclonal se produjo en el Departamento de
Patología de la Universidad de Cambridge, Cambridge, Reino
Unido, y en la División de enfermedades transmisibles del Centro
de investigaciones clínicas de Harrow, Middlesex, Reino Unido.
4.
DEFINICIONES
En la información del producto se han utilizado los siguientes
símbolos.
Número de catálogo
Instrucciones de uso
N
Contenido suficiente para <N> ensayos
Fabricante
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
Fecha de caducidad
5.
REACTIVOS SUMINISTRADOS
50 - Cada kit contiene materiales suficientes para analizar 50
preparaciones de cultivos celulares. - La vida útil del kit es la
indicada en la etiqueta exterior del envase.
5.1.
REACTIVOS DE IMAGEN CHLAMYDIA
Instrucciones para el uso
2 portaobjetos con 1 pocillo de control positivo
que contiene células de tejido conjuntivo de
ratón (L929) fijadas en acetona, infectadas con
la cepa L1 de C. trachomatis.
Un frasco de cada uno de los siguientes reactivos:
3mL de líquido de montaje. El líquido
de montaje contiene un inhibidor de la
fotodecoloración en una solución de glicerol
(pH 10,0).
1,4mL del reactivo del ensayo IMAGEN
Chlamydia. Este reactivo contiene anticuerpo
monoclonal murino purificado específico del
género Chlamydia, conjugado con FITC.
5.2. PREPARACIÓN, ALMACENAMIENTO Y REUTILIZACIÓN DE
LOS COMPONENTES DEL KIT
A fin de asegurar la óptima eficacia del kit, es importante que
todos los componentes sin usar del kit se almacenen con arreglo
a las siguientes instrucciones:
5.3.
PORTAOBJETOS
DE
CONTROL
POSITIVO
-
Los portaobjetos de control positivo se suministran empaquetados
individualmente en bolsas de papel de aluminio selladas y llenas
de nitrógeno. Almacene los portaobjetos sin usar a 2-8°C. Deje
la bolsa con el portaobjeto durante 5 minutos a temperatura
ambiente (15-30°C) antes de abrirla.
Tiña el portaobjeto inmediatamente después de abrir la bolsa.
5.4. LÍQUIDO DE MONTAJE Listo para su uso. Almacene el líquido de montaje sin usar a 2-8°C.
Deje el líquido de montaje durante 5 minutos a temperatura
ambiente (15-30°C) antes de utilizarlo.
5.5. REACTIVO Listo para su uso. Almacene el reactivo sin usar a 2-8°C en la
oscuridad. Deje el reactivo durante 5 minutos a temperatura
ambiente (15-30°C) antes de utilizarlo.
6.
REACTIVOS ADICIONALES
6.1. REACTIVOS
Acetona fresca (para la fijación).
Solución salina tamponada con fosfatos (PBS), pH 7,5, para el
lavado de las muestras y monocapas teñidas.
6.2. ACCESORIOS
Los siguientes productos están indicados para su uso con IMAGEN
Chlamydia. Póngase en contacto con su distribuidor local para
obtener más información.
Con recubrimiento de teflón portaobjetos de vidrio con 6 mm
de diámetro y único (100 diapositivas por caja) disponible en su
distribuidor local, (Código N º S611430-6).
Código de lote
IMAGEN Chlamydia Positive Control Slide (número de catálogo
S610930-2).
Las limitaciones de temperatura
Chlamydia Specimen Collection Kit - (kit de recogida de muestras
para IMAGEN Chlamydia) disponible como paquete dispensador
con 20 kits (número de catálogo S610730-2).
7.
EQUIPO
Necesitará el siguiente equipo:
Pipeta de precisión y puntas desechables capaces de administrar
25µL Baño de lavado
Cubreobjetos capaces de cubrir un pocillo de 6mm de diámetro
Aceite de inmersión no fluorescente
Microscopio de epifluorescencia dotado de un sistema de filtro
para el FITC (longitud de onda de excitación máxima de 490nm,
longitud de onda de emisión promedio de 520nm), y de objetivos
con una capacidad de aumento de 200-400x y 600-1000x
Incubador a 37°C
Centrífuga de baja velocidad
Cultivo celular
Hisopos estériles y medio de transporte adecuados para la
recogida, el transporte y el cultivo de clamidias
Líneas de cultivos celulares recomendadas para el aislamiento de
clamidias
8.
