Biotech & Cosmetics Actividad antioxidante, vasodilatadora y antitumoral de MAXIMUM en células de la piel Jordi Muntané Co-Investigador Co Investigador Responsable IBiS Director I+D+i Servicio de Cirugía General Hospital Universitario “Virgen del Rocío” Cecofar, Sevilla 11 de Junio 2015 RADIACIÓN ULTRAVIOLETA. NECESIDAD DE PROTECCIÓN Rango energético medido por un radiómetro La piel es el órgano más extenso del cuerpo, con elevada actividad proliferante de las células y expuesto a un sinfín de agresiones diarias lo que son factores relevantes y p edisponentes para predisponentes pa a la generación gene ación de lesiones irritantes, i itantes inflamatorias, inflamato ias y aparición apa ición de procesos de malignización. H2O H● + Agua Radical hidrógeno ●OH Radical hidroxilo Estrés Oxidativo Mutaciones DNA OH Lipoperoxidación p p membranas celulares Respuesta inflamatoria 7 Noviembre 2013 ? NO. Estrés nitrosativo Estrés oxidativo RESPUESTA INFLAMATORIA VASODILATACIÓN PROLIFERACIÓN/ MUERTE CELULAR European Collection of Cell Culture (ECACC) Q Queratinocitos i i (Células (Cél l más á predominantes d i de d la l epidermis, id i 90%) Fibroblastos (Células de la dermis, cicatrización heridas) Radicales libres ((Anión ó supe superóxido) ó do) Factor vasodilatador (Óxido nítrico) Estudio de variables Maximum 0 1 2 Muerte celular (Apoptosis: caspasa-3) caspasa 3) Proliferación celular 6 12 24 horas MEDICIÓN DE RADICALES LIBRES El dihidroetidio (Dhe) es una molécula fluorescente altamente específica para la detección de anión superóxido p celular q que se incorpora p a las células en cultvo. Dihidroetidio O2..- 2-hidroxietidio (2-OH-E+) Excitación (518) Emisión (606) MAXIMUM (TM) REDUCE EL ESTRÉS OXIDATIVO EN FIBROBLASTOS O S OS MEDICIÓN DE ÓXIDO NÍTRICO El 4, 5-diaminofluorescein (DAF-2) es una molécula fluorescente altamente específica para la detección de óxido nítrico en cultivo celular. 4-amino-5-methylamino-20,70difluorofluorescein (DAF-FM) 4, 5 4 5-diaminofluoresceina diaminofluoresceina (DAF (DAF-2) 2) Fluorinated form Triazol, DAF-FM-T Óxido nítrico y otros productos derivados Excitación (495) (N2O3, ácido nitroso) Emisión (515) ( ) MAXIMUM (TM) AUMENTA EL ÓXIDO NÍTRICO EN FIBROBLASTOS EVALUACIÓN DE LA MUERTE CELULAR Receptor de muerte celular Trail Trail Trail DDDD DD Caspasa-8 tBid Caspasa-9 p Caspasa-3 MAXIMUM (TM) REDUCE LA MUERTE CELULAR EN QUERATINOCITOS MAXIMUM (TM) REDUCE LA MUERTE CELULAR EN FIBROBLASTOS O S OS EVALUACIÓN DE LA PROLIFERACIÓN CELULAR La incorporación de BrdU al DNA es el mejor índice de proliferación celular BrdU BrdU MAXIMUM (TM) REDUCE LA PROLIFERACIÓN CELULAR C U EN FIBROBLASTOS O S OS CONCLUSIONES ESTRÉS OXIDATIVO VASODILATACIÓN MUERTE CELULAR PROLIFERACIÓN CELULAR Sheila Pereira Cirugía Oncológica. Terapia Celular y Trasplante de Órganos Lab. 209 Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS)