ÁCIDOS NUCLEICOS
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SEMINARIO ÁCIDOS NUCLEICOS La información genética es almacenada y transmitida por los ácidos nucleicos: ADN y ARN. Poli nucleótidos: Macromoléculas polímeros de nucleótidos. Química: poliésteres fosfóricos. ACIDO NUCLEICO NUCLEOTIDOS NUCLEOSIDO PENTOSA D-Ribosa o D-Desoxirribosa ACIDO FOSFORICO BASES PURICAS O PIRIMIDINICAS La unión de una “osa” (ribosa o desoxirribosa) con base nitrogenada con enlace N-glicosídico se llama nucleósido. La esterificación de un nucleósido con un ácido fosfórico es un nucleótido. ESTRUCTURA DE LOS NUCLEOTIDOS Nucleósido = Pentosa + Base nitrogenada Nucleótidos = pentosa + base nitrogenada + fosfato Enlace N-glicosídico Marcado carácter aromático. Resisten la oxidación. Absorben en el UV, propiedad utilizada para su caracterización. Los nucleótidos almacenan energía química en la célula Algunos nucleótidos de adenina son componentes de cofactores enzimáticos El NAD y el FAD actúan como coenzimas en reacciones de oxido-reducción Estructura primaria Encadenamiento entre nucleótidos mediante enlaces covalentes con el ácido fosfórico que produce un éster doble en las posiciones 5’ de uno y 3’ del otro ESTRUCTURA DEL DNA La doble hélice es dextrógira y la forma B Tiene 11 pb por vuelta EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE DNA DE CELULAS VEGETALES Muestra : tejido vegetal (cebolla). Rotura mecánica. Solución de lisis celular: detergente, bicarbonato y cloruro de sodio. Objetivo Rotura de la membrana celular y nuclear. Liberación de las moléculas de ácidos nucleicos. Alcohol etílico Objetivo : Desnaturalizar la estructura B-ADN, por lo que se vuelve insoluble en alcohol. Precipitación del ADN por calentamiento. 10 g Cebolla rallada + 25 ml solución lisis. 20 min.a T ambiente Filtrar en gasa 4 ml filtrado + 2 volúmenes de etanol sin mezclar. En interfase formación de hebra blanca. Aspirar la interfase con pipeta Pasteur Precipitar DNA por calentamiento suave CARACTERIZACION DNA Reacción DIFENILAMINA: para desoxipentosa ADN con difenilamina ------ compuesto azul con absorción máxima a 595 nm. La reacción la dan en general las 2desoxipentosas y no es específica para el ADN. Se evidencia indirectamente el DNA TUBO A TUBO B AGUA DEST 1 ml -- EXTRACTO -- 1 ml Rvo 2 ml 2 ml Difenilamina Hervir 10 minutos, enfriar y observar IDENTIFICACIÓN DE PENTOSA: ribosa o desoxirribosa. Reacción de Bial La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reacción con orcinol. El ácido sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando ribosa, bases púricas, pirimidínicas y acido fosfórico. La pentosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando un producto verde que demuestra la presencia de DNA y RNA. Reacción de Bial TUBO A TUBO B AGUA DEST 1 ml -- EXTRACTO -- 1 ml Rvo Orcinol 2 ml 2 ml Hervir 10 minutos, enfriar y observar IDENTIFICACIÓN DE GRUPO FOSFATO Formación de azul de fosfomolibdeno El fosfato reacciona con el molibdato de sodio para dar fosfomolibdato, el cual es reducido por el acido ascórbico a azul de molibdeno. El arsenito/ citrato se combina con el exceso de molibdato impidiendo su reacción posterior con el exceso de fosfato liberado de los esteres lábiles,. Agua dest Extracto Rvo 1 Blanco Problema 0,1 ml -0,5 ml -0,1 ml 0,5 ml Mezclar y esperar 30 seg Rvo 2 0,5 ml 0,5 ml Mezclar y esperar 30 seg Rvo 3 0,75 ml 0,75 ml Mezclar, incubar a 37° y observar color
