UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS ZONA XALAPA PROGRAMA EDUCATIVO: INGENIERÍA AMBIENTAL CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA DE LACTOSUERO EN MUNICIPIOS DE LA REGIÓN CENTRAL DEL ESTADO DE VERACRUZ TRABAJO TEÓRICO PRÁCTICO Que para acreditar la Experiencia educativa: Experiencia Recepcional P r e s e n t a: C. Daniel Alejandro Lugardo González Director: M.I. Eduardo Castillo González Co-Directora: Dra. Lorena De Medina Salas Xalapa, Ver., Diciembre 2013. Agradecimientos: Dra. Lorena, gracias por sus asesorías, consejos y su amistad. Mtro. Castillo, gracias por los conocimientos compartidos y la confianza que siempre depositó en mí. A mis padres, por su incesante esfuerzo y regalarme el futuro. A mis amigas y amigos: Por el cariño y los momentos compartidos. Dedicado a María del Refugio González Rocha, Principal impulsora de mis proyectos. ÍNDICE Pág. CONTENIDO INTRODUCCIÓN………………………………………………………………. 1 I. GENERALIDADES………………………………………………………….. 2 1.1 Antecedentes…………………………………………………………….. 2 1.1.1 Contexto internacional…………………….…………………….…. 2 1.1.2 Contexto nacional…………………………………..………………. 4 1.1.3 Contexto estatal……………………………………..………………. 6 1.2 Planteamiento del problema……………………………………………. 7 1.3 Objetivos………………………………………………………………….. 8 1.3.1 Objetivo general……………………………………….…………….. 8 1.3.2 Objetivos particulares…..…………………………….…………….. 1.4 Justificación………………………………………………….…………… II. MARCO TEÓRICO………………………………………………..……. 2.2 Aguas Residuales………………………………………………….……. 2.2.1 Clasificación………………………………………………….….….. 2.2.2 Características físicas……………………………………….……… 2.2.3 Características químicas…………………………………….…….. 2.2.4 Características biológicas………………………………………...… 8 8 10 10 10 10 11 12 2.3 La industria láctea……………………………………………………… 2.3.1 Panorama general de la industria láctea………………………… 2.3.2 Tipos de contaminantes de la industria láctea………………….. 2.3.3 Leche………………………………………………………………… 2.3.4 Lactosuero…………………………………………………………... 2.3.4.1 Uso………………………………………………………….…… 13 13 13 14 19 20 28 29 29 2.3.4.2 Tipos…………………………………………………………….. 2.3.4.2.1 Lactosuero dulce……………………………………….. 2.3.4.2.2 Lactosuero ácido………………………………………… 2.3.4.3 Composición…………………………………………….……… 2.4 Aguas residuales de la industria láctea………………………..…….. 2.4.1 Características………………………………………………..…….. 2.4.1.1 Humedad…………………………………………………… 2.4.1.2 Cenizas……………………………………………………… 2.4.1.3 pH……………………………………………………………. 2.4.1.4 Acidez……………………………………………………….. 30 31 31 31 32 33 34 ÍNDICE III. 2.4.1.5 Proteína……………………..……………………………… 2.4.1.6 Lactosa……………………………………………………… 34 2.4.1.7 Grasa………………………………………………………... 2.4.1.8 Demanda química de oxígeno (DQO)…………………… 2.4.1.9 Demanda biológica de oxígeno (DBO)…………………. 2.4.1.10 Relación DBO/DQO……………………………………… METODOLOGÍA.……………………………………………..………… 38 39 40 41 42 43 3.1 Desarrollo del muestreo………………...……………………………… 3.1.1 Determinación de la zona, localidades y municipios de muestreo……………………………………………………………………….. 3.1.2 Selección de los sitios de muestreo………………………………. 3.1.3 Recolección de las muestras……………………………………… 3.1.4 Transporte de las muestras……………………………………….. 3.2 Determinación de los parámetros fisicoquímicos………………… 3.2.1 Revisión bibliográfica sobre caracterización fisicoquímica de lactosuero……………………………………………………………………….. 3.2.2 Selección de los parámetros fisicoquímicos……………………… 3.2.3 Realización de las determinaciones………………………………. 3.2.3.1 Determinación del porcentaje de humedad………………….. 3.2.3.2 Determinación del porcentaje de cenizas……………………. 37 43 44 44 44 44 44 44 45 45 47 3.2.3.3 Determinación de pH………………………………….............. 3.2.3.4 Determinación de Acidez……...………………………………. 3.2.3.5 Determinación de Proteína, Lactosa y Grasa………............. 3.2.3.6 Determinación de la DQO……………………………………… 3.2.3.7 Determinación de la DBO……………………………………… IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN……………………………………….. 4.1 Porcentaje de humedad………………………………….…………… 4.2 Porcentaje de cenizas………………………………….…………….. 4.3 Acidez……………………………………………...…………………… 48 49 51 55 56 59 59 60 62 4.4 Valores de pH………………………………………………………..... 4.5 Proteínas……………………………………………………...……….. 4.6 Lactosa………………………………………………………….……… 4.7 Grasa………………………………………………….……………….. 4.8 DQO……………………………………………………………...…….. 4.9 DBO……………………………………………………………...……… IV. CONCLUSIONES………………………………………………...……. V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………...……… 63 65 66 67 69 71 73 74 ÍNDICE ÍNDICE DE TABLAS Pág. Tabla 1.Contenidos en vitaminas del lactosuero………..…………………. 30 Tabla 2. Aminoácidos esenciales en el lactosuero (mg/g de proteína)…. Tabla 3. Municipios donde se muestreo el lactosuero…………………….. Tabla 4. Porcentajes de humedad en el lactosuero………………..……… Tabla 5. Porcentajes de cenizas en el lactosuero…………………………. Tabla 6. Valores de acidez de los lactosueros……………………….……. 37 45 Tabla 7. Valores de pH en lactosuero…………………………………..…… Tabla 8. Proteínas en lactosuero………………………..……..……………. Tabla 9. Valores de lactosa………………………………………..…………. 58 61 62 64 65 66 Tabla 10. Cantidad de grasa presente en el lactosuero………..…………. 68 Tabla 11. DQO del lactosuero…………………………………..……………. Tabla 12. DBO en lactosuero…………………………………………..…….. 70 71 ÍNDICE Pág. ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1. Producción de leche por entidad federativa: los once grandes.. Figura 2. Proceso de elaboración del yogurt………………………………. Figura 3. Diagrama del proceso de elaboración del queso….…………... Figura 4. Metodología de la caracterización fisicoquímica………………. Figura 5. Municipios de muestreo…………………………………………… Figura 6. Estufa y crisoles utilizados para la determinación de los análisis………………………………………………………………………….. Figura 7. Balanza y desecador utilizados para la determinación de los análisis………………………………………………………………………….. Figura 8. Potenciómetro usado para análisis de pH………………………. Figura 9. Lacticheck utilizado para la medición de parámetros a los lactosueros……………………………………………………………………… 15 17 19 42 43 45 47 49 52 ÍNDICE ÍNDICE GRÁFICAS Pág. Gráfica 1. Comparación del porcentaje de humedad entre los lactosuero 60 Gráfica 2. Comparación del porcentaje de cenizas entre los lactosueros. 62 Gráfica 3. Comparación de acidez entre los lactosueros…….…………… 63 Gráfica 4. Comparación de pH entre los lactosueros………….………….. 64 Gráfica 5. Comparación de proteínas entre los lactosueros……………… Gráfica 6. Comparación de lactosa de los lactosueros…………………… Gráfica 7. Comparación de grasa presente entre los lactosueros…..…… Gráfica 8. Valores obtenidos de DQO.……………………………………… Gráfica 9. Valores de DBO……………………………………………….…… 66 67 69 70 72 INTRODUCCIÓN FIS INTRODUCCIÓN En la industria láctea se producen diariamente una considerable cantidad de aguas residuales, que suelen oscilar entre 4 y 10 L de agua por cada uno de leche tratada, según el tipo de producto. La mayor parte de estas aguas proceden fundamentalmente de la limpieza de aparatos, máquinas y salas de tratamiento, por lo que contienen restos de productos lácteos y productos químicos (ácidos, álcalis, detergentes, desinfectantes, etc.). Cada empresa lechera debe minimizar el nivel de contaminación que genera, para reducir el impacto ambiental, pues deben desechar el agua en las mismas condiciones que reciben, aplicando una producción más limpia. Por sus características, los efluentes de estas industrias responden muy bien a tratamiento por métodos biológicos, de los cuales los tratamientos aeróbicos son los más convenientes, pero la selección final del método de tratamiento depende de la colocación y tamaño de la planta (Zamora, 2011). En este trabajo se inicia presentándose una breve introducción del tema, los aspectos generales, las características de aguas residuales de la industria láctea , así mismo se analizan los diversos derivados de la leche y el panorama que rodea a esta industria, partiendo del conocimiento de este alimento y sus principales productos. Se explora en las características del lactosuero como principal residuo contaminador de esta actividad productiva y de los diversos métodos que existen para el tratamiento de este efluente, se mencionan las consecuencias que surgen del vertido de este residuo hacia los cuerpos receptores resaltando el aprovechamiento de este residuo para incorporarlo en la alimentación, productos fermentados y otros procesos alimenticios. Posteriormente se determina la metodología para la realización del muestreo y caracterización fisicoquímica de de lactosuero de los municipios seleccionados comprendidos dentro de la región central del estado de Veracruz. 1 GENERALIDADES I. GENERALIDADES 1.1 Antecedentes 1.1.1 Contexto internacional Internacionalmente, América del Norte, Europa y Australia son las regiones donde se tratan la mayoría de las aguas residuales, sin embargo la problemática generada por la falta de tratamiento de aguas residuales afecta aun al 41% de la población mundial, siendo el Caribe, Oeste y centro de África y en el Sur y Este de Asia, donde se calcula que el 90% del agua no es depurada. Cada día, dos millones de toneladas de aguas residuales y de otros efluentes drenan a las aguas del mundo (ONU, 2010). En la mayoría de los países de ingresos bajos y medios, las aguas residuales se vierten directamente al mar o ríos sin tratamiento alguno. Muchas grandes ciudades no cuentan con plantas de tratamiento o las plantas se revelan rápidamente como insuficientes ya que la población urbana supera el crecimiento de las inversiones. Las descargas de aguas no tratadas ocasionan problemas en las zonas situadas rio abajo, además, las aguas residuales directa o indirectamente riegan 20 millones de hectáreas de tierras a nivel mundial, casi el 7% de la superficie total de regadío. Si bien el uso de aguas residuales en la agricultura puede aportar beneficios, su uso no controlado generalmente está relacionado con impactos significativos sobre la salud humana, por lo cual un buen tratamiento de las aguas residuales puede ser una cuestión positiva para el medio ambiente y conducir a mejorar la seguridad alimentaria, la salud y el desarrollo económico del País en general (OMS, 2012). Diversos Países, como Egipto, Ghana, Brasil, Colombia, Perú, Polonia Nicaragua y España están presentando acciones ante tal problemática, como el mejoramiento de instalaciones sanitarias, investigaciones sobre sistemas alternativos no convencionales de saneamiento urbano, la mejora de los servicios de saneamiento mediante la construcción de nuevas tecnologías alternativas de recolección de aguas residuales, la prevención de la contaminación, el manejo de las aguas pluviales, el manejo y tratamiento de aguas residuales, la gestión integral del agua urbana y la reutilización y reciclaje del agua (UNESCO, 2008). 2 GENERALIDADES Uno de estos estudios de realizó en Portugal donde hubo una recopilación exhaustiva de caracterizaciones de aguas residuales lácteas con lactosuero y un estudio comparativo entre las diferencias de los diferentes tipos de lactosuero y efluentes de la industria láctea; donde se encontró un promedio para la humedad en el lactosuero ácido de 92.8% y en el dulce 93.9%, en cuanto a la cantidad de proteína contenida en el lactosuero ácido se obtuvo un promedio de 2.8 g/L y para el dulce 1.9 g/L; para la DQO se obtuvo un rango de 57,546-74,875 mg/L para el lactosuero ácido y 31,600-39,679 mg/L en cuanto a lactosuero dulce se refiere. Se analizaron las ventajas e inconvenientes de utilizar un pretratamiento fisicoquímico (precipitación, coagulación-floculación) en los sistemas aeróbicos y anaeróbicos, lo que permitió la aplicación de tratamientos de biodegradación aeróbica sin dilución previa. Se concluyó también que la precipitación química con cal o NaOH produce una descarga de calidad y un lodo rico en materia orgánica y nutrientes (N y P). El uso de este lodo como mejorador de suelos en la agricultura puede dar lugar a la aplicación de los sistemas de descarga cero (Carvalho et al., 2013). Por otra parte se realizó una investigación en Hohhot, China donde se estudió el uso de membranas en el tratamiento de aguas residuales lácteas. Para ello se realizó un experimento comparativo sobre la base del porcentaje de eliminación de la demanda química de oxígeno a fin de analizar el rendimiento de la membrana en uso. Donde se encontró un promedio para DQO en lactosueros ácidos de 63,743 mg/L y un 34,743 en los dulces. Los resultados mostraron que este sistema híbrido redujo en un 98% la DQO desde el valor original (Chen et al., 2012). En Colombia se analizó el lactosuero resultante de una empresa quesera ubicada en San Pedro de los Milagros, Antioquia, el cual representa una producción aproximada de 14.400 toneladas anuales, en dicha caracterización se realizó utilizando métodos estándar para los análisis fisicoquímico (pH, densidad) y bromatológico (proteínas por el método de Kjeldahl, grasas mediante el método Gerber y cenizas por gravimetría), los resultados del análisis fisicoquímico demostraron valores de DQO entre 50,000 y 80, 000 mg/L, porcentaje de proteína de 0.86 ±0.04, optando por el uso de microorganismos eficientes para el 3 GENERALIDADES tratamiento de este residuos logrando la remoción de la DQO en aproximadamente 98% evitando un riesgo ambiental. En el año 2007 en la Universidad de El Salvador se realizó una trabajo para obtener el diagnóstico de alternativas de sus usos potenciales en el Salvador, donde se evaluaron alternativas para desarrollar productos a partir de suero láctico, debido a los altos volúmenes de vertido de este residuo, para ello previamente se analizó la caracterización del lactosuero donde se incluyeron los parámetros de sólidos, grasas encontrando un promedio de 0.65 g/L en ácidos y un 0.68 g/L para dulces, pH teniendo un rango que va desde 4.1 al 5.8, con respecto a la acidez el parámetro para el lactosuero ácido es 0.07-0.13% y 0.090.10 para el dulce, en proteínas existe un promedio de 3.3 g/L y 2.6 g/L para el ácido y dulce respectivamente, la DQO tuvo como resultado un 61,965 mg/L y DBO 32,562 mg/L, en dicho estudio se concluyó que al tener un alto contenido de materia orgánica provoca numerosas alteraciones a las condiciones del medio ambiente y que estas características propias del lactosuero lo hacen una excelente materia prima para la elaboración de productos con alto contenido nutritivo. 1.1.2 Contexto nacional Según el último inventario, al concluir el año 2009 existían registradas 2,029 plantas municipales de tratamiento en operación en el País, con una capacidad total instalada de 120,860 L/s, las cuales daban tratamiento a 88,127.1 L/s, equivalentes al 42.1% del agua residual generada y colectada en los sistemas municipales de alcantarillado del País. A finales del 2010, el registro de plantas en operación se incrementó a 2,186 instalaciones, con una capacidad instalada de 126,847.5 l/s y un caudal tratado de 93,600 l/s, lo cual significa un incremento del 4.95% en cuanto a la capacidad instalada y el 6.21% en caudal tratado, lo que permitió alcanzar una cobertura de tratamiento de aguas residuales municipales del 44.8% en el ejercicio (CONAGUA, 2010), presentándose un marcado progreso con respecto al 2009. 