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PPADS, UN ANTAGONISTA DE RECEPTORES P2X, COMO NUEVO INHIBIDOR
DE LA FORMA REVERSA DEL INTERCAMBIADOR Na+/Ca2+ EN MIOCITOS
TRAQUEALES DE COBAYOS.
Reyes-García J1, Cruz-Valderrama JE1, Flores-Soto E1, Juárez-Figueroa U1,
Barajas- López C2, Montaño LM1. 1Depto. de Farmacología, Facultad de Medicina,
Universidad Nacional Autónoma de México. DF. 2División de Biología Molecular,
IPICYT, San Luis Potosí, SLP, México.
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Resumen: El intercambiador Na+/Ca2+ (NCX), es una proteína de membrana
plasmática. Su función principal es sacar 1 Ca2+ del citoplasma al espacio
extracelular e introducir 3 Na+ del espacio extracelular al citoplasma, para
contribuir a mantener una basal de Ca2+ intracelular. Diversos agonistas (Ach,
Histamina, 5-HT) activan canales catiónicos inespecíficos (ROC) y canales
operados por el almacén (SOC), ambos canales permiten la entrada de Na + y Ca2+
al citoplasma. El incremento de Na+ a nivel de la membrana ocasiona que el NCX
pase a su forma reversa (NCXREV) permitiendo el flujo de Ca2+ al interior de la
célula, favoreciendo el rellenado del retículo sarcoplásmico (RS). Existen varios
inhibidores para el NCXREV, como: 1) El KB-R7943, compuesto inespecífico que
también bloquea canales de Ca2+ dependientes de voltaje y a los SOC. 2) El
SEA0400, selectivo a NCXREV, pero de difícil adquisición en América Latina; 3)
Recientemente salió al mercado el SN-6, inhibidor especifico del NCXREV que se
está empezando a utilizar. Nosotros encontramos que el PPADS, un antagonista
específico de receptores purinérgicos P2X (receptores ionotrópicos), también
actúa como un inhibidor del NCXREV en miocitos traqueales de cobayo. Métodos y
Resultados: En células recién disociadas del músculo liso traqueal de cobayo,
corroboramos la presencia del NCXREV mediante la substitución en el Krebs de
NaCl por LiCl, esta maniobra incrementó las concentraciones de Ca2+ intracelular
[Ca2+]i, demostrando su presencia. Analizamos 2 respuestas sucesivas de NCXREV
después de 10 min encontrando un 90% de recuperación de la respuesta inicial.
Para inhibir al NCXREV, las células fueron pre-incubadas durante 5 min con KBR7943 (10 µM) bloqueándolo ~97%. El SN-6 (3-30 µM) no tuvo efecto. PPADS (30
µM) bloqueó ~93% el NCXREV. En estudios funcionales en órganos aislados,
utilizando anillos traqueales de cobayo, encontramos que la estimulación sucesiva
(4 estimulaciones) con 60 mM de KCl produjo una respuesta de contracción del
músculo liso traqueal similar en todas ellas. La incubación de los tejidos con KB-R
7943 bloqueó, significativamente, la respuesta de contracción inducida por el KCl
a partir de la primera estimulación, alcanzando ~80% de inhibición en la cuarta
estimulación con KCl. El PPADS no modificó las respuestas a KCl. En miocitos
traqueales, la estimulación con 60 mM de KCl, produjo un incremento en las
concentraciones intracelulares de Ca2+. El KBR-7943 disminuyó significativamente
(~54%) este incremento. Conclusiones: Nuestros resultados muestran datos
contundentes que el PPADS, se puede utilizar como una herramienta
farmacológica para inhibir el NCXREV, con la ventaja de que no bloquea otros
sistemas como los canales de Ca2+ tipo L, lo que lo hace un compuesto mucho
más confiable que el KB-R7943, siempre y cuando no se involucren a receptores
purinérgicos. Este trabajo fue apoyado por CONACYT (81409 y 102013)) y DGAPA,
UNAM (IN201810-3).