PRECAUCIONES
- Para uso diagnóstico in vitro. Cualquier persona que lleve
a cabo un ensayo con este producto debe recibir formación para
su uso y tener experiencia en los procedimientos de laboratorio.
8.1. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
8.1.1
La Chlamydia IMAGEN reactivo de ensayo contiene
<0,1% de azida de sodio, que es un veneno.
8.1.2
La azida sódica puede reaccionar con las cañerías de
cobre y plomo, formando azidas metálicas explosivas.
Deseche siempre los materiales que contengan azida
abriendo el grifo y dejando que salga< abundante agua.
8.1.3
El reactivo contiene el tinte azul de Evans. Aunque su
concentración es tan baja que el producto no se puede
clasificar como cancerígeno, debe evitarse el contacto
con la piel.
8.1.4
Tenga cuidado al utilizar el líquido de montaje, ya que
contiene un producto que puede provocar irritación
cutánea. A pesar de que su concentración no es lo
suficientemente elevada como para clasificarlo como
producto que provoca irritación cutánea, debe enjuagar
la piel inmediatamente si entra en contacto con el
producto.
8.1.5
El reactivo del ensayo IMAGEN Chlamydia contiene
inmunoglobulina humana. Este material ha sido
analizado y demostrado ser negativo para la presencia
de anticuerpos frente a HIV, Hepatitis C y antígeno
de superficie de la Hepatitis B, no obstante, debe ser
manipulado con las precauciones debidas y tratado
como potencialmente infeccioso.
8.1.6
No se aplique cosméticos, no fume, no beba ni coma,
ni almacene o prepare alimentos dentro del área de
trabajo designada.
8.1.7
No pipetee los materiales con la boca.
8.1.8
Lleve puestos guantes desechables cuando manipule
muestras clínicas y células infectadas, y lávese
siempre las manos después de trabajar con materiales
infecciosos.
8.1.9
Deseche todas las muestras clínicas con arreglo a la
legislación local.
8.1.10
Los usuarios profesionales pueden solicitar a Oxoid una
“hoja de datos sobre seguridad”.
8.2. PRECAUCIONES TÉCNICAS
8.2.1
No utilice los componentes más allá de la fecha de
caducidad impresa en las etiquetas. No mezcle ni
intercambie lotes de reactivos diferentes.
8.2.2
Los reactivos se suministran en concentraciones
de trabajo fijas. Si se almacenan los reactivos bajo
condiciones diferentes a las especificadas en la Sección
5, la eficacia del ensayo se verá afectada negativamente.
8.2.3
Prepare la cantidad necesaria de solución salina
tamponada con fosfatos (PBS) fresca el día en que la
vaya a utilizar.
8.2.4
Es necesario lavar en PBS. El uso de otras soluciones
de lavado tales como agua del grifo o agua destilada
pondría en peligro los resultados del ensayo.
8.2.5
Evite la contaminación microbiana de los reactivos.
8.2.6
No se debe congelar los reactivos.
9.
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS7,8
Las muestras reunidas de uretra masculina, cérvix femenino y
conjuntiva deben contener tantas células epiteliales como sea
posible, ya que las clamidias son microorganismos intracelulares
que infectan a las superficies epiteliales1.
9.1. MUESTRAS CLÍNICAS
9.1.1 Muestras uretrales (varones)
Recoja muestras de la uretra insertando y haciendo subir por ella,
de 2-4cm, un hisopo delgado con punta de alginato o algodón.
Gire el hisopo varias veces y luego sáquelo de la uretra.
9.1.2
Muestras cervicales (mujeres)
Antes de recoger muestras del endocérvix, limpie el os cervical
con una gasa estéril a fin de retirar el exceso de moco, sangre
o pus, etc. Recoja las muestras del endocérvix insertando, y
haciendo subir aproximadamente 1cm por el canal cervical,
un hisopo con punta de alginato o algodón, o un cepillo para
citología. Gírelo varias veces a la altura de la unión entre epitelio
escamoso y epitelio columnar, y sáquelo sin que toque las
superficies vaginales.