4 GENERALIDADES La industria láctea mexicana es una de las más importantes de América. En los últimos años se han impulsado iniciativas dirigidas a desarrollar el sector en los diferentes puntos de la cadena, desde la producción de la leche hasta los canales de distribución incluyendo la reducción de los impactos ambientales, que la producción de los derivados de la leche genera. Gran parte de esta producción es destinada a la elaboración de quesos, donde el lactosuero es el principal subproducto que se obtiene y representa aproximadamente el 85 % del total de la leche descremada que se utiliza. La mayor parte del lactosuero es vertido como efluente a los ríos convirtiéndose en el contaminante principal de la industria láctea. Esta situación genera que las fuentes de agua cercanas a las industrias queseras estén altamente contaminadas por la gran cantidad de sustancia orgánica que el lactosuero aporta perjudicando a las poblaciones aledañas y causando graves daños al medio ambiente. En diversos lugares del territorio nacional, el problema del lactosuero lleva años sin poder resolverse, es el caso de los municipios de Tulancingo y Acatlán en el estado de Hidalgo, aquí se encuentran 71 empresas queseras que producen alrededor de 670 mil litros de suero de leche, derramándose más de la mitad de este volumen, dañando tierras de cultivo, cuerpos de aguas, ganado local y provocando en las comunidades de los Sabinos, Huapalcalco, Caltengo, Guadalupe y Argentina, enfermedades en la piel y ojos, además de los malos olores. La falta de vigilancia, de alternativas para reutilizar el subproducto y la carencia de inversiones, agrava aúnmás los daños al medio ambiente de la región. En 2010 el Instituto Politécnico Nacional realizó un trabajo que tuvo el objetivo de evaluar la eficiencia de la planta de tratamiento de aguas residuales (PTAR) de la Sociedad Cooperativa de Producción de Quesería Holanda S.C.L, ubicada en Campo Hermoso, Nuevo Ideal, Durango, conforme a la Normatividad Oficial Mexicana NOM-001-SEMARNAT-1996. Donde para la DQO se obtuvo un promedio de 65,655 mg/L y 36,897 mg/L para DBO. La evaluación se llevó a cabo al comparar las entradas y salidas por parámetro de cada operación y/o proceso 5 GENERALIDADES involucrado en la PTAR de la quesería, tomando en cuenta sus tiempos de residencia hidráulica (TRH). En el Valle de Tulancingo, Hidalgo se realizó una caracterización fisicoquímica del lactosuero donde los parámetros que se analizaron fueron: materia grasa, lactosa, proteína, sólidos totales, pH y DQO. La lactosa como principal componente del lactosuero y así mismo es la responsable de los altos valores de DQO, para ello se eligieron 15 empresas queseras, donde, entre otros datos se encontró lo siguiente: contenidos de grasa desde 0.29 % hasta 1.09 % con un promedio de 0.622 % en suero dulce. El contenido de grasa en suero de requesón se encuentra entre 0.18 % y 0.33 % con un promedio de 0.266%. Ninguno de las muestras de lactosuero analizadas presentó contenidos menores a 0.1 % de grasa, por lo que ningún suero fue descremado. En el caso del suero dulce el 66.6% de las muestras presentan valores mayores a 0.5 % de grasa, lo que puede evidenciar la adición de grasas de otros orígenes. 1.1.2 Contexto estatal En el estado de Veracruz respecto a la infraestructura para el tratamiento de aguas residuales, en la entidad existen 92 plantas de tratamiento de aguas residuales municipales, con una capacidad instalada de 5.428 m 3/s. De éstas, se encuentran en operación sólo la tercera parte. En el uso industrial, alrededor de 300 industrias generan un volumen de agua residual de 672 m3, de los cuales tan sólo se tratan 329.6 m3 (Plan Veracruzano de Desarrollo, 2011-2016). La alta contaminación de los ríos del estado se debe principalmente a las descargas de la industria láctea de aguas residuales sin tratamiento o con tratamiento deficiente. Este tipo de descargas constituye el 68% del volumen descargado a ríos y cauces de forma puntual, además de que aporta el 76% de la carga contaminante medida en términos del DBO. A nivel estatal, son graves los problemas causados por el vertido de lactosuero, principalmente a ríos y arroyos cercanos a las industrias que lo generan; un ejemplo claro es la contaminación que sufre el rio Naolinco, cuerpo de agua que 6 GENERALIDADES atraviesa las localidades de Miahuatlán, Naolinco, Tonayan, Acatlán y Landero y Coss, siendo Miahuatlán y Naolinco las principales afectadas, este problema se debe, a que una de las principales actividades económicas de estas localidades y municipios es la producción de quesos; se tienen datos locales de que más de 20 mil litros de leche son procesados diariamente y que las aguas de desecho, son en su mayoría arrojadas al drenaje y cuyo destino final es el rio; esto ha provocado un daño ambiental enorme, además del deterioro de la calidad de agua, lo que origina problemas económicos al tener que buscar fuentes de abastecimiento del líquido en las partes altas de la cuenca. Quejas que han sido pasadas por alto, malas administraciones, falta de recursos, programas de recuperación que han sido olvidados, plantas de tratamiento inconclusas; son solo algunos de los motivos por los cuales la contaminación del rio Naolinco sigue sin solución (Huerta, 2012). 1.2 Planteamiento del problema En los municipios de la zona central del estado de Veracruz el vertido del lactosuero representa un severo impacto para el ambiente causando efectos nocivos como exceso en el consumo de oxígeno, eutrofización y toxicidad en cuerpos de agua, además de provocar impermeabilización en suelos. Éste es el desecho más contaminante de esta región, debido principalmente a la elaboración artesanal de quesos, siendo esta una actividad principal económica. Para entender las afectaciones que el vertido del lactosuero tiene hacia el medio es necesario conocer las características físico-químicas que posee y así comprender los procesos que ocurren al estar en contacto con los ecosistemas. Se tiene nula o escasa información acerca de las características fisicoquímicas que posee el lactosuero de esta región, por lo que su análisis y conocimiento es necesaria para tener un registro del comportamiento de los parámetros indicativos que lo componen y mediante este análisis poder tener propuestas de aprovechamiento, tratamiento o disposición de este residuo. 7 GENERALIDADES 1.3 Objetivos 1.3.1 Objetivo general Determinar las características fisicoquímicas del lactosuero de diversas comunidades de la región montañosa del estado de Veracruz. 1.3.1 Objetivos particulares 1. Muestrear lactosuero procedente de diversos municipios de la región central del estado de Veracruz. 2. Determinar los parámetros fisicoquímicos de las muestras obtenidas. 3. Analizar los resultados obtenidos de la caracterización fisicoquímica de las muestras. 1.4 Justificación La industria láctea genera gran cantidad de residuos líquidos, el residuo líquido más contaminante y mayormente producido por parte de esta industria es el lactosuero, dichos residuos requieren la disposición de una gran inversión de capital para su tratamiento por lo que la mayoría de plantas lácteas no tienen sistemas de tratamiento apropiados para la disposición de lactosuero y el vertimiento de sus constituyentes genera pérdidas alimenticias y energéticas. Para dar inicio a cualquier tipo de aprovechamiento o tratamiento de este residuo, como primer paso y quizá el más importante, es de conocer las características fisicoquímicas propias del lactosuero, para este caso, el conocer las características que componen los lactosueros procedentes de esta región del estado de Veracruz. El ingeniero ambiental está relacionado con los procesos de producción y por lo tanto las grandes cantidades de lactosuero que genera, por ello está obligado a buscar la prevención y mitigación de las afectaciones al medio que resulten a consecuencia de esta actividad. Para disminuir la capacidad contaminante del lactosueros necesario conocer las características fisicoquímicas de los diferentes tipos de este residuo a fin de realizar el análisis adecuado para la propuesta y diseño de sistemas de tratamiento eficientes y así también hablar de 8 GENERALIDADES la reutilización del lactosuero contribuyendo a la disminución de la contaminación del ambiente y los elevados costos de tratamiento de aguas residuales. 9 MARCO TEÓRICO II. MARCO TEÓRICO 2.1 Aguas residuales Las aguas residuales resultan de la combinación de líquidos y residuos sólidos transportados por el agua que proviene de residencias, oficinas, edificios comerciales e instituciones, junto con los residuos de las industrias y de actividades agrícolas, así como de las aguas subterráneas, superficiales o de precipitación que también pueden agregarse eventualmente al agua residual (Sundara et al., 2010). 2.2.1 Clasificación A continuación se presenta la clasificación general de las aguas residuales. Domésticas: son básicamente las que provienen de residuos humanos, las cuales llegan a las redes de alcantarillado por medio de descargas de instalaciones hidráulicas de las edificaciones. Industriales: son líquidos generados en los procesos industriales. Poseen características específicas, dependiendo del tipo de industria. Cada tipo de actividad industrial según el proceso, verte un agua residual caracterizada por una contaminación determinada. De modo general se conocen los parámetros característicos de cada una de ellas, pero es precisa su determinación detallada para valorar su tratamiento y posterior incidencia en el medio receptor (Seoanez, 2005). Pluviales: son agua de lluvia, que descargan grandes cantidades de agua sobre el suelo. Parte de esta agua es drenada y otra escurre por la superficie, arrastrando arena, tierra, hojas y otros residuos que pueden estar sobre el suelo. 2.2.2 Características físicas La característica física más importante es su contenido de sólidos totales, el cual está compuesto por materia flotante y materia en suspensión, en dispersión 10 MARCO TEÓRICO coloidal y en disolución. Otras características físicas importantes son la temperatura, color y olor, a continuación se describen brevemente algunas de las características físicas mencionadas. Sólidos en suspensión: los sólidos en suspensión es una medida de los sólidos sedimentables (no disueltos) que pueden ser retenidos con filtro. Se pueden determinar pesando el residuo que queda en el filtro después del secado. Se separan por filtración o decantación (Romero, 2005). Sólidos totales: se definen como los residuos de materia que quedan en un recipiente después de la evaporación de una muestra y su consecutivo en estufa a temperatura definida. Pueden ser tanto las sustancias orgánicas como inorgánicas, los microorganismos y partículas más grandes como la arena y arcilla (Ferrer y Seco, 2008). Sólidos sedimentables: se definen como aquellos sólidos que sedimentan en el fondo de un recipiente de forma cónica en un tiempo de 60 minutos. Este parámetro se utiliza para conocer el volumen y la densidad. El tamaño de estos sólidos son mayores de 0.1 mm (Delgadillo et al., 2010). Sólidos volátiles: son la porción de la materia orgánica que se puede eliminar o volatilizarse cuando esta se quema en un horno mufla a temperatura de 550°C.Los sólidos volátiles biodegradables son la porción de sólidos volátiles de materia orgánica que son biodegradables (Metcalf y Eddy, 2003). 2.2.3 Características químicas En general las características químicas presentes en las aguas residuales son: proteínas, carbohidratos, agentes tensoactivos, grasas animales, cloruros, pesticidas, fenoles, metales pesados, oxígeno disuelto, entre otras. A continuación se presenta una breve descripción de las características químicas mencionadas: pH: el intervalo de pH óptimo está entre 7 y 9 aproximadamente, situándose la condición óptima alrededor de 7.5. Valores de pH por debajo de 7 pueden 11 MARCO TEÓRICO provocar un aumento de la producción de óxidos nitrosos, especialmente de N2O como productos finales de la desnitrificación (Ferrer y Seco, 2008). Nitrógeno total Kjeldahl: la determinación de nitrógeno se hace con frecuencia para controlar el grado de purificación obtenida con los tratamientos biológicos. El control de nitrógeno ha llegado a ser una consideración importante de diseño y ejecución de las plantas de tratamiento de aguas residuales. En algunos estados se han impuesto limitaciones debido a la sospecha de efectos tóxicos sobre la vida de los peces. Es bien sabido que el amoniaco no ionizado es tóxico, pero que el ión amoniaco no lo es. Puesto que la relación entre los dos depende del pH (Mihelcic y Zimmerman, 2011). Fósforo y fosfato: todos los organismos que participan en los procesos biológicos del tratamiento de las aguas residuales requieren fosfato para la producción y síntesis de nuevo tejido celular (Sundara, 2010). Oxígeno libre disuelto: el oxígeno libre disuelto es el reactivo esencial para los procesos aeróbicos, y cuando los organismos aeróbicos utilizan los nutrientes orgánicos, consumen al mismo tiempo oxígeno disuelto. Si no se repone el oxígeno disuelto, el crecimiento aeróbico se detiene cuando se agota el oxígeno, y sólo pueden continuar los procesos anaeróbicos, lentos y malolientes. La disponibilidad del oxígeno libre disuelto en el agua es, por tanto, el factor clave que limita la capacidad de autopurificación de una corriente de agua. Si los nutrientes disueltos entran al agua a una tasa tal que el oxígeno disuelto se gaste más rápidamente de lo que se puede reponer, el agua se desoxigena. Ningún aeróbico obligado, desde los microorganismos hasta los peces, podrá sobrevivir en el agua (Ferrer y Seco, 2008). 2.2.4 Características biológicas Los microorganismos presentes en las aguas residuales se clasifican en aerobios, anaerobios y facultativos. Los denominados aerobios sólo utilizan oxígeno. Los anaerobios sólo pueden crecer en ausencia de oxígeno molecular y los facultativos utilizan oxígeno cuando está presente, pero pueden usar otro aceptor 12 MARCO TEÓRICO de electrones cuando no lo está. Desde el punto de vista de la depuración de aguas residuales, la clasificación trófica es de gran importancia (Ferrer y Seco, 2008). 