MANUAL DE PRÁCTICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS
MATERIA: APLICAR LAS TECNICAS DE VALORACION DEL METABOLISMO
SEMESTRE: FEBRERO- JULIO 2011
MAESTRA: FAUSTINA OROZCO GUTIERREZ
SAN LUIS RIO COLORADO, SONORA A FEBRERO 08 DEL 2011
OBJETIVO GENERAL DEL MÓDULO:
Al término del módulo el alumno será competente para: ¨Procesar muestras
biológicas utilizando
técnicas cuantitativas de sustancias metabólicas
interpreta los resultados y los relaciona entre sí para integrar un perfil del
metabolismo que auxilie al medico como apoyo para el reconocimiento de un
estado patológico del paciente.
OBJETIVOS PARTICULARES
1.- Valoración del metabolismo mediante Química Sanguínea
2.- Conoce, comprende, procesa y cuantifica el funcionamiento hepático
procesos bioquímicos, metabólicos y enzimáticos del estado fisiológico
interpretando los resultados.
3.- Aplica Técnicas para cuantificar electrolitos en sangre.
Índice
1.- Objetivos generales y particulares
2.- Índice
3.- Práctica #1 Determinación de Glucosa
4.- Práctica #2 Determinación de Urea
5.- Práctica #3 Determinación de Acido Urico
6.- Práctica #4 Determinación de Creatinina
7.- Práctica #5 Determinación de Colesterol
8.-Práctica #6 Determinación de Triglicéridos
9.-Práctica #7 Determinación Cuantitativa de Bilirrubina (Total y Directa)
10-Práctica #8 Determinación cuantitativa de Proteínas Totales
11-Práctica #9 Determinación de Albúmina
12-Práctica #10 Determinación de Transaminasas (TGO)
13-Práctica #11 Determinación de Transaminasas (TGP)
14-Práctica #12 Determinación de Fosfatasa Alkalina
15-Bibliografía
PRÁCTICA #1
TECNICA. SPINREACT
DETERMINACION CUANTITATIVA DE GLUCOSA
INTRODUCCIÓN:
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la
insulina facilita la entrada de glucosa en las células. La diabetes mellitus es
una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por un déficit de
insulina. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clínicos del laboratorio.
MUESTRAS: SUERO O PLASMA, LIBRE DE HEMÓLISIS Y LCR (El suero debe
separarse lo antes posible del coágulo) Estabilidad: La glucosa en suero o
plasma es estable 3 días a 2-8°C.
MATERIAL: 5 Tubos 12 x 75, 1 gradilla, pipeta pasteur corta con bulbo, 1
pipeta de 5 mls. 1 aplicador de madera, tubo sin edta.
PROCEDIMIENTO
Una vez separado el suero se procede a:
Etiquetar 3 tubos como:
BLANCO
PROBLEMA
STANDARD
Agregar a todos 1.0 mls. Del Reactivo
_____________
10 landas (suero)
-----------
_______________
--------10 landas (patrón)
-Mezclar e incubar 10 minutos a 37°C ó 15-20 minutos a temperatura
ambiente (15-25°C).
-Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada a 505
nanómetros de onda.
PROFRA. Faustina Orozco Gutiérrez
-Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al blanco del reactivo
(El color es estable como mínimo 30 minutos).
CÁLCULOS:
(A)Muestra
X 100 (Concentración del patrón)= mg/dl de glucosa
(A)Patrón
VALOR NORMAL:
SUERO O PLASMA = 60 – 110mg/dl
LCR= 60 – 80% del valor en sangre
_________________________________________________________________________
NOMBRE DEL PACIENTE:
GLUCOSA:
EDAD:
VALOR NORMAL:
NOMBRE DEL ALUMNO
MAESTRA: FAUSTINA OROZCO DE PALAFOX
FECHA:
REVISADO:
_________________________________________________________________________
Maestra: Faustina Orozco Gutiérrez
PRÁCTICA #2
DETERMINACION CUANTITATIVA DE NITROGENO UREICO
DEFINICIÓN
La urea es un compuesto que se forma en el hígado y es filtrado y
absorbido por los riñones. Constituye la fracción de nitrógeno no proteico
en la mayoría de los líquidos biológicos. Este es el principal producto final
del metabolismo proteico, de donde se deduce que su concentración sérica
se relaciona con la dieta y el metabolismo.
IMPORTANCIA CLÍNICA
La urea es un evaluador de la función renal, ya que aumenta cuando hay
insuficiencia renal o necrosis y disminuye en la fibrosis quística, eclampsia
y síndrome nefrótico. También es indicador de enfermedad hepática pues
su síntesis disminuye ante procesos necróticos del hígado.
La urea en suero es estable por 72 horas refrigerada 2-8°C y una vez obtenida
la muestra sin refrigerar por 8 horas.
MATERIAL: 1gradilla, 5 tubos 12 x 75, 1 pipeta pasteur/bulbo, 1 pipeta de
5mls., aplicador de madera, tubo sin edta.
PROCEDIMIENTO:
Una vez obtenido el suero se etiquetan 3 tubos como:
BLANCO
PROBLEMA
STANDARD
Agregar 1.0ml. del reactivo de trabajo a todos los tubos a temp. 37°C
__________
---------
10 Landas (suero)
----------
-------10 Landas (st)
Pasados 30segundos tomar lectura del problema y del standard y anotarla
con A1
Después de 1minuto volver a leer el problema y el estándar contra el blanco
del reactivo en una longitud de onda 340nm. Y anotarla como A2
CÁLCULO: (A1