9.1.3
Muestras oftálmicas
Aplique anestesia local al ojo, y luego exponga la conjuntiva
inferior e superior. Utilizando un hisopo con punta de algodón
o de Dacron®, frote vigorosamente debajo de las superficies
conjuntivales inferior y superior, girando el hisopo durante el
proceso de recogida de muestras para garantizar que se toman
muestras de toda la superficie conjuntival.
NOTA: Chlamydia Specimen Collection Kit (consulte la Sección
6.2) es adecuado para la recogida de las muestras arriba
mencionadas.
9.1.4
Preparación de los portaobjetos
Haga rodar el hisopo con las muestras, aplicando una ligera
presión, dentro del área del pocillo de 6mm presente en el
portaobjeto para microscopía. Asegúrese de utilizar toda la punta
del hisopo para preparar el portaobjeto. Deje que la muestra se
seque bien al aire a temperatura ambiente (15-30°C) y luego fije
en acetona fresca durante 10 minutos. Deje que el portaobjeto se
seque al aire. Si no va a teñir la muestra de inmediato, almacénela
a 4°C durante toda la noche o congélela a –20°C durante un
máximo de 2 meses.
9.2. CULTIVOS CELULARES MONOCAPA
Retire el medio de la superficie de la monocapa. No deje que
las células se sequen, ya que los cuerpos de inclusión podrían
reventar. Fije inmediatamente la monocapa en metanol fresco
durante 10 minutos, y luego seque cuidadosamente las manchas
utilizando papel secante. Debe teñir de inmediato las monocapas
fijadas; no obstante, también puede almacenarlas a 4°C durante
toda la noche antes de teñirlas.
10.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
CONSULTE LA SECCIÓN 8.2, PRECAUCIONES TÉCNICAS, ANTES DE
LLEVAR A CABO EL PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO.
10.1. ADICIÓN DE REACTIVO
Añada 25µL del reactivo del ensayo al frotis con la muestra fijada
(consulte la Sección 9.1), al cultivo celular monocapa fijado
(consulte la Sección 9.2) o al portaobjeto de control positivo.
Asegúrese de que el reactivo cubra todo el área del pocillo.
10.2. PRIMERA INCUBACIÓN
Incube los portaobjetos con el reactivo en una cámara de
humedad durante 15 minutos a 37°C. No deje que el reactivo
se seque en la muestra, ya que esto provocaría la aparición de
tinción no específica.
10.3. LAVADO DEL PORTAOBJETO
Lave el exceso de reactivo con solución salina tamponada con
fosfatos (PBS), y luego lave suavemente el portaobjeto en un
baño con agitación que contenga PBS durante 5 minutos. Drene
el PBS y deje que el portaobjeto se seque al aire a temperatura
ambiente (15-30°C).
10.4. ADICIÓN DEL LÍQUIDO DE MONTAJE
Añada una gota de líquido de montaje al centro de cada pocillo y
coloque un cubreobjeto sobre el líquido de montaje y la muestra,
asegurándose de que no quede atrapada ninguna burbuja de aire.
10.5. LECTURA DEL PORTAOBJETO
Examine la totalidad del área del pocillo que contiene la
muestra teñida utilizando un microscopio de epifluorescencia.
La fluorescencia, como se describe en la Sección 11, debería ser
visible a un aumento de 600–1000x. (Los mejores resultados se
obtienen examinando los portaobjetos inmediatamente después
de teñirlos, pero puede almacenarlos en la oscuridad a 2-8°C
durante un máximo de 24 horas).
11.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO
11.1. CONTROLES
11.1.1 Portaobjetos de control positivo
Cuando se visualiza el portaobjetos de control positivo de la
manera descrita en la Sección 10, éste debería mostrar cuerpos
elementales (EB, por sus siglas en inglés) extracelulares que
aparecen como discos fluorescentes muy pequeños, de bordes
lisos y color verde manzana, con un diámetro de 300nm
aproximadamente. Los EB pueden observarse contra un fondo de
células y restos celulares contrateñidos en rojo. También pueden
observarse otras formas clamidiales de 2 a 3 veces más grandes
que los EB, algunas de las cuales muestran una fluorescencia
uniforme o presentan centros oscuros rodeados por un halo
fluorescente de color verde manzana. Puede tratarse de formas
intermedias de clamidias o de cuerpos reticulados. En ocasiones
pueden observarse inclusiones clamidiales intracitoplasmáticas
intactas fluorescentes y brillantes de gran tamaño.