2.3 La industria láctea 2.3.1 Panorama general de la industria láctea La industria láctea es uno de los sectores más importantes de la economía de países industrializados y en desarrollo. Es la tercera actividad más importante dentro de la rama de la industria de alimentos, después de la industria del maíz y de la carne (López, 2004). Por lo anterior, se puede saber que la industria láctea genera cantidades significativas de residuos líquidos, mayormente leche diluida, leche separada, crema y suero, incluyendo grasas, aceites, sólidos suspendidos y nitrógeno. La descarga de éstos sin tratamiento previo se convierte en un foco contaminante debido a las características que aportan cada uno de los factores producidos antes mencionados. Se debe considerar que posiblemente en México la relación sea mayor por la menor tecnificación que se tiene en la producción de derivados lácteos y de igual manera, las pérdidas de leche sean mayores. 2.3.2 Tipos de contaminantes de la industria láctea En las industrias lácteas se produce diariamente una considerable cantidad de aguas residuales, que suele oscilar entre 4 y 10 L de agua por cada uno de leche tratada, según el tipo de producto. La mayor parte de estas aguas proceden fundamentalmente de la limpieza de aparatos, máquinas y salas de tratamiento, por lo que contienen restos de productos lácteos y productos químicos (ácidos, álcalis, detergentes, desinfectantes, etc.). Cada empresa lechera debe minimizar el nivel de contaminación que genera, para reducir el impacto ambiental, pues deben desechar el agua en las mismas condiciones que reciben, aplicando una producción más limpia (Zamora, 2011). 13 MARCO TEÓRICO Contaminación atmosférica: la contaminación atmosférica por parte de la industria láctea proviene de sus generadores de vapor, que habitualmente son calderas que trabajan a presión baja, con una generación de vapor inferior a las 20 Tm/hr las cuales usan como combustible gas para su funcionamiento (Ávilaet al., 2000). Residuos sólidos: la generación de residuos sólidos en la industria láctea es muy pequeña y se circunscribe generalmente a los desechos de envases y embalajes, tales como vidrio, cartón, plástico, envases especiales, etc. El problema es más importante para el consumidor final, que es el que dispone de los envases, que para la propia industria (Zamora, 2011). Efluentes líquidos: la industria láctea genera residuos líquidos, los cuales requieren de una gran cantidad de inversión de capital (Donoso et al., 2009). Mayormente leche diluida, leche separada, crema y suero, incluyendo grasas, aceites, sólidos suspendidos y nitrógeno. La descarga de éstos sin tratamiento previo se convierte en un foco contaminante. Los lavados contienen residuos alcalinos y químicos utilizados para remover la leche y los productos lácteos; así como materiales total o parcialmente caramelizados de los tanques, tambos, latas de mantequeras, tinas, tuberías, bombas, salida calientes y pisos. 2.3.3 Leche La leche es considerada el alimento más completo que existe en la naturaleza. Representa una fuente de proteína de alto valor, así como una fuente abundante y equilibrada de calcio, fósforo, magnesio y potasio, además es rica en vitaminas como la riboflavina, vitamina B6, vitamina B y vitamina A. Así mismo, gracias a las características fisicoquímicas de la leche se puede procesar para obtener diversos productos. La propiedad fundamental de la leche es la de ser una mezcla tanto física como química de sustancias definidas: lactosa, glicéridos de ácidos grasos, caseínas, albuminas, sales, etc. Desde el punto de vista físico, coexisten la lactosa y las sales, mientras que las caseínas y las proteínas llamadas solubles (albuminas y globulinas) forman una dispersión coloidal y las sustancias liposolubles se encuentran como emulsión. A pesar de que cada sistema tiene 14 MARCO TEÓRICO una densidad diferente, estas se encuentran en equilibrio, debido a los mecanismos particulares de estabilidad de las macromoléculas (Badui, 2006). La leche de vaca tiene una composición promedio de 87.35% de agua la cual es regulada por la lactosa que se sintetiza en las células secretoras de la glándula mamaria, 3.25 % proteínas, 3.76% grasa, 4.84% carbohidratos y 0.80% cenizas (Kourtinas, 2009). En la Figura 1 se muestran las principales entidades federativas productoras de leche, en ella se muestra el 81% de la producción del total de la producción de leche y se puede observar que está dividida de esta manera: Jalisco aporta el 18 %, Coahuila el 12.1 %, Durango 9.1 %, Chihuahua 8.7 %, Guanajuato 7.2 %, Veracruz 6.9 %, Estado de México 4.4 %, Hidalgo 4.2 %, Puebla 3.7 %, Chiapas 3.5 % y Aguascalientes 3.5 %. Figura 1. Producción de leche por entidad federativa: los once grandes. Fuente: SIAP, 2010 Productos de la leche En 2009 la leche producida en el país habría alcanzado para distribuir 98 litros a cada mexicano, considerando una población de 107.6 millones de personas. La 15 MARCO TEÓRICO definición oficial en México para derivados o productos lácteos es: “productos obtenidos a partir de la leche o sus componentes y otros ingredientes funcionalmente necesarios para su elaboración, incluidos los productos con grasa vegetal”. De la leche que se destina a la industria, 81 % se usa para la producción de quesos, 11.5 % para mantequilla, 7 % es para producir yogurt y el 0.5 % para helados y otros productos (SSA, 2010). Yogurt La NOM-181-SCFI-2010 define el yogurt como el producto obtenido de la fermentación de leche, estandarizada o no, por medio de la acción de microorganismos Streptococcusthermophilus y Lactobacillusdelbrueckii subespecie bulgaricus y teniendo como resultado la reducción de pH. En medicina natural se sabe que si el intestino está sano, todo el organismo lo está. El yogurt es uno de los alimentos más favorables, sus principales efectos en la salud son: mejorar, restaurar y sanar la flora intestinal, sus propiedades antimicrobianas permiten la evacuación del contenido estomacal, inhibiendo los microorganismos indeseables alojados en el estómago; mantener la flora intestinal normal y la microflora urogenital. Mejora el valor nutricional de alimentos y la resistencia contra organismos patógenos. El yogurt es muy útil para las personas que padecen de diarreas, estreñimiento o trastornos gastrointestinales. Ayuda en casos de patología cardiovascular, previene la osteoporosis en cualquier edad (el yogurt aporta el 70% del contenido total de calcio en la dieta, por lo que este alimento se convierte en una abundante fuente natural de calcio). Las bacterias lácticas del yogurt incrementan diversas funciones inmunológicas, que estimulan la acción antitumoral, la cual retrasa (o evita) la reaparición de cáncer. Es un excelente antialérgico: al depurar los intestinos, reduce o desaparece las alergias provocadas por un organismo intoxicado. Ayuda en casos de anorexia y bulimia; su alto contenido en calcio y proteínas de alta calidad, vitaminas e hidratos decarbono, restaura enormemente las defensas del organismo. Es muy útil para 16 MARCO TEÓRICO los alcohólicos, drogadictos o personas que han tomado muchos medicamentos. Para los intolerantes al azúcar de la leche, el yogurt es una opción muy benéfica. El yogurt requiere de una temperatura de envasado de aproximadamente 42 °C y pasar por un proceso de fermentación en cámaras calientes a 42 °C para obtener el grado óptimo de acidez; este proceso puede llegar a durar aproximadamente cuatro horas. Una vez obtenida, debe enfriarse hasta los 4 grados para detener la fermentación. En los yogures batidos, los de textura cremosa, con o sin frutas, el proceso es diferente, en cuanto la fermentación se realiza en depósitos, previo al proceso de envasado, que se realiza en frío, por lo que no necesita de fermentación posterior. Las bacterias utilizan como fuente de energía la lactosa o azúcar de la leche y liberan ácido láctico como producto de desecho; este provoca un incremento de la acidez que hace a su vez que las proteínas de la leche precipiten, formando un gel. En la Figura 2 se puede observar el proceso antes mencionado. Figura 2. Proceso de elaboración del yogurt. Fuente: García et al., 2008. 17 MARCO TEÓRICO Queso Desde un lado industrial la producción de quesos en la actualidad se da en mayor volumen en la industria láctea, las aguas generadas en el proceso de elaboración de queso contienen alto grado de materia orgánica. Para la elaboración de cualquier tipo de queso, la recepción, el análisis de calidad y la pasteurización de la leche son procedimientos rutinarios que deben observarse cuidadosamente. Así mismo la actividad artesanal de la elaboración de quesos es una actividad importante en ciertas zonas en donde el desecho del lactosuero producido en este proceso no es tratado para su posterior destino al drenaje o a cuerpos receptores, si no que se arroja tal cual sale sin ningún tratamiento. En el arte o la ciencia de la fabricación de quesos hay que considerar cinco factores principales: la composición de la leche, la velocidad de acidificación, el desarrollo de la acidificación, el contenido de humedad y la manipulación de la cuajada (Lucey et al., 2003). La fabricación de un queso comprende cuatro fases esenciales: La coagulación: modificaciones fisicoquímicas de las micelas de caseína que, bajo la acción de enzimas proteolíticas y/o de ácido láctico, llevan a la formación de un entramado proteico denominado coagulo o gel (fig.3. 2). El desuerado: Separación del lactosuero tras la rotura mecánica del coagulo por moldeo, centrifugación y en algunas ocasiones sometiéndolo a presión, obteniéndose al final de esta etapa la cuajada (fig.3. 4). El salado: incorporación de la sal en la masa de cuajada, en la superficie o por inmersión en salmuera (fig. 3. 7). El afinado o maduración: Conjunto de transformaciones bioquímicas de los componentes de la cuajada por acción de enzimas, en gran parte de origen microbiano (fig. 3. 8). 18 MARCO TEÓRICO Figura 3. Diagrama del proceso de elaboración del queso. 1 pasteurización, 2 coagulación, 3 cortado, 4 desuerado, 5 moldeo, 6 prensado, 7 salado, 8 maduración y refrigeración, 9 empacado. Fuente: [En línea] http://avibert.blogspot.com/2009/09/elaboracion-de-quesos- diagrama-del.htm. Última consulta: 05/ 09/ 2013. 2.4.4 Lactosuero El lactosuero, suero lácteo o suero de leche es el líquido que se separa de la leche cuando esta se coagula, incluye todos los componentes del queso que no se integran a la coagulación de la caseína. Se estima que a partir de 10 litros de leche de vaca se puede producir de 1 a 2 kg de queso y un promedio de 8 a 9 kg de suero. Las proteínas y la lactosa que contiene el lactosuero se transforman en contaminantes cuando el líquido se vierte al ambiente sin ningún tipo de tratamiento, ya que la carga de materia orgánica que contiene permite la reproducción de microorganismos produciendo cambios significativos en la DBO del agua contaminada (Valencia y Ramírez, 2009). La producción de lactosuero a nivel mundial genera más de 145 millones de toneladas por año por lo que se justifica el desarrollo de diversos métodos de tratamiento para este residuo. La mayoría de las plantas lácteas no tienen sistemas de tratamiento apropiados para la disposición de lactosuero y el 19 MARCO TEÓRICO vertimiento de los constituyentes de lactosuero generan una significante potencial alimenticio y de energía; además, que se caracteriza por una alta concentración de DQO y DBO representando alto contenido orgánico (Donoso et al., 2009). Según Almécija (2007), la distribución de la producción de lactosuero en el mundo en el año 2005 fue: Europa 53%, América del Norte y Central 28%, Asia 6%, África 5%, Oceanía 4%, América del Sur 4%, estos porcentajes representan alrededor de 115 millones de toneladas de lactosuero generado a través de la elaboración de queso (Briczinski y Roberts, 2002; Revillion et al., 2003; Londoño, 2006). De este valor, el 45% es vertido a ríos, lagos y otros centros de aguas residuales, o en el suelo, lo que representa una pérdida significativa de nutrientes, ocasionando serios problemas de contaminación (Londoño, 2006). En México, el suero que se produce es dulce y medio ácido. Los porcentajes anteriores indican el enorme desperdicio de nutrientes en el proceso de la fabricación del queso. El lactosuero producido en México es de cerca de 1 millón de toneladas anuales y contiene 50 mil toneladas de lactosa y 5 mil toneladas de proteína verdadera. A pesar de esta riqueza nutricional, potencialmente utilizable, el 47% del lactosuero se descarga al drenaje, llegando a ríos y suelos, lo que provoca un serio problema de contaminación. La descarga continua de suero en estos ecosistemas altera sus propiedades fisicoquímicas. En el caso de los suelos, disminuye el rendimiento de las cosechas, pero además se observa el fenómeno de lixiviación, este fenómeno se presenta debido a que el lactosuero contiene nitrógeno soluble en agua, el cual se arrastra, contaminando el agua reduciendo la vida acuática al agotar el oxígeno disuelto lo que lo convierte en un peligro para la salud de los animales y humanos (Valencia y Ramírez, 2009). 2.3.4.1 Uso Se han realizado numerosas propuestas de uso del lactosuero para la industria alimentaria, puesto que constituye una fuente económica de proteínas que otorga múltiples propiedades en una amplia gama de alimentos. Los productos del suero, incluyendo la lactosa, mejoran la textura, realzan el sabor y color, emulsifican y 20 MARCO TEÓRICO estabilizan, mejoran las propiedades de flujo y muestran muchas otras propiedades funcionales que aumentan la calidad de los productos alimenticios. Basados en el valor nutricional del lactosuero, se han obtenido productos secundarios como etanol, ácidos orgánicos, bebidas no alcohólicas, bebidas fermentadas, biomasa, concentrados, aislados e hidrolizados de proteína, películas comestibles, medio de soporte para encapsular sustancias, producción de xantana, enzimas, separación de la lactosa para fines endulzantes en alimentos entre otras aplicaciones (Parra, 2009). Bebidas La formulación de bebidas a base de lactosuero, representa una expectativa saludable y comercial muy buena, ya que los beneficios proporcionados por la ingesta de proteínas, especialmente altas en aminoácidos esenciales, aminoácidos ramificados y leucina, se asocian a la pérdida de peso, reducción de grasa corporal, aumento de la síntesis de proteínas musculares, reducción de la secreción de insulina y nivel de triglicéridos plasmáticos entre otros. Básicamente la forma para obtener una bebida de lactosuero es obtener una base fluida, esta base puede ser: a) El suero en sí, al cual se añade otro fluido, pudiendo ser concentrados o jugos de frutas o verduras, buscando la homogeneización y así obtener las características deseadas en cuanto a composición, sabor, etc., que van de acuerdo al tipo de bebida que se desea, siendo algunas, bebidas deportivas, bebidas sin alcohol. b) La producida por la fermentación utilizando levaduras, bacterias u hongos. Las bebidas producidas por esta vía, con bacterias como Streptococcus termophilus, Lactobacillus delbrueckii, se consideran de tipo funcional, comúnmente conocidas como bebidas probióticas. 