11.1.2 Control negativo
Si se requiere un control negativo, se recomienda utilizar células
no infectadas, intactas o reventadas, de uno de los tipos utilizados
para el cultivo y aislamiento de clamidias. Las células deben
prepararse y fijarse de la manera descrita en la Sección 9.2 y
teñirse de la manera descrita en la Sección 10.
11.2. MUESTRAS CLÍNICAS
11.2.1 Apariencia de los cuerpos clamidiales
Los cuerpos elementales extracelulares son la forma más común
de clamidias en las muestras clínicas y aparecen como cuerpos de
bordes lisos, de color verde manzana brillante y aproximadamente
300nm de diámetro, tal y como se describe en la Sección 11.1.1.
11.2.2 Interpretación de los resultados
Se realiza un diagnóstico positivo cuando las muestras fijadas y
teñidas muestran al menos 10 cuerpos clamidiales. Se recomienda
este nivel a fin de reducir los falsos positivos que podrían surgir
de la interpretación incorrecta de la fluorescencia no específica.
Para realizar un diagnóstico negativo, las células contrateñidas
deben ser visibles en el pocillo. Estas células pueden ser células
epiteliales columnares y escamosas intactas o reventadas o,
en ocasiones, leucocitos polimorfonucleares. La ausencia de
material celular puede indicar una escasa calidad de la recogida
de las muestras y se recomienda repetir ésta.
11.2.3 Fluorescencia no específica
El material con forma irregular cuya morfología difiera de los
cuerpos clamidiales descritos en la Sección 11.1.1 y que presente
fluorescencia blanca, roja o amarilla en lugar de verde manzana
debe considerarse tinción no específica.
11.3. CONFIRMACIÓN DE CULTIVOS CELULARES
11.3.1 Apariencia de las inclusiones clamidiales
Las inclusiones clamidiales intracelulares aparecen como sacos
brillantes de color verde manzana dentro del citoplasma de las
células infectadas. Una inclusión puede ocupar hasta el 75% del
citoplasma de la célula huésped.
11.3.2 Interpretación
Se realiza un diagnóstico positivo cuando en la monocapa se
observan una o más inclusiones clamidiales intracelulares teñidas.
12.
LIMITACIONES DE LA EFICACIA
12.1. El aspecto visual de la imagen de fluorescencia obtenida
puede variar en función del tipo de microscopio y fuente
lumínica utilizados.
12.2. Utilice exclusivamente el líquido de montaje suministrado.
12.3. Se recomienda utilizar 25µL de reactivo para cubrir el área
del pocillo de 6mm de diámetro. Una reducción en este
volumen puede producir dificultades para cubrir el área
de la muestra, y reducir la sensibilidad.
12.4. Todos los reactivos se suministran en concentraciones de
trabajo fijas. La eficacia del ensayo puede verse afectada
si se realiza cualquier tipo de modificación a los reactivos
o si se almacenan bajo condiciones diferentes a las
especificadas en la Sección 5.
12.5. Si no se detectan clamidias en un cultivo celular, puede
deberse a factores tales como una recogida de muestras
en un momento inadecuado del transcurso de la
enfermedad, a una recogida o manipulación incorrecta
de las muestras, a un fracaso del cultivo celular, etc.
Un resultado negativo no excluye la posibilidad de una
infección clamidial.
12.6. Los sistemas de detección de antígenos, tales como
IMAGEN Chlamydia, no deben utilizarse para proporcionar
información en casos médico-legales. En la evaluación
de una sospecha de abuso o de otras situaciones en las
que la posibilidad de un falso positivo usando sistemas
de detección de antígenos es inaceptable, sólo deben
utilizarse cultivos estándar de clamidias11.
12.7. La presencia de clamidias en las muestras clínicas no
excluye necesariamente la posibilidad de infecciones
concomitantes por otros patógenos. Los resultados de
la prueba deben interpretarse junto con la información
obtenida mediante estudios epidemiológicos, mediante
la evaluación clínica del paciente y mediante otros
procedimientos diagnósticos.
13.
VALORES ESPERADOS
La prevalencia de infecciones por clamidias en una población
sometida a estudio varía en función del tipo de población
estudiada1,2. La prevalencia de la infección urogenital por
clamidias en pacientes no seleccionados que se estudien en una
clínica especializada en medicina genitourinaria oscilará entre el
10 y el 25%. En el caso de los pacientes estudiados con uretritis no
específica y uretritis posgonocócica, la prevalencia puede llegar a
ser de entre un 30 y un 60%.
En poblaciones de pacientes estudiados en clínicas obstétricas
y ginecológicas, puede observarse una menor prevalencia de
infecciones urogenitales por clamidias (menos del 10%)1,12.
La prevalencia de las infecciones clamidiales oftálmicas
puede variar entre el 5% y el 20% en estudios de paratracoma
(conjuntivitis con inclusiones)1,9.
14.
CARACTERÍSTICAS DE EFICACIA EN CUANTO A LA
REACTIVIDAD
14.1. ESPECIFICIDAD DEL ANTICUERPO MONOCLONAL
Se ha demostrado que el anticuerpo monoclonal utilizado en
el reactivo de IMAGEN Chlamydia reacciona con un epítopo del
antígeno lipopolisacárido clamidial común a todas las cepas de
Chlamydia.
A veces se observa tinción no específica en la tinción
inmunoquímica que se debe a la unión entre las regiones Fc
del anticuerpo y la proteína A producida por algunas cepas de
Staphylococcus aureus. El Reactivo IMAGEN Chlamydia ha sido
diseñado para reducir tales uniones.
14.2. EFICACIA CLÍNICA13
14.2.1 Muestras urogenitales
El ensayo IMAGEN Chlamydia se evaluó en 2 laboratorios de
diagnósticos de rutina frente a sistemas de cultivo celular
establecidos (tinción Giemsa de monocapas de células McCoy
pretratadas tras su cultivo primario con muestras). Se recogieron
muestras uretrales y cervicales de pacientes no seleccionados
estudiados en clínicas de tratamiento de enfermedades de
transmisión sexual. La incidencia de la infección por clamidias en
los grupos de población muestreados osciló entre el 10% y el 20%.
Se realizaron frotis a partir de hisopos con muestras recogidos
en la clínica y a continuación, los hisopos se colocaron en un
medio de transporte para su evaluación en cultivos celulares. Una
muestra se consideraba positiva en el ensayo IMAGEN Chlamydia
cuando se observaban 10 o más cuerpos fluorescentes (consulte
la Sección 11.2.2). Una muestra se consideraba positiva en la
prueba del cultivo celular cuando se observaba al menos una
inclusión clamidial intracitoplásmica teñida.
Los resultados de ambas pruebas se resumen en la Tabla 14.1. De
las 935 muestras analizadas, se obtuvo el mismo resultado por
ambos métodos en 898 casos, lo que supone una correlación del
96%. La sensibilidad y especificidad globales del ensayo IMAGEN
Chlamydia fueron del 92% y el 97% respectivamente, asumiendo
que los métodos de cultivo celular tuvieran un 100% de
sensibilidad y especificidad. Los valores predictivos de los ensayos
positivos y negativos fueron del 84% y el 98% respectivamente.
Tabla 14.1
Comparación de los resultados de las pruebas
realizadas mediante cultivo celular y mediante IMAGEN
Chlamydia con muestras urogenitales
PRUEBA
Cultivo celular
IMAGEN Chlamydia
Centro 1
Centro 2
Total
RESULTADO
Negativo Positivo
Negativo Positivo
337
74
427
60
764
134
Positivo
Negativo
4
8
12
Negativo
Positivo
17
8
25
14.2.2 Muestras oftálmicas
El ensayo IMAGEN Chlamydia se evaluó en un laboratorio de
diagnósticos de rutina frente a un sistema de cultivo celular
establecido (tinción Giemsa de monocapas de células McCoy
pretratadas tras su cultivo primario con muestras). Se recogieron
hisopos conjuntivales de 178 pacientes con conjuntivitis folicular
aguda estudiados en un hospital especializado en problemas
oculares; 163 tenían entre 13 y 55 años, 3 eran bebés (de 10 a 12
semanas de edad) y 12 eran recién nacidos (de 12 días a 4 semanas
de edad). La incidencia de la infección por clamidias en el grupo
de población muestreado fue del 8%. Se realizaron frotis a partir
de hisopos con muestras recogidos en la clínica y a continuación,
los hisopos se colocaron en un medio de transporte para su
evaluación en cultivos celulares. Una muestra se consideraba
positiva en el ensayo IMAGEN Chlamydia cuando se observaban
10 o más cuerpos fluorescentes (consulte la Sección 11.2.2). Una
muestra se consideraba positiva en la prueba del cultivo celular
cuando se observaba al menos una inclusión intracitoplásmica
teñida.