21 MARCO TEÓRICO Concentrados de proteínas Por sus siglas en inglés Whey Protein Concentrate (WPC), se obtienen al hacer pasar el suero a través de una membrana semipermeable, esta permite el paso selectivo de sustancias de bajo peso molecular tales como agua, iones y lactosa, reteniendo las proteínas, elementos con alto peso molecular, hay diversos procesos membranarios para su obtención, estos son aplicados por la industria lechera de forma masiva, ya que han resultado un gran éxito; los procesos de separación son la microfiltracion, ultrafiltración, nanofiltracion y osmosis inversa, cada uno de estos métodos se utiliza en relación con los componentes que son capaces de permear, siendo el método más utilizado la ultrafiltración, ya que con este se retienen las proteínas del lactosuero además de ser el más económico y de fácil operación. Una vez retenidas las proteínas, se concentran mediante evaporación y finalmente se liofilizan. El porcentaje de proteína del producto varia de entre 30 y 80%, su demanda depende de las características de cada uno. Son diversas las aplicaciones que se dan a los concentrados, siendo la principal en la industria alimentaria como sustitutos de leche descremada, yogurt, queso procesado, salsas, fideos, galletas, helados, pasteles, derivados lácteos, además de su aplicación por sus características gelificantes, emulsificantes y de formación de espuma (Krzeminski et al., 2011; Dissanayake & Vasiljevic, 2009; Parra, 2009; Baldasso et al., 2011). Producción de bio-etanol En la actualidad, la producción y utilización de bio-combustibles se ha incrementado de manera notable, ya que muchos los consideran una posibilidad viable para la sustitución de los combustibles fósiles, usados en el transporte, sin necesidad de hacer mayores cambios a los motores de los vehículos. El maíz, la azúcar y algunos cereales como el trigo son el principal sustrato para la obtención 22 MARCO TEÓRICO de bio-etanol, sin embargo, esto contribuye al incremento de precios de estos productos en el mercado. Es por esta razón que se han buscado otros tipos de sustratos que puedan ser utilizados como sustitutos dentro de los cuales se encuentra el lactosuero, que cuenta son una propiedad determinante, el contenido de azúcares en él (lactosa), que como todo carbohidrato, puede fermentarse para obtener etanol. La producción de una bebida alcohólica por conversión del lactosuero es una alternativa de gran interés para la utilización de este subproducto industrial (Dragone et al., 2009). Destilerías de lactosuero están en operación en Irlanda, Nueva Zelanda y los Estados Unidos. En la fermentación se emplea Kluyveromyces marxianus var. marxianus o Kluyveromyces fragilis y lactosuero desproteinizado como sustrato (Mawson, 2003; Dragone et al., 2009). El proceso puede ser operado bajo condiciones asépticas usando lactosuero pasteurizado, con temperatura de fermentación entre 24-34ºC (Mawson, 2003). Este proceso fermentativo origina un rendimiento de etanol en un rango de 75-85% del valor teórico, partiendo que por cada 0,538 kg de etanol se necesita de 1 kg de lactosa metabolizada, esto refleja la importancia en la producción de etanol que tiene el lactosuero. Los procesos para la producción de etanol comparten algunos pasos y principios básicos; el suero permeado por ultrafiltración de proteínas es concentrado por osmosis inversa para retener su contenido de lactosa. La lactosa obtenida es fermentada con sepas especiales de levadura, una vez completada la fermentación, el líquido resultante se separa y se lleva al proceso de destilación para la extracción del etanol. Hay varios estudios donde se han utilizado diferentes sepas de microorganismos para la fermentación del suero, su propósito es encontrar tanto a los organismos como las condiciones ambientales y técnicas adecuadas para obtener la mayor tasa producción de etanol, entre estas están la eliminación de la inhibición del 23 MARCO TEÓRICO sustrato, utilizar polvo de lactosuero en lugar de suero crudo para eliminar los costos de concentrar la lactosa, entre otros (Ozmihci & Kargi, 2008; Sansonetti et al., 2009; Ling, 2008). Producción de biomasa La producción de biomasa de levaduras es un proceso en el cual se da una reacción bioquímica entre las células y la lactosa para producir células microbianas cuyo propósito es proporcionar una fuente de proteína para la alimentación humana. El uso de lactosuero para la producción de esta biomasa tiene las ventajas de ser un proceso de tratamiento simple y la descarga final de suero tiene una menor concentración de materia orgánica ya que la lactosa del suero es transformada en biomasa de levadura. La tasa de producción de esta levadura depende de diversos factores tales como la naturaleza del microorganismo, su capacidad de metabolizar la lactosa y principalmente su contenido de proteínas en peso seco además de las condiciones ambientales y la composición del medio de cultivo (Parra, 2009; Anvari & Khayati, 2011). Levadura para panificación El lactosuero en polvo es bien conocido como ingrediente en la industria de la panificación por resaltar su sabor y cualidades de calidad. Volumen, textura, corteza y retención de frescura en el pan de trigo, estas características son proporcionadas por la incorporación de una combinación de emulsificantes y lactosuero en polvo (Wit, 2003). Dos procesos han sido desarrollados en la producción de levaduras destinadas a la panificación, en el primero la lactosa es hidrolizada utilizando β-galactosidasa, y la glucosa y galactosa son consumidas simultáneamente por la levadura (Mawson, 2003). El segundo proceso utiliza un sistema de fermentación de dos etapas. En el 24 MARCO TEÓRICO estado inicial, las bacterias ácido lácticas convierten lactosa a lactato y este es consumido en la segunda etapa por la levadura. Finalmente, la biomasa puede ser degradada mecánicamente o biológicamente para eliminar componentes celulares los cuales pueden purificar o transformarse a productos de alto valor (Mawson, 2003). Ácidos orgánicos Diferentes ácidos orgánicos pueden ser obtenidos a través de la fermentación de lactosuero, entre estos se tienen, butírico, propiónico y acético los cuales representan una posibilidad para la utilización de lactosuero como sustrato (Alam et al., 2000). Ácido acético Durante la fermentación del lactosuero, el etanol puede ser además metabolizado a ácido acético por Acetobacter spp. Este proceso ha sido seguido y comercializado por Alimentos Kraf, resultando en vinagre de lactosuero que puede ser utilizado en ensaladas de cocina y otros alimentos, sin que haya grandes diferencias con respecto al vinagre tradicional porque son procesos semejantes. La producción de ácido acético a partir de lactosuero ha sido base para la síntesis de otros químicos como el acetato, el cual podría estar disponible en el mercado en poco tiempo (Wit, 2003). El ácido acético fue producido a partir de la fermentación anaerobia de lactosa por cultivos de Streptococcus lactis y Clostridiumformicoaceticum a 35°C y pH entre 7,0 y 7,6, la lactosa fue convertida a ácido láctico, ácido acético. El rendimiento total de ácido acético a partir de lactosa fue cerca de 95% a pH 7,6 y 90% a pH 7,0. En la fermentación en lote de lactosuero permeado conteniendo cerca de 5% de lactosa a pH 7,6, la concentración de ácido acético alcanzó 20 g/L en menos de 20 horas (Mawson, 2003). 25 MARCO TEÓRICO Ácido propiónico El ácidopropiónico ha sido muy utilizado en industrias químicas, de alimentos y farmacéuticas (Morales et al., 2006), en la industria alimenticia es añadido como un agente fungistático a productos de panadería (Mawson, 2003). Normalmente, casi todo el ácidopropiónico es elaborado por síntesis química, sin embargo se puede obtener a través de fermentación de la lactosa del lactosuero por Propionibacterium acidipropionici, freudenreichii spp. Shermanii y Lactobacillushelveticus a Propionibacterium condiciones de fermentación de 30ºC y pH 6.5-7.5. Suplementos como extracto de levadura, y lactosa realzan considerablemente la producción de propionato y un rendimiento cercano de 40% de lactosa fermentada es lograda después 60-70 horas de fermentación (Mawson, 2003). El lactosuero ha sido usado extensivamente en medio de fermentación por Aspegillius niger para la producción de ácido cítrico), al respecto se han realizado distintas investigaciones indicando que composición nutricional del medio, condiciones ambientales, deficiencia de metales, pH y oxígeno disuelto entre otros, afectan la producción (Holi y Delaimy, 2003). El ácido D-glucónico un producto de oxidación de la glucosa ha encontrado una buena aplicación en las industrias de alimentos y farmacéutica. La producción este ácido es principalmente realizado a través de fermentación microbiana, donde la lactosa es generalmente usada como una fuente de carbono para la producción de este ácido. La fermentación puede ser mejorada al utilizar materias primas económicas empleando microorganismos que tengan la habilidad al utilizar carbohidratos como fuente nutritiva (Haddadin et al., 2009). Quesillo El proceso más antiguo para la utilización del lactosuero es el calentamiento para recuperar la proteína del mismo con un concentrado proteico insoluble. La proteína láctea obtenida tiene muy variadas aplicaciones entre las cuales se citan 26 MARCO TEÓRICO la elaboración de sopas, condimentos para ensaladas, pastas enriquecidas con proteína, helados, productos dietéticos y productos cárnicos. El aprovechamiento del lactosuero ácido de queso doble crema para la elaboración de quesillo, es una alternativa de aplicación de este subproducto. El quesillo, un queso de pasta hilada de pH bajo es uno de los productos aceptados como exportables. En el Valle de Aburrá y en el Oriente Antioqueño de Colombia existe alrededor de 28 empresas lácteas que tienen entre sus líneas de producción la elaboración de queso fresco, estas producen 41 toneladas de queso fresco y quesillo bajo el sistema artesanal y 24 toneladas en plantas con tecnología moderna, lo que representa una generación de 3.684.000 litros por día de lactosuero (Londoño, 2006). Estudios que reflejan el efecto de la utilización de diferentes ácidos orgánicos como acético, cítrico y láctico en coagulación para la elaboración de quesillo se han realizado observándose que no tuvieron efecto en el rendimiento con un valor promedio final de 9,73% cercano al 10% que es el valor teórico expresado (Londoño, 2006). Quesos Hoy en día, los quesos son elaborados por razones de preservación, versatilidad, conveniencia y reducción de costos. Con los avances en la tecnología de lácteos, nuevos ingredientes como leche en polvo, lactosuero en forma de polvo o concentrados de proteína de lactosuero (WPC) están ahora disponibles para la incorporación dentro del procesamiento del queso (Angulo, 2005; Lee y Anema, 2009). La adición de lactosuero en la elaboración de queso es limitada, al agregar la proteína coagulada o en forma de concentrado se obtuvo un aumento en el rendimiento y originó alteraciones importantes en la textura, cuerpo y contenido de humedad, como se ha podido demostrar en investigaciones llevadas a cabo en queso Cheddar (Hinrichs, 2001). 27 MARCO TEÓRICO Otros usos Se ha investigado la conversión de materia orgánica en energía eléctrica a través de microorganismos que donen electrones en celdas biológicas de combustible. Aquí, el lactosuero es usado como fuente de carbohidratos para la Saccharomyces cerevisiae, en condiciones de bajas de temperatura y presión, obteniéndose una generación de energía y corriente máximos de 50 μW y 470 μA, respectivamente (Najafpour et al., 2010). La creación de películas comestibles a base de proteínas de suero como empaques para alimentos ofrece propiedades funcionales comparables con películas derivadas de caseinato de sodio, potasio o calcio en cuanto a permeabilidad, resistencia, elongación, suavidad y pureza, tal como se demuestra en los resultados obtenidos por (Banerjee & Chen, 1995), en su estudio utilizaron concentrados de proteínas de suero y aislados de proteínas de suero para obtener películas comestibles más para su aplicación en alimentos empacados debido a que su comportamiento funcional resulta igual o mejor que con películas basadas en caseinatos, además de ser más económicas. La erosión de los surcos de irrigación de tierras de cultivo disminuye su rendimiento potencial y degrada la calidad del agua superficial. Algunas técnicas para controlar esta erosión incluyen tiras de filtro con vegetación, mini-cuencas y el tratamiento con poliacrilamida (PMA), siendo este último el más efectivo y utilizado (Lehrsch et al., 2008). Utilizan lactosuero proveniente de queso cottage para estabilizar los agregados del suelo y reducir las pérdidas por sedimentación en los surcos de irrigación, obteniendo un aumento de la estabilidad de los agregados en un 25% y una reducción de pérdidas por sedimentación del 75%. 2.3.4.2 Tipos Las características del tipo de lactosuero dependen de la coagulación a la que fue sometida la leche para la obtención del gel, pudiéndose diferenciar dos tipos fundamentales: Lactosuero dulce o enzimático y lactosuero ácido. 28 MARCO TEÓRICO 2.3.4.2.1 Lactosuero dulce Este lactosuero se genera debido a la coagulación enzimática. Una vez que la leche alcanza la temperatura para la coagulación, se adiciona un enzima proteolítica en cantidad suficiente para que la coagulación se produzca en un tiempo determinado, tanto la temperatura y el tiempo de coagulación dependerán del tipo de queso. Se pueden utilizar coagulantes como la quimosina, pepsina o una mezcla de ambas. El efecto que ocasiona la enzima en la caseína es su división en dos partes, una hidrófila (caseino macropeptido) y una hidrófoba (paracaseína); esto hace que la paracaseína forme micelas que se unen en forma de fibrillas, así establecen un conjunto o retículo de estas que aprisiona en su interior los componentes de la leche. Se debe destacar que en el lactosuero dulce o enzimático la casi ausencia de ácido láctico debido a que no se desarrollan los microorganismos que lo producen, por lo que el pH es muy cercano al de la leche y no hay variación de la composición mineral. El suero dulce es el más empleado por la industria y tiene una composición química más estable (Chamorro y Losada, 2002). 2.3.4.2.2 Lactosuero ácido Este se produce por coagulación ácida, se adiciona un ácido mineral u orgánico o por la acción de los microorganismos propios de la leche. Cuando el valor de pH llega a 4.6, que corresponde al punto isoeléctrico de las caseínas, están floculan formando un precipitado más o menos granuloso, pero si la acidificación se da lentamente, se formara un coagulo liso y homogéneo que ocupara el volumen inicial de la leche. Los factores que participan en la coagulación acida son: el cultivo de bacterias lácticas de la leche (si es que se utilizan), la temperatura y el tiempo de duración de la coagulación, estos están íntimamente relacionados. El cultivo utilizado para la acidificación condiciona la temperatura de coagulación, si la temperatura es inferior a la óptima, el tiempo de coagulación será mayor (Panesar et al.,2007). 29 MARCO TEÓRICO 2.3.4.3 Composición En general, el lactosuero contiene todos los aminoácidos esenciales, aporta proteínas de una calidad extraordinaria y con alto coeficiente de uso para el organismo humano. Contiene principalmente lactosa, proteínas como sustancias de importante valor nutritivo, minerales, vitaminas y grasa. La lactosa es el principal componente nutritivo (4,5 % p-v), proteína (0,8% p/v) y lípidos (0,5%). Existen varios tipos de lactosuero dependiendo principalmente de la eliminación de la caseína, el primero denominado dulce, está basado en la coagulación por la renina a pH 6.5. El segundo llamado ácido resulta del proceso de fermentación o adición de ácidos orgánicos o ácidos minerales para coagular la caseína como en la elaboración de quesos frescos (Jelen, 2003). En la tabla 1 se muestran los registros de los contenidos de vitaminas, su concentración y necesidades diarias, encontrándose con que el ácido pantoténico presenta la mayor concentración con 3.4 mg/ml seguido de ácido ascórbico con 2.2 mg/ml. Tabla 1.Contenidos en vitaminas del lactosuero. Vitaminas Tiamina Riboflavina Ácido Nicotínico Ácido pantoténico Piridoxina Cobalamina Ácido ascórbico Concentración (mg/mL) 0,38 1,2 0,85 3,4 0,42 0,03 2,2 Necesidades diarias (mg) 1,5 1,5 10 mg-20 mg 10 1,5 2 10 mg-75 mg Fuente: Muñi et al., 2005. Este gran contenido de nutrientes genera aproximadamente 3.5 kg de demanda bioquímica de oxígeno y 6.8 kg de demanda química de oxígeno por cada 100 kg de lactosuero líquido, siendo la lactosa, el principal componente de sólidos que contribuye a la alta DBO y DQO (Koutinas et al., 2009). 30 MARCO TEÓRICO 2.4 Aguas residuales de la industria láctea El agua residual de las industrias lácteas contiene, principalmente, numerosos microorganismos patógenos causantes de enfermedades, nutrientes que pueden estimular el crecimiento de plantas acuáticas, al igual que puede incluir también diversos compuestos tóxicos (OMS, 2012). El tratamiento completo de las aguas residuales se lleva a cabo por una combinación secuencial de varias operaciones físicas, químicas y procesos biológicos. 2.4.1 Características En general, los efluentes líquidos de una industria láctea presentan las siguientes características: Según Corlován, 2011, las aguas residuales lácteas pueden contener agentes patógenos de materiales contaminados o del proceso de producción. a) Variaciones importantes del pH: estos efluentes son generalmente neutros o poco alcalinos, pero tienen tendencia a volverse ácidas muy rápidamente a causa de la fermentación del azúcar de la leche produciendo ácido láctico, sobre todo en ausencia de oxígeno y la formación simultánea de ácido butírico, descendiendo el pH a 4,5 – 5,0 (Arango et al., 2008). b) Según Fernández, 2007, estos efluentes presentan niveles elevados de nitrógeno y fósforo: un contenido de nitrógeno entre 50 – 80 mg/L y fósforo entre 50 – 80 mg/L, esto debido a los productos de limpieza y desinfección. c) Alto contenido de materia orgánica. 2.4.1.1 Humedad El agua se encuentra en los alimentos en tres formas: como agua de combinación, agua adsorbida y en forma libre, aumentando el volumen. El agua de combinación está unida de alguna forma química como agua de cristalización o como hidratos. El agua adsorbida está asociada físicamente como una monocapa sobre la superficie de los constituyentes de los alimentos. El agua libre es aquella que es 31 MARCO TEÓRICO fundamentalmente un constituyente separado, con facilidad se pierde por evaporación o secado y es la que tiene mayor predominancia. Dado que la mayor parte de los alimentos son mezclas heterogéneas de varias sustancias, pueden contener cantidades variables de agua de los tres tipos (Ferrer y Seco, 2008). En los alimentos, la humedad debe mantenerse dentro de unos límites establecidos, por lo que su determinación es un análisis importante en el control de calidad de los mismos ya que: a) Determinados alimentos (azúcares, sal, etc.) se aglomeran con exceso de humedad. En otros, como la harina, el exceso de humedad da lugar a la formación de grumos y la aparición de mohos, pudiendo también fermentar al ser almacenada en lugares calurosos. b) La humedad afecta a la textura de determinados alimentos como los derivados cárnicos (embutidos) por lo que un contenido inapropiado de agua hace que estos pierdan valor comercial. c) Permite detectar algunas adulteraciones (por ejemplo, el aguado de la leche para su distribución como tal o para la fabricación de quesos) (Sierra et al., 2007). Se ha reconocido que los alimentos con un mayor contenido de humedad son los más perecederos, de tal manera que el control en el contenido de humedad en un producto es una herramienta para su conservación (Fito et al., 2001). 2.4.1.2 Cenizas Las cenizas permanecen como residuo luego de la calcinación de la materia orgánica del alimento, Se denomina así a la materia inorgánica que forma parte constituyente de los alimentos (sales minerales). Las cenizas de los productos alimentarios están constituidas por el residuo inorgánico que queda después de que la materia orgánica se ha quemado. Las cenizas representan el contenido en minerales del alimento; en general, las cenizas suponen menos del 5% de la materia seca de los alimentos. Los minerales, junto con el agua, son los únicos 32 MARCO TEÓRICO componentes de los alimentos que no se pueden oxidar en el organismo para producir energía; por el contrario, la materia orgánica comprende los nutrientes (proteínas, carbohidratos y lípidos) que se pueden quemar (oxidar) en el organismo para obtener energía, y se calcula como la diferencia entre el contenido en materia seca del alimento y el contenido en cenizas (Ferrer y Seco, 2008). Las cenizas se determinan como el residuo que queda al quemar en un horno ó mufla los componentes orgánicos a 550ºC durante 5 horas. En ocasiones es interesante determinar las cenizas insolubles en ácido clorhídrico, que pretenden representar el contenido del alimento en minerales indigestibles. El método más generalizado para esta determinación, se basa en el proceso de calcinación de la materia orgánica por calentamiento a temperaturas elevadas, hasta llegar a un peso constante. El residuo obtenido por incineración directa puede contener, además de las sustancias minerales del alimento, partículas de carbón procedente de una combustión incompleta, o también impurezas del alimento (arena o arcilla). La cantidad de cenizas representa el contenido total de minerales en los alimentos. La determinación del contenido de cenizas puede ser importante por: Son una parte del análisis próximo para la evaluación nutricional. Las cenizas son el primer paso en la preparación de una muestra de alimentos para análisis elemental específico. La determinación del contenido de cenizas sirve para obtener la pureza de algunos ingredientes que se usan en la elaboración de alimentos. El contenido de cenizas se usa como índice de calidad en algunos alimentos como mermeladas y jaleas. 2.4.1.3 pH Los valores de pH y acidez, se encuentran estrechamente relacionados. El intervalo de pH óptimo está entre 7 y 9 aproximadamente, situándose la condición óptima alrededor de 7.5. Valores de pH por debajo de 7 pueden provocar un 33 MARCO TEÓRICO aumento de la producción de óxidos nitrosos, especialmente de N 2O como productos finales de la desnitrificación (Ferrer y Seco, 2008). Los efluentes de la industria láctea son generalmente neutros o poco alcalinos, pero tienen tendencia a volverse ácidas muy rápidamente a causa de la fermentación del azúcar de la leche produciendo ácido láctico, sobre todo en ausencia de oxígeno y la formación simultánea de ácido butírico, descendiendo el pH a 4,5 – 5,0. Principalmente provienen de las operaciones de limpieza, pudiendo variar también entre valores de pH de 2 a 11 (Arango et al., 2008). El lactosuero contiene poca o nula presencia de ácido láctico, el pH de las muestras es muy similar, en cambio, al acidificar la leche, hay un aumento de ácido láctico, como consecuencia de esto, se presenta una mayor acidez y menor valor de pH. 2.4.1.4 Acidez En alimentos el grado de acidez indica el contenido en ácidos libres. Se determina mediante una valoración (volumetría) con un reactivo básico. El resultado se expresa como el porcentaje del ácido predominante en el material. En aceites es el porcentaje en ácido oléico, en zumo de frutas es el porcentaje en ácido cítrico, en leche es el porcentaje en ácido láctico (Valencia et al., 2009). La acidez de una sustancia se puede determinar por métodos volumétricos. Ésta medición se realiza mediante una titulación, la cual implica siempre tres agentes o medios: el titulante, el titulado (o analito) y el indicador. De acuerdo a su acidez, el lactosuero se divide en dulce (pH mayor de 8), medio ácido (pH 5-5.8) y ácido (pH menor a 5) (Frigon et al., 2009). 2.4.1.5 Proteína La mezcla de proteínas en el lactosuero, poseen amplio rango de propiedades químicas, físicas y funcionales, concretamente, suponen alrededor del 20% de las 34 MARCO TEÓRICO proteínas de la leche, siendo su principal componente la β-lactoglobulina con cerca de 10% y α-lactoalbúmina con 4% de toda la proteína láctea, además, contiene otras proteínas como albúminas séricas, proteasas–peptonas, inmunoglobulinas y otras (Baró et al., 2001; Baldasso et al., 2011).A pesar de ser de que el lactosuero posee un bajo porcentaje de ellas (0.6%), poseen una calidad nutritiva superior a las de la caseína que conforman el queso, ya que son ricas en aminoácidos azufrados, con un buen porcentaje de grupos sulfidrilo, triptófano y lisina (Acevedo, 2010). La α-lactoalbúmina es la principal proteína del lactosuero, alcanzando una concentración de 2.44 g/L en la leche madura. Su principal función es la síntesis de lactosa a partir de glucosa y galactosa en la glándula mamaria, aunque posee además otros efectos beneficiosos sobre la salud del lactante debido a su elevada proporción de aminoácidos esenciales (triptófano y cisteína) e influye en la absorción de hierro en el intestino. El enriquecimiento de las fórmulas infantiles con las proteínas del lactosuero, especialmente con la α-lactoalbúmina permite obtener un producto con una composición proteica y de aminoácidos más parecida a la leche humana, hecho que tiene una gran importancia desde un punto de vista nutricional al ser esta proteína una fuente natural de triptófano y cisteína. Además, es importante valorar la actividad biológica beneficiosa que puede producirse en el recién nacido alimentado con lactancia artificial con la incorporación de αlactoalbúmina en su dieta, principalmente por su acción inmunoestimuladora y antimicrobiana, ya que en edades tempranas el sistema inmunológico no se encuentra suficientemente desarrollado, siendo mayor la incidencia de enfermedades gastrointestinales que los niños lactados a pecho (Peso et al., 2012; Lucena et al., 2007). Numerosos estudios en animales han mostrado el efecto anti cancerígeno de las proteínas del lactosuero en ratones alimentados con pienso normal o adicionado con 20 g/100 g de caseína, encontrándose que a las 28 semanas, se presentaba una menor incidencia y área de tumores en los ratones alimentados con este tipo 35 MARCO TEÓRICO de proteínas, mientras que el 33% de los alimentados con otras dietas como pienso normal habían muerto (Baro et al., 2001). La fuente de proteína ha sido evaluada para estos efectos sobre seguridad y consumo de alimentos en humanos. Una posible explicación de los efectos de las proteínas de lactosuero sobre el consumo de alimentos puede residir en los péptidos presentes y sus acciones fisiológicas relevantes al consumirlos regularmente (Chung et al., 2009). Las proteínas de lactosuero son usadas ampliamente en una variedad de alimentos gracias a sus propiedades gelificantes y emulsificantes, siendo la βlactoglobulina el principal agente gelificante (Akhtar y Dickinson, 2007; Spahn et al., 2008). Los geles de proteína de lactosuero pueden ser usados como hidrogeles de pH-sensitivos, el cual puede ser definido como red tridimensional que muestra la habilidad de hincharse en agua y retiene una fracción significante de agua dentro de esta estructura (Lucena et al., 2007). Las proteínas presentes en el lactosuero son fuente de aminoácidos esenciales, en comparación con proteínas de otros alimentos; posee >400 mg de aminoácidos por gr de proteína con respecto al huevo (400 mg/gr), la carne y la soya (<400 mg/gr); contienen aminoácidos de cadena larga como la valina, leucina e isoleucina, estos juegan un rol muy importante en el control del peso, ya que actúan como reguladores metabólicos en la homeostasis de proteínas y glucosa y en el metabolismo de las grasas del cuerpo (Frestedt et al., 2008; Smithers G. W., 2008). En la Tabla 2 se puede observar la composición de aminoácidos que posee el lactosuero. 36 MARCO TEÓRICO Tabla 2. Aminoácidos esenciales en el lactosuero (mg/g de proteína). Aminoácido Lactosuero Huevo Equilibrio Recomendado por la FAO Treonina 6,2 4,9 3,5 Cisteína 1,0 2,8 2,6 Metionina 2,0 3,4 2,6 Valina 6,0 6,4 4,8 Leucina 9,5 8,5 7,0 Isoleucina 5,9 5,2 4,2 Fenilalanina 3,6 5,2 7,3 Lisina 9,0 6,2 5,1 Histidina 1,8 2,6 1,7 Triptófano 1,5 1,6 1,1 Fuente: Parra, 2009. 2.4.1.6 Lactosa La lactosa del suero tiene varias propiedades interesantes. Presenta poder edulcorante (20 a 30% del poder edulcorante de la sacarosa), capacidad de fijación de aromas y de adsorción de pigmentos, temperatura de caramelización superior a la de otros azúcares, poder emulsificante y agregante, solubilidad en agua, reducida higroscopicidad, aumento de la presión osmótica y alta estabilidad (química, física y microbiológica) ante la humedad. Estos aspectos le brindan a la lactosa amplios usos industriales. En la industria farmacéutica, su propiedad agregante es aprovechada como excipiente en la elaboración de píldoras y grageas, como aditivo para medio de cultivos y en leches maternizadas. En la industria química y alimentaria se emplea para incrementar la viscosidad y mejorar la textura, como soporte de salsas y sopas, en productos de repostería, panadería, confitería, bebidas, cárnicos, alimentos infantiles, alimentos bajos en calorías y como fuente de galactosa (azúcar que entra a formar parte en los cerebróxidos, 37 MARCO TEÓRICO lípidos presentes en gran cantidad en el tejido nervioso) en alimentos infantiles (Parra, 2009; Posada, Milena, & Ramírez-Navas, 2011; Zadow, 1984). 