Los resultados de este estudio se resumen en la Tabla 14.2. De
las 178 muestras analizadas, se obtuvo el mismo resultado por
ambos métodos en 174 casos, lo que supone una correlación
del 98%. La sensibilidad y especificidad globales del ensayo
IMAGEN Chlamydia fueron del 100% y el 97,5% respectivamente,
asumiendo que el método de cultivo celular tuviera un 100% de
sensibilidad y especificidad. Los valores predictivos de los ensayos
positivos y negativos fueron del 79% y el 100% respectivamente.
células de McCoy tratadas con yododesoxiuridina. Las monocapas
así inoculadas se incubaron a 37°C durante 48-72 horas y luego se
fijaron en metanol durante 10 minutos. Las monocapas fijadas se
tiñeron con Giemsa, yodo, o con el reactivo del ensayo IMAGEN
Chlamydia. Una muestra se consideraba positiva cuando se
observaba al menos una inclusión intracitoplásmica teñida al
microscopio.
Los resultados de este estudio se resumen en la Tabla 14.3. De
las 132 muestras analizadas, 56 (42%) mostraron cuerpos de
inclusión. La tinción con yodo detectó clamidias en 46 de estas
muestras, Giemsa tiñó a 49 muestras, e IMAGEN Chlamydia a 56
muestras.
Tabla 14.3
Comparación de los métodos de tinción
utilizados para la detección de inclusiones clamidiales en cultivo
celular del tipo vial cerrado (“shell vial”)
PRUEBA
IMAGEN Chlamydia
Tinción Giemsa
Tinción con yodo
Número de muestras
RESULTADO
Positivo Negativo Positivo Positivo Positivo
Positivo Negativo Negativo Positivo Negativo
Positivo Negativo Negativo Negativo Positivo
42
76
3
7
4
14.3. REACTIVIDAD CRUZADA
Se ha demostrado que el anticuerpo monoclonal utilizado
en IMAGEN Chlamydia no reacciona con los siguientes
microorganismos.
Acholeplasma laidlawii
Acinetobacter calcoaceticus var
anitratus
Aeromonas hydrophila
Bacteroides fragilis
Bacillus cereus
Campylobacter coli
Candida albicans
Citrobacter freundii
Clostridium perfringens
Clostridium difficile
Enterobacter cloacae
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella aerogenes
Streptococcus pyogenes
Tabla 14.2
Comparación de los resultados de las pruebas
realizadas mediante cultivo celular y mediante IMAGEN
Chlamydia con muestras oftálmicas
Lactobacillus lactis
Listeria monocytogenes
Mycoplasma orale
Mycoplasma hominis
PRUEBA
Cultivo celular
IMAGEN Chlamydia
Número de muestras
Virus
Virus del herpes simple
RESULTADO
Negativo Positivo
Negativo Positivo
159
15
Positivo
Negativo
0
Negativo
Positivo
4*
*
Estas muestras se obtuvieron de pacientes que recibían
tratamiento con antibióticos. Este hecho puede haber
afectado al resultado del cultivo celular9.
14.2.3 Confirmación de cultivos celulares
El ensayo IMAGEN Chlamydia se evaluó como prueba de
confirmación de cultivos frente a 2 procedimientos de tinción para
la confirmación de cultivos utilizados de forma rutinaria (Giemsa
y yodo). Se inocularon 132 muestras urogenitales en cada una de
tres monocapas con cubreobjetos (vial cerrado, o “shell vial”) de
15.
Mycoplasma arginini
Mycoplasma hyorhinis
Mycoplasma pneumoniae
Mycoplasma genitalium
Neisseria gonorrhoeae
Peptococcus sp
Peptostreptococcus anaerobius
Proteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella minnesota
Serratia marcescens
Shigella sonnei
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aureus
Streptococcus agalactiae
Streptococcus dysgalactiae
Streptococcus
dysgalactiae
subsp. equisimilis
Streptococcus pneumoniae
Ureaplasma sp
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