2.4.1.7 Grasa La materia grasa en la leche, es el componente que varía en mayor proporción, diversos factores influyen sobre el porcentaje graso. Su composición también varía, no son fijas las proporciones de los diferentes ácidos grasos, los fosfolípidos y las sustancias saponificables. La materia grasa se altera más lentamente que la lactosa, sus modificaciones no provocan grandes cambios en la estructura físicoquímica de la leche, pero son importantes por ser causa de la aparición de sabores desagradables (Alais, 2003). La presencia de la grasa en las aguas de la industria láctea se debe a consecuencia de la grasa de la leche y otros productos lácteos, como en las aguas de lavado de la mazada. Este valor se encuentra en los 500 mg/L normalmente (Abia et al., 2003). En la fase lipídica de la leche se encuentran tres clases de sustancias asociadas, los lípidos neutros, la materia grasa propiamente dicha, constituida por glicéridos; los lípidos polares, fosfolípidos de naturaleza compleja; las sustancias lipoídicas o “insaponificables”, insolubles en agua, entre ellas se encuentran las vitaminas. Se encuentran dispersos en la leche en forma globular. Esta dispersión es inestable y las sustancias que la componen son más fáciles de extraer. La materia grasa en la leche, es el componente que varía en mayor proporción, diversos factores influyen sobre el porcentaje graso. Su composición también varía, no son fijas las proporciones de los diferentes ácidos grasos, los fosfolípidos y las sustancias saponificables. La materia grasa se altera más lentamente que la lactosa, sus modificaciones no provocan grandes cambios en la estructura físico-química de la leche, pero son importantes por ser causa de la aparición de sabores desagradables (Alais, 2003). 38 MARCO TEÓRICO 2.4.1.8 Demanda química de oxígeno (DQO) La demanda química de oxigeno (DQO) es la medida de la capacidad que tiene la materia orgánica a la oxidación, bajo condiciones específicas de un agente oxidante, temperatura y tiempo (Rigola, 2004). La DQO mide la capacidad de consumo de un oxidante químico, dicromato o permanganato, por las materias oxidables contenidas en el agua, y se expresa en ppm de O al igual que la DBO. Existen diversas modalidades para efectuar esta prueba, sin embargo las más común es el método normalizado, que consiste en someter a reflujo durante dos horas una muestra de volumen determinado, con exceso conocido de dicromato de potasio en un medio ácido, que regularmente es una solución de ácido sulfúrico con sulfato de plata. Casi todas las sustancias orgánicas resultan oxidadas completamente al someterse a esta prueba, sólo algunas excepciones, como lo son compuestos aromáticos, que no lo logran en su totalidad (Bielma, 2010). En las pruebas de DQO se acelera artificialmente el proceso de biodegradación que hacen los microorganismos, mediante un proceso de biodegradación forzada, utilizando oxidantes químicos y métodos debidamente estandarizados, que tienen por objeto la reproducción de las mediciones, esta prueba es una indicación de la cantidad de nutrientes fácilmente degradables presentes en una muestra, es ideal para aplicarla a residuos que contengan entre otros nutrientes carbonáceos, como las de industrias o métodos de producción biológicos (Metcalf y Eddy, 2003). 2.4.1.9 Demanda bioquímica de oxígeno (DBO) La DBO es uno de los parámetros de mayor importancia en el estudio y caracterización de las aguas no potables. La determinación de DBO además de indicarnos la presencia y biodegradabilidad del material orgánico presente, es una forma de estimar la cantidad de oxigeno que se requiere para estabilizar el 39 MARCO TEÓRICO carbono orgánico y de saber con qué rapidez este material va a ser metabolizado por las bacterias que normalmente se encuentran presentes en las aguas residuales. La importancia de este parámetro requiere de ciertos cuidados y atención en la técnica analítica, ya que por ser un proceso biológico el manejo y tratamiento de la muestra es delicado. La DBO permisible en el medio ambiente para aguas residuales derivadas de lácteos es del 100 mg/L, lo cual es un valor muy por debajo del obtenido en la caracterización de las muestras de lactosuero. La razón técnica de hacer las lecturas de DBO a los cinco días de incubación es porque después de este periodo frecuentemente ocurre la nitrificación. La nitrificación o conversión del nitrógeno orgánico y amoniacal a nitritos y nitratos requiere de oxígeno, por lo que la disminución de oxígeno disuelto o incremento de DBO, ya no se debe a la oxidación del carbono orgánico que es lo que se desea medir en este tipo de prueba. La razón histórica de hacer la lectura a los cinco días y a una temperatura de 20ºC, se debe a que como esta técnica tiene su origen en Inglaterra, la British Royal Commission of Sewage Disposal, determinó que la temperatura promedio de los ríos de este país es de 18.3ºC y que el tiempo máximo que duran estas aguas en su trayecto de los ríos hacia el mar, es de cinco días. Como ésta prueba de DBO pretende reproducir estos hechos, se seleccionaron los parámetros de tiempo y temperatura ya mencionados, y que por causas circunstanciales coinciden más o menos con las razones técnicas de efectuar las lecturas en esas condiciones. Aproximadamente entre el 90 y 95% de la DBO presente en el agua residual es originada por pérdidas de leche o productos lácteos (Valencia y Ramírez, 2009). Puesto que la leche tiene una DBO5 de 100.000 mg/L, 1 kg de DBO5 en el efluente equivale a 10 litros de leche perdida. Si se asume que el 10% de las pérdidas 40 MARCO TEÓRICO corresponde a materiales no originados por la leche, entonces 1 kg de DBO 5 equivale a una pérdida de 9 litros de leche. 2.4.1.10 Relación DBO/DQO Habitualmente se utiliza la relación DBO/DQO para estimar la biodegradabilidad de un agua residual. La determinacion de la DBO y la DQO permite establecer la relacion existente de contaminantes y según el resultado, conocer la posibilidad o no de efectuar algún tratamiento para las aguas residuales (Mihelcic y Zimmerman, 2011). Existe discrepancia entre el rango de valores de la concentración de la DBO y DQO en las aguas residuales de una industria láctea. La concentración de DBO puede encontrarse entre 2,000 y 5,000 mg/L y una DQO entre 1,000 y 6,000 mg/L (CAR/PL, 2002) aunque según Casas (2009) la DBO está comprendida entre 500 y 1,700 mg/L mientras que la DQO oscila entre 1000 y 3000 mg /L. La materia en suspensión o SST fluctúa de 300 a 700 mg/L (Casas, 2009). Sin embargo las variaciones en la producción provocan importantes cambios en la concentración del efluente (García et al., 2006). 41 METODOLOGÍA III. METODOLOGÍA La metodología mediante la cual se realizó esta investigación y determinación de las características fisicoquímicas del lactosuero se ilustra en la Figura 4. Figura 4. Metodología de la caracterización fisicoquímica. Metodología Desarrollo del muestreo Determinación de parámetros fisicoquímicos Análisis de resultados obtenidos Determinación de los la zona , localidades y municipios de muestreo Revisión bibliográfica sobre caracterización fisicoquímica de lactosuero Realización de cálculos Selección de los sitios de muestreo Selección de los parámetros fisicoquímicos Elaboración de tablas y gráficas Recolección de muestras Realización de las determinaciones Recolección de datos Comparación de los resultados con la bibliografía Transporte de muestras Discusión de resultados 42 METODOLOGÍA 3.1 Desarrollo del muestreo 3.1.1 Determinación de la zona, localidades y municipios de estudio Se realizó la caracterización fisicoquímica de diversas muestras de lactosuero provenientes de localidades y municipios pertenecientes a la región central del estado de Veracruz, de lactosuero pertenecientes a diferentes comunidades de la región, las cuales fueron: Coatepec, Xico, Acatlán,Jilotepec, Naolinco y La joya. En la Figura 5 se muestra la ubicación geográfica de las localidades y municipios anteriormente mencionados Figura 5. Localidades y municipios de muestreo 43 METODOLOGÍA 3.1.2 Selección de los sitios de muestreo El origen de los lactosueros muestreados proviene de la elaboración de quesos a partir de la coagulación enzimática, esta es una de las principales actividades económicas en la zona de estudio. 3.1.3 Recolección de las muestras La toma de muestras se realizó en los lugares los puntos o establecimientos donde el queso era vendido, recolectando las muestras de tipo sencillas para su posterior traslado al lugar donde se realizarían los análisis. 3.1.4 Transporte de muestras El traslado se realizó conforme a la norma; por lo que se preservaron durante su mediante un baño de hielo, conservándose en refrigeración a una temperatura de 4°C. Las muestras se trasladaron a los laboratorios No. 4 y No. 6 de la Facultad de Ciencias Químicas, perteneciente a la Universidad Veracruzana, en la ciudad de Xalapa, Veracruz, lugar de realización de los análisis. 3.2 Determinación de los parámetros fisicoquímicos 3.2.1 Revisión bibliográfica sobre caracterización fisicoquímica de lactosuero Se recopiló información bibliográfica para tenerla como base para la determinación de los análisis a realizar y así tener una correcta y completa información de las características a estudiar. Esta recopilación de información se revisó junto con el director y la co-directora de este proyecto. 3.2.2 Selección de los parámetros fisicoquímicos Una vez obtenida y clasificada la información, se determinaron los parámetros necesarios a analizar para conocer la composición de las muestras. 44 METODOLOGÍA 3.2.3 Realización de las determinaciones La realización de los análisis para la obtención de resultados fue realizada con base a las Normas Oficiales Mexicanas vigentes para cada parámetro estudiado. Para dar codificación a las muestras, en la Tabla 3 se muestra la clasificación de lactosuero, el lugar de muestreo y el tipo de queso del cual se obtuvo. Tabla 3. Municipios donde se muestreo el lactosuero. Código 101 118 106 119 107 102 103 104 117 Lactosuero obtenido de Queso de rueda Queso de rueda Queso panela Queso panela Requesón Queso de hebra Queso de hebra Queso de hebra Queso de hebra Clasificación del suero Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero ácido Suero ácido Suero ácido Suero ácido Suero ácido Municipio de procedencia Acatlán Jilotepec Xico Naolinco Coatepec Naolinco Xico Xico La Joya 3.2.3.1 Determinación del porcentaje de humedad El método se basa en la pérdida de peso de la muestra por calentamiento en una estufa, refiriendo su peso al peso total de la muestra y expresada como porcentaje, en la Figura 6 se puede observar la estufa y crisoles utilizados. Figura 6. Estufa y crisoles utilizados para la determinación de los análisis 45 METODOLOGÍA Materiales y Equipo a) Crisoles; b) Pinzas para crisol; c) Desecador; d) Estufa (marca Mapsa modelo HDP-334); e) Balanza analítica (marca PIONEERTM modelo OHAUS). Procedimiento 1. Pesar en un crisol previamente tarado de 1 a 1.5 g de muestra bien mezclada. 2. Colocar el crisol con la muestra en la estufa y mantener la temperatura a 105ºC durante 4 horas. El periodo de tiempo comienza cuando se tiene la temperatura deseada. 3. Después del tiempo requerido, transferir el crisol al desecador y esperar a que alcance la temperatura ambiente (20 minutos aproximadamente). 4. Pesar en la balanza analítica. 5. Volver a colocar la muestra en la estufa 30 minutos. 6. Sacar de la estufa, enfriar nuevamente en el desecador y pesar. 7. Continuar con la desecación hasta peso constante. Cálculos Determinar el contenido de humedad a partir de la pérdida de peso de la muestra. % de Humedad= (M1 – M2) x 100 M M1 = peso del crisol más muestra húmeda. M2 = peso del crisol más muestra seca. M = peso del crisol. 46 METODOLOGÍA 3.2.3.2 Determinación del porcentaje de cenizas Materiales y Equipo a) Mufla (marca CAHO modelo HDP-334); b) Crisoles de porcelana; c) Balanza analítica (marca PIONEERTM modelo OHAUS); d) Disgregador y pinzas. En la Figura 7 muestra la balanza y desecador utilizados para la realización de los análisis. Figura 7. Balanza y desecador utilizados para la determinación de los análisis Procedimiento 1.- Se pesaron 2 gr de muestra en un crisol previamente tarado y deshumedecido. 2.- El crisol y su contenido se calcinan, primero sobre una llama baja, evitando en lo posible la formación excesiva de hollín, hasta que se carbonice y luego en un horno de mufla a 650° C. Es importante la consideración de las normas de seguridad aplicables dentro del laboratorio como el uso del extractor. 47 METODOLOGÍA 3.- Se procede a la calcinación en la mufla durante 3-4 horas. El método más seguro es calcinar hasta peso constante, asegurándose que la ceniza sea blanca o parda. Previamente, al cumplirse los primeros 30 minutos de calcinación, sacar el crisol y dejar enfriar, con el disgregador romper las partículas incineradas en forma uniforme y cuidadosamente, introducir nuevamente el crisol en la mufla y completar la calcinación durante el tiempo antes mencionado. Cerciórese de vez en cuando, que la temperatura se mantenga constante en la mufla. 4.- Sacar los crisoles con la ayuda de pinzas y guantes de carnaza para protegerse contra la temperatura, inmediatamente colocarlos en el desecador y dejarlos enfriar a temperatura. Cálculos CC - C % de cenizas = --------------- x 100 W Dónde: CC = Peso del crisol más la ceniza. C = Peso del crisol vacío. W = Peso de la muestra. 3.2.3.3 Determinación de pH La determinación del pH se realizó bajo la norma NMX-AA-008-SCFI-2011, esta norma establece el método de prueba para determinar el pH en aguas naturales, salinas, residuales y residuales tratadas. Este método es aplicable a todos los tipos de agua y muestras de aguas residuales en el intervalo de pH 3 a pH 10, la Figura 8 muestra el potenciómetro utilizado para dicho análisis. 48 METODOLOGÍA Figura 8. Potenciómetro usado para análisis de pH. Reactivos a) Agua libre de dióxido de carbono; b) Disoluciones amortiguadoras de pH de referencia; c) Electrolito de referencia. Equipo a) Recipiente de muestreo; b) Termómetro; c) Potenciómetro; d) Electrodo de vidrio y electrodo de referencia 3.2.3.4 Determinación de Acidez La determinación de acidez se realizó según la norma NOM-155-SCFI2003.Basándose en que la acidez se mide con base a una titulación alcalimétrica con hidróxido de sodio 0,1 N utilizando fenolftaleína como indicador, o en su caso, utilizando un potenciómetro para detectar el pH de 8,3, que corresponde al fin de la titulación. 49 METODOLOGÍA Reactivos a) Hidróxido de Sodio 0,1 N (valorado) NaOH b) Solución indicadora al 1% de fenolftaleína (C6H4OH)(2COC6H4CO) c) Alcohol etílico (C2H5OH) d) Solución indicadora al 0,12% de cloruro o acetato de rosanilina e) Solución buffer pH 7 f) Solución buffer pH 10 Preparación de soluciones 1. Solución de fenolftaleína al 1%. Pesar 1,0 g de fenolftaleína en 100 mL de alcohol etílico (96°G. L). 2. Solución indicadora de cloruro o acetato de rosanilina al 0.12%. Pesar 0,12 de cloruro o acetato de rosanilina y disolverlo con alcohol etílico al 95% (v/v), adicionar 0,5 mL de ácido acético glacial y llevar a un volumen de 100 mL. Diluir 1 mL de esta solución con 500 mL de alcohol etílico al 95%.Almacenar ambas soluciones en frasco color ámbar. Materiales y Equipo a) Pipeta graduada de 10 mL; b) Pipeta volumétrica de 20 mL; c) Matraz de 125 mL; d) Bureta de 50 mL graduada en 0,1 mL; e) Potenciómetro (marca Denver Instrument modelo UP-10). Procedimiento Medir 20 mL de muestra en un matraz. Adicionar 40 mL de agua libre de CO2. Añadir 2 mL de fenolftaleína y titular con hidróxido de sodio 0,1 N hasta la 50 METODOLOGÍA aparición de un color rosado persistente, cuando menos un minuto, empleando como guía de color una muestra de control de acetato o cloruro de rosanilina preparada de la siguiente manera: Para el caso potenciométrico medir 20 mL de muestra adicionar 40 mL de agua libre de CO2 y titular con hidróxido de sodio 0,1 N hasta pH de 8,3. Cálculos y expresión de resultados La acidez presente en la muestra, expresada en g/L, se calcula utilizando la siguiente fórmula: V x N x 90 Acidez (g/L) = -----------------M Dónde: V = son los mililitros de solución de NaOH 0,1 N, gastados en la titulación. N = es la normalidad de la solución de NaOH. M = es el volumen de la muestra en mL. 3.2.3.5 Determinación de Proteína, Lactosa y Grasa La determinación de proteína, lactosa y grasa se analizaron utilizando el aparato LACTICHECK UltrasonicMilkAnalyzer previamente calibrado, este aparato se muestra en la 9, entre otras características provee de fáciles, rápidos y precisos análisis de la mayoría de los componentes de la leche (incluyendo grasa, SNF, proteína, densidad, lactosa y agua añadida) cruda, sin procesar y/o leche procesada de vaca y/o cabra y productos lácteos. 51 METODOLOGÍA Figura 9. Lacticheck utilizado para la medición de parámetros a los lactosueros Procedimiento: Llene el recipiente de muestra (~ 20 ml) de leche. Colocar el recipiente de muestra en el sostenedor de del recipiente de muestra de tal manera que el aspirador sea emergido en la muestra. Asegúrese de que no se aspire aire con la leche. Pulse el botón MODE una vez. Pulse los botones de búsqueda para localizar el modo que desee: Leche de Vaca 1. Prueba a leche de vaca cruda (o pasteurizada) de vaca o cabra. Leche de Vaca 2. Pruebas a leche homogeneizada, pasteurizada (o con tratamiento térmico) de vaca o cabra (default fábrica: calibrado de ~ 3,25% de grasa de leche bovina). Tan pronto como aparezca el canal correcto, pulse OK para confirmar e iniciar la prueba. Línea 1: 52 METODOLOGÍA Grasa (Lectura en aparecer en la pantalla, mientras que la medición está pasando. (El tiempo de prueba es de aproximadamente 85 segundos, dependiendo de la temperatura de la leche, temperatura %) SNF (Lectura en%) Densidad Leche (Lectura = XX.X donde Densidad = 1.0XXX) [Ejemplo: Lectura es 27.5 = 1.0275g/cm3] Línea 2: % de agua añadida a la leche (Lectura en%) Proteínas (Lectura en%) Lectura de lactosa: Presione el botón de búsqueda Pulse el botón de búsqueda y se mostrará el valor Lactosa (Lectura en%) para volver a la pantalla anterior. Para la determinación de la cantidad de grasa en las muestras se utilizó el método Werner – Schmidt, este método se basa en una hidrólisis ácida de las grasas, seguida de una extracción con éter etílico. Materiales y Equipo a) Pipetas graduadas de 10 mL b) Matraces Erlenmeyer de 250 mL c) Vasos de precipitado de 100 y 250 mL d) Baño María e) Pipeta volumétricas de 10 mL f) Probeta de 100 mL g) Embudo de separación de 250 mL h) Pinzas para crisol i) Desecador 53 METODOLOGÍA j) Parrilla de calentamiento k) Estufa (Marca Mapsa modelo HDP-334) l) Balanza analítica (marca PIONEERTM modelo OHAUS, sensibilidad 0.0001). Reactivos a) HCl b) Éter etílico c) Etanol Procedimiento 1. Pesar en un vaso de precipitado 2 g de muestra. 2. Adicionar 4 ml de HCl concentrado y colocar en baño de agua hirviendo por 15 minutos o hasta que la caseína se haya disuelto. En esta etapa la mezcla se observa color café o violeta. 3. Enfriar el vaso. Pasar la mezcla a un embudo de separación. 4. Lavar el vaso con 5 ml de éter etílico y pasarlo al embudo. 5. Extraer la grasa por inversión suave del embudo (para evitar que se emulsione) con 10 ml de éter etílico. 6. Reposar hasta que se aclaren las capas y separar la capa etérea (clara) en un vaso tarado. Si se observa que no se separan bien las capas adicionar 2 ml de etanol. 7. Repetir la extracción 3 veces con 5 ml de éter etílico y reunir los extractos. Eliminar el solvente por evaporación en baño María. 8. Después de eliminar todo el solvente secar la grasa a 100 ºC por 30 min. Enfriar en desecador y pesar Cálculos % de Grasa = (G1 – G2) x 100 G G = peso de la muestra 54 METODOLOGÍA G1 = peso del vaso con la grasa G2 = peso del vaso solo 3.2.3.6 Determinación de la DQO Reactivos: Agua destilada recientemente preparada Sulfato de mercurio cristalizado. Solución de sulfato de plata: Sulfato de plata cristalizado: 6,6 g y enrasar con ácido sulfúrico hasta 1000 ml. Solución de sulfato de hierro y de amonio 0,025 N* Sulfato de hierro y amonio: 98 g Ácido sulfúrico: 20 ml Enrasar con agua destilada hasta enrase a 1000 ml El valor de esta solución debe verificarse todos los días. Solución de dicromato potásico 0,25N: Dicromato potásico (secado 2 horas a 110 °C): 12,2588 g y enrasar con agua destilada hasta 1000 ml. Solución de ferroína: 1,10-fenantrolina: 1,485 g Sulfato de hierro: 0,695 g y enrasar con agua destilada hasta 100 ml. Disolver la fenantrolina y el sulfato de hierro en agua y completar el volumen. Se puede también utilizar una solución comercial. Habrá que verificar el valor de la solución de sulfato de hierro y amonio: En un vaso de precipitado introducir 25 ml exactamente medidos de solución de dicromato potásico 0,25 N y completar a 25 ml con agua destilada. Añadir 75 ml de ácido sulfúrico y dejar que se enfríe. Añadir algunas gotas de solución sulfúrica de solución de ferroína y determinar la cantidad necesaria de solución de sufato de hierro y de amonio para obtener el viraje al rojo violáceo. se expresa en (mgO2/l) 55 METODOLOGÍA Procedimiento: 1. Introducir 50 ml de agua a analizar en un matraz de 500 ml 2. Añadir 1 g de sulfato de mercurio cristalizado y 5 ml de solución sulfúrica de sulfato de plata. 3. Calentar, si es necesario, hasta disolución perfecta. 4. Añadir 25 ml de disolución de dicromato potásico 0,25 N y después 70 ml de solución sulfúrica de sulfato de plata. 5. Llevar a ebullición durante 2 horas bajo refrigerante a reflujo adaptado al matraz. 6. Dejar que se enfríe. 7. Diluir a 350 ml con agua destilada. 8. Añadir algunas gotas de solución de ferroína. 9. Determinar la cantidad necesaria de solución de sulfato de hierro y amonio para obtener el viraje al rojo violáceo. 10. Proceder a las mismas operaciones con 50 ml de agua destilada. 3.2.3.7 Determinación de la DBO La prueba más común para analizar la demanda bioquímica de oxígeno es la técnica “DBO5“la cual es una estimación de la cantidad de oxígeno que requiere una población microbiana heterogénea para oxidar la materia orgánica de una muestra de agua en un periodo de 5 días. El método se basa en medir el oxígeno consumido por una población microbiana en condiciones en las que se ha inhibido los procesos fotosintéticos de producción de oxígeno en condiciones que favorecen el desarrollo de los microorganismos. Esta técnica tiene como principal fin determina la cantidad de oxígeno utilizada por una población microbiana heterogénea para transformar la materia orgánica, en un periodo de incubación de 5 días a 20ºC. 56 METODOLOGÍA Material y equipo: Fosfato dibásico de potasio (K2HPO4) Fosfato dibásico de sodio heptahidratado (Na2HPO4•7H2O) Cloruro de amonio (NH4Cl) Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4•7H2O) Cloruro de calcio anhidro (CaCl2) Cloruro férrico hexahidratado (FeCl3•6H2O) Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4) Hidróxido de sodio (NaOH) Sulfito de sodio (Na2SO3) 2-cloro-6 (triclorometil) piridina Glucosa grado patrón primario (C6H12O6) Ácido glutámico grado patrón primario(C5H9NO4) Ácido clorhídrico (HCl) Ácido nítrico (HNO3) Equipo de aireación con difusor Incubadora: Controlado por termostato a 20ºC ± 1ºC. Eliminar toda la luz para evitar la posibilidad de producción fotosintética de oxígeno disuelto. Balanza analítica con precisión de 0,1 mg Medidor de oxígeno disuelto Botellas Winkler de vidrio para incubación con capacidad de 300 mL de aforo total y con boca estrecha, reborde y tapón de vidrio esmerilado, de forma cónica. Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plástico para botella Winkler Procedimiento: En el caso de aguas naturales debe tomarse un mínimo de 1 L de muestra en un envase de polietileno o vidrio. En el caso de aguas residuales (DBO5 mayores a 50 mg/L) deben tomarse mínimo 100 mL. Pueden utilizarse muestras simples o 57 METODOLOGÍA compuestas. No se debe agregar ningún preservador a las muestras. Solo deben conservarse a 4ºC hasta su análisis. El tiempo máximo de almacenamiento previo al análisis es de 24 h. Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y añadir por cada litro de agua 1 mL de cada una de las siguientes disoluciones: disolución de sulfato de magnesio, disolución de cloruro de calcio, disolución de cloruro férrico y disolución amortiguadora de fosfatos. Preparar el agua de dilución diariamente. Analizar y almacenar el agua de dilución como se describe en los incisos 10.2 y 10.3, de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de usar el agua de dilución debe ponerse a una temperatura aproximada de 20ºC. Saturar con oxígeno aireando con aire filtrado, libre de materia orgánica durante 1 h por lo menos. Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo contenido de materia orgánica, es necesario inocular la muestra. Cálculos: Calcular la DBO5 Cuando no se utilice inóculo ni diluciones: DBO5 (mg/L) = ODi mg/L - OD5 mg/L Dónde: ODi mg/L es el oxígeno disuelto inicial, y OD5 mg/L es el oxígeno disuelto al quinto día. 58 RESULTADOS Y DISCUSIÓN IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1 Porcentaje de humedad En la Tabla 4 se muestran los porcentajes de humedad obtenidos de las muestras de lactosuero. Tabla 4. Porcentajes de humedad en el lactosuero. Procedencia (ácido) Acatlán Jilotepec Xico Naolinco Coatepec Promedio Humedad (%) 93.84 93.95 94.29 92.26 95.15 93.9 Procedencia (dulce) Naolinco Xico Xico La Joya Humedad (%) 94.73 94.78 94.43 95.22 Promedio 94.79 Se puede observar que los valores de humedad para los lactosueros ácidos presentan valores porcentuales desde 92.26 hasta 95.15, con un promedio de 93.9% lo cual, se encuentran dentro del rango reportado por Prazeres et al., 2012, para el lactosuero acido , el cual presenta un valor promedio de 94.1% , presentando éste un valor mínimo de 91.5% y un valor sobresaliente de 96%; por otra parte, este mismo autor tiene un promedio de porcentaje ligeramente menor para lactsuero dulce (93.3%) al encontrado en la realización del análisis (94.79%), esto se debe a que una vez elaborado el queso por coagulacion enzimatica, el suero recibe un segundo tratamiento para la obtencion del queso de hebra,por lo que el contenido de humedad aumente ligeramente al extraer del suero los restos finos de caseina y demas componentes que aun pueden coagular. En la Gráfica 1 se muestra la comparación de los porcentajes de humedad entre las diversas muestras. 59 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Gráfica 1. Comparación del porcentaje de humedad entre los lactosueros. % de Humedad Humedad 95.50 95.00 94.50 94.00 93.50 93.00 92.50 92.00 91.50 91.00 90.50 Lactosuero dulce Lactosuero acido 1 2 3 4 5 6 La gráfica anterior muestra que el lactosuero ácido muestra un porcentaje mayor de humedad en relación a los valores presentados por el lactosuero dulce, Los valores del lactosuero acido se encuentran dentro de un rango esperado, sin embargo, las muestras 4 y 5 de lactosuero dulce salen ligeramente del promedio, una posible causa sea el proceso en la elaboración del queso de partida, al no tener una metodología adecuada para el correcto procesamiento del producto. 4.2 Porcentaje de Cenizas La información concentrada de los resultados obtenidos durante la caracterización para ambos tipos de lactosuero para cenizas se presenta en la Tabla 5, así como la diferencia entre ambos que puede ser vista en la Gráfica 2. 60 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 5. Porcentajes de cenizas en el lactosuero. Procedencia (ácido) Acatlán Jilotepec Xico Naolinco Coatepec Promedio Cenizas (g/L) 1.24 0.54 2.6 0.57 0.96 1.18 Procedencia (dulce) Naolinco Xico Xico La Joya Cenizas (g/L) 0.57 0.35 0.37 0.69 Promedio 0.49 En la tabla anterior se observan valores de concentración de cenizas (0.57-1.24 g/L) para lactosuero ácido con un promedio de 1.18 g/L, esto se encuentra por encima de los valores reportados por Teniza, 2008, que van desde 0.56 hasta .84; este mismo autor reporta un promedio de 0.46 g/L para lactosueros del tipo dulce, dicho dato se encuentra muy parecido al promedio de los datos de esta determinación el cual fue 0.49; Callejas et al., 2012, reportan valores para lactosuero dulce 0.4 - 0.6 g/L , cabe mencionar que dichos valores son parecidos a los encontrados en esta caracterización, quedando los sueros dulces procedentes de Naolinco y Xico dentro del rango reportado; y para suero ácido 0.6 - 0.8 %, estos mismos valores se onservan con Cuartas, 2005, aquí podemos notar que los valores encontrados para esta caracterización difieron, esto probablemente se deba al proceso de cuajado del queso. En lo que se refiere al lactosuero acido, los porcentajes se encuentran dentro de los valores expresados, sin embargo, la varianza de cantidades de 3 de las 6 muestras de lactosuero dulce, hacen que el promedio salga de lo reportado. En la Gráfica 2 se muestra la comparación de las cantidades de cenizas obtenidas para las diferentes muestras. 61 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Gráfica 2. Comparación del porcentaje de cenizas entre los lactosueros. Cenizas 3.00 % de Cenizas 2.50 2.00 1.50 Lactosuero dulce 1.00 Lactosuero acido 0.50 0.00 1 2 3 4 5 6 4.3 Acidez Los valores de acidez de las muestras se muestran en la Tabla 6 la diferencia de estos valores se observan en el Gráfica 3. Tabla 6. Valores de acidez de los lactosueros. Procedencia (ácido) Acidez Acatlán Jilotepec Xico Naolinco A Coatepec Promedio 0.12 0.09 0.08 0.11 0.05 0.09 Procedencia (dulce) Naolinco Xico Xico La Joya Acidez Promedio 0.07975 0.08 0.08 0.079 0.08 Para la acidez en las muestras de lactosuero ácido se encontraron valores de .0512% lo que concuerda con lo reportado por Monsalve & González, 2005 para (0.08-12%); por otra parte , Cuartas, 2005 presenta valores de 0.050 - 0.76% para sueros dulces (los cuales quedan un poco distantes de los encontrados en esta caracterización (.79 - .80 %) y 0.40 - .9% para sueros acidos; Teniza, 2008, 62 RESULTADOS Y DISCUSIÓN muestra que el porcentaje de ácido láctico para sueros dulces es de 0.2 – 0.3% y de 0.7 – 0.8% para sueros acidos, lo que muestra semejanza con las muestras de Xico y las demás no alejandose mucho de lo reportado según los autores, estas diferencias, son como ya antes se mencionó, posiblemente al proceso d elaboración artesanal de los quesos. El comportamiento de los resultados obtenidos en la caracterización se ilustra en la siguiente gráfica. Gráfica 3. Comparación de acidez entre los lactosueros. Acidez 0.8 0.7 0.6 % 0.5 0.4 Lactosuero dulce 0.3 Lactosuero acido 0.2 0.1 0 1 2 3 4 5 6 Las muestras de sueros dulces se observan dentro de lo reportado, los sueros ácidos muestran varianza entre muestras, sin embargo, se encuentran dentro de lo reportado. 4.4 Valores de pH En la Tabla 7 se muestran los valores de pH encontrados para los dos tipos de lactosuero. 63 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 7. Valores de pH en lactosuero. Procedencia (ácido) pH Procedencia (dulce) pH Acatlán 5.7 Naolinco 4.25 Jilotepec 6.5 Xico 5.5 Xico 6.1 Xico 5.45 Naolinco A 6.7 La Joya 3.9 Coatepec 6.1 Promedio 6.24 Promedio 4.78 En esta Tabla 7 se puede observar valores de pH obtenidos para lactosuero ácido que van desde 5.7 a 6.1, estos valores, pueden ser comparados con lo que reporta Callejas et al., 2012 , los cuales son valores de pH para el lactosuero ácido de 5.7 a 6.24; Guerrero et al., 2010, reportan valores de pH de entre 4.50 a 5.34, en relación a los valores mostrados en la tabla anterior se puede observar que los valores se encuentran dentro del rango. En la Gráfica 4 se ilustra la comparación del porcentaje de pH de los valores de las diferentes muestras. Gráfica 4. Comparación de pH entre los lactosueros. pH 8.00 7.00 Valores de pH 6.00 5.00 4.00 Lactosuero dulce 3.00 2.00 Lactosuero acido 1.00 0.00 1 2 3 4 5 64 6 RESULTADOS Y DISCUSIÓN El pH y la acidez, son dos valores que se relacionan, el lactosuero dulce al utilizar coagulantes, existe poca o nula presencia de ácido láctico, como se puede observar en el gráfico, el pH de las muestras es muy similar, en cambio, al acidificar la leche, hay un aumento de ácido láctico, por consiguiente, mayor acidez y menor pH. 4.5 Proteínas El porcentaje de proteÍnas varía dependiendo del tipo de proceso empleado en la elaboración del queso de procedencia. En la Tabla 8 se muestra el volumen de proteínas presente para cada una de las muestras. En la Gráfica No.5 se presenta la diferencia promedio de proteínas entre el lactosuero enzimático y el lactosuero ácido. Tabla 8. Proteínas en lactosuero. Procedencia (ácido) Acatlán Jilotepec Xico Naolinco A Coatepec Promedio Proteínas (g/L) 3.4 2.48 4.84 2.59 2.69 3.2 Procedencia (dulce) Naolinco Xico Xico La Joya Proteínas (g/L) Promedio 2.54 2.47 2.42 2.37 2.88 En la anterior tabla se muestran valores para lactosuero ácido que van de 2.48 a 3.4 y un promedio de las mutras de 3.2 g/L; esto concuerda con lo reportado por Teniza, 2008 (3.4 g/L promedio para muestras ácidas). Guerrero et al., 2010 reportan un promedio de 2.72 para la concentración de proteínas, esto varía respecto a lo encontrado en la caracterización (2.54) ,como antes se reportó, el contenido de proteínas presentes en el lactosuero va de 85 a 90% del total de la leche utilizada, por lo que se puede deducir que los datos reportados por el autor y los obtenidos por análisis son muy semejentes y su diferencia es irrelevante. 65 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Gráfica 5. Comparación de proteínas entre los lactosueros Proteínas 6 % de Proteínas 5 4 3 Lactosuero dulce 2 Lactosuero acido 1 0 1 2 3 4 5 6 Los valores del lactosuero ácido presentan semejanzas que indican procesos parecidos, por otra parte, el lactosuero dulce de la muestra tres, presenta un porcentaje elevado con respecto a los demás, por lo que se puede determinar que el método de elaboración de queso en el lugar de procedencia de la muestra debe ser analizado y evaluado. 4.5 Lactosa Los valores de lactosa que presentaron las muestras se presentan a continuación en la Tabla 9. En ella se puede observar porcentajes para suero ácido de 4.14 a 5.51; para dulce 4.1-4.17 %. Presentándose en promedio de lactosa 5.51% para suero ácido y 4.1% para suero dulce. Tabla 9. Valores de lactosa. Procedencia (ácido) Acatlán Jilotepec Xico Naolinco Coatepec Promedio Lactosa 5.51 4.14 7.56 4.32 4.48 5.51 66 Procedencia (dulce) Naolinco Xico Xico La Joya Lactosa Promedio 4.1 4.14 4.17 3.99 4.1 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los porcentajes de lactosa obtenidos de los lactosueros se encuentran dentro de los parámetros establecidos por Cuartas, 2005 (4.23 - 5.46% para lactosuero ácido y 4 – 4.18% para dulce) ; Prazeres et al., 2012 reporta un valor promedio para muestras de lactosuero ácido de 5.59% y 4.3% para dulce,estos valores se encuentra muy cerca de lo obtenido en la caracterización, siendo estos un ocho y dos décimas más altas que las obtenidas pero con semejanza. En el Gráfica 6 se muestra la comparación de los porcentajes de lactosa encontrados en las muestras. Gráfica6. Comparación de lactosa de los lactosueros. Lactosa 8 7 6 % 5 Lactosuero dulce 4 3 Lactosuero acido 2 1 0 1 2 3 4 5 6 Los valores de lactosa de los lactosueros ácidos y dulces responden con lo descrito por la bibliografía, exceptuando la muestra 3 de lactosuero dulce, valor que se presume, es debido al método de elaboración del queso. 4.7 Grasa Los porcentajes de grasa evaluados a las muestras de lactosuero son presentados en la Tabla 10, de igual forma son representados en la Gráfica 7. 67 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 10. Cantidad de grasa presente en el lactosuero. Procedencia (ácidez) Acatlán Jilotepec Xico Naolinco A Coatepec Promedio Grasa (g/L) 0.72 0.64 0.54 0.62 0.18 0.54 Procedencia (dulce) Naolinco Xico Xico La Joya Grasa(g/L) Promedio 0.59 0.18 0.78 0.46 0.93 Los porcentajes de grasa obtenidos de lactosuero ácido (.18 – 0.72 y 0.54% en promedio) se encuentran por arriba de los valores descritos por Villacís, 2011 (0.16 - .70 y 0.49% en promedio) sin embargo esta diferrencia no es muy grande por que, como se pude observar, los datos de lactosuero de Coatepec y Xico no se encuentran lejos de los datos reportados por el autor anterior; de igual manera se observa una cercanía en los datos reportados por Cuartas, 2005 (0.53% en promedio para ácidos y 0.60% promedio para las muestras dulces). Por lo que se deduce que en cuantoa grasa, las muestras se encuentrar dentro de los parámtros esperados , observando que no existe variabilidad importante en los diferentes tipos de lactosuero de diversas regiones en comparación a otros estudios, esto es quizá por que la grasa presente en la leche, a diferencia de la la acidez es constante y al igual que las proteínas, se puede hablar de porcentajes representativos y generales para todos los casos y la única variablidad que se presente pueda ser por la diferencia de procedencia de este alimento, es decir, sea leche de cabra o de vaca. 68 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Gráfica 7. Comparación de grasa presente entre los lactosueros % Grasa 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 Lactosuero dulce Lactosuero acido 1 2 3 4 5 6 La diferencia de valores registrados supone una variabilidad en la calidad de la leche utilizada para el proceso de elaboración de los quesos. 4.8 DQO En la Tabla 11 se observa que los valores de DQO encontrados fueron similares, teniendo un promedio de valor en las muestras de 62,322, sin embargo los valores son muy altos, como en el caso de la muestra con número de codificación 101 la cual presentó un valor de 73,561 es por los altos valores representan afectaciones en el ambiente cuando este subproducto es descargado a cuerpos de agua o suelos. El comportamiento de los resultados se puede observar en la Gráfica 12. 69 RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 11. DQO del lactosuero. Código 101 118 106 119 107 102 103 104 117 Lactosuero obtenido de Queso de rueda Queso de rueda Queso panela Queso panela Requesón Queso de hebra Queso de hebra Queso de hebra Queso de hebra Clasificación del suero Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero ácido Suero ácido Suero ácido Suero ácido PROMEDIO Valor de DQO (mg/L) 73,561 61,291 63,276 76,450 51,413 58,345 56,348 58,31 57,892 62, 322 En la tabla anterior se pueden observar valores para la DQO con un promedio de 62,322 siendo el lactosuero procedente de la elaboración de requesón el de la menor demanda química de oxígeno como un valor de 51,413mg/L y por otra parte, el valor más alto lo presentó un lactosuero dulce procedente de la elaboración de queso de rueda con un valor de 73,561 mg/L. Según lo reportado por Casas 2009 que la DQO encontrada en este residuo oscila entre 10,000 y 30,000 mg /L. A comparación de los valores encontrados en la caracterización, hay mucha diferencia y si existe coincidencia con los valores reportados por García et al 2006 (entre 10,000 y 60,000 mg/L). Gráfica 8. Valores obtenidos de DQO 70 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.9 DBO En la Tabla 12 se observan los valores de DBO encontrados para las muestras, así como el promedio de los resultados. El comportamiento de los valores para este análisis se pueden observar en la Gráfica 9. Tabla 12. DBO en lactosuero. Código Lactosuero obtenido de Clasificación del suero Valor de DBO (mg/L) 101 118 106 119 107 102 103 104 117 Queso de rueda Queso de rueda Queso panela Queso panela Requesón Queso de hebra Queso de hebra Queso de hebra Queso de hebra Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero dulce Suero ácido Suero ácido Suero ácido Suero ácido PROMEDIO 39,260 38,120 35,300 35,120 32,100 30,500 31,000 31,630 31,420 33,827. 78 Se puede apreciar que los resultados obtenidos fueron similares oscilando entre 30,000 y 40,000 mg/L, teniendo un valor promedio de 33,827.78, el menor valor encontrado fue de 30,500 y de 39,260 correspondiendo estos valores a las muestras 102 y 101.,la diferencia entre dos valores fue de 8,740 mg/L .Según lo reportado por García et al., 2006 la concentración de DBO puede encontrarse entre 20,000 y 50,000 mg/L, lo que da referencia a que los valores encontrados se encuentran dentro de lo esperado. Así mismo se puede determinar que en promedio las muestras de lactosuero utilizado poseen, lo que lo ubica como agua residual altamente contaminante. Esto como lo comenta Ferrer y Seco, 2008 : las muestras de lactosuero en promedio contienen un valor superior a los de los lixiviados de los botadero de basura, los 71 RESULTADOS Y DISCUSIÓN efluentes de los procesamientos de aceite comestible y el destilado de alcohol (vinazas) los cuales poseen cantidades menores a 20,000 mg/L. Gráfica 9. Valores de DBO 72 CONCLUSIONES IV. CONCLUSIONES El proceso de toma de muestras para la recolección de lactosuero en las diferentes comunidades de estudio fue una fase importante ya que esta representa la correcta conservación de las muestras para no alterar sus propiedades o características que se desean determinar y poder así realizar de manera correcta la interpretación de los resultados, así mismo la determinación de los parámetros a analizar fue la guía para dar forma a la metodología; parte medular de este trabajo, en ella se pudo encontrar que una correcta programación para el análisis de resultados es primordial. Se observó que la mayoría de los resultados estuvieron dentro de lo esperado sin embargo, se presentaron resultados fuera de rango los cuales demuestran las diferencias que existen en los procesos de elaboración de queso y las diferencias que caracterizan en la elaboración de los diferentes tipos de queso. En general las muestras presentaron altas concentraciones de materia orgánica dando al lactosuero gran carga contaminante. Así mismo el contenido de grasa y cenizas se debe considerar para tomar en cuenta en las posibles propuestas de tratamiento. Por otra parte el contenido de proteínas y lactosa hace referencia que el lactosuero producido en estas comunidades no deja de ser un residuo con excelentes propiedades nutritivas pudiendo ser aprovechadas por los habitantes de esta zona y contribuir así al desarrollo social y económico mediante la fabricación de una gran variedad de subproductos. Sin duda la determinación y el análisis de las propiedades fisicoquímicas de las diversas muestras permite tener un panorama de la composición de este residuo y aún más importante contribuye al crecimiento de la escaza información existente sobre lactosuero producido, el cual es el principal contaminante de cuerpos de agua receptores en esta zona. 73 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Acevedo, D. (2010). GelificaciónFria de las Proteínas del Lactosuero. Alais, C. (2003). En Ciencia de la Leche: Principios de Técnica Lechera (pág. 191). Barcelona: Reverté, S.A. Amini M., Habibollah Y., Lorestani A. A. Z., Najafpour G. (2013). Determination of optimum conditions for dairy wastewater treatment in UAASB reactor for removal ofnutrients [en línea]. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S09608524 1300134X. 25/10/2013. Andrade G.M.; López L.L.; Sáenz G. A. (2012). Nanotubos de carbono: funcionalización y aplicaciones biológicas. Revista mexicana de ciencias farmacéuticas. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. Anvari, M. &Khayati, G. (2011).Submerged Yeast Fermentation of Cheese Whey for Protein Production and Nutritional Profile Analysis. Advance Journal of Food Science and Technology 3(2) , 122-126. Arango A., Garcés L. F. (2007). Tratamiento de aguas residuales de la industria láctea. P+L. 2, 23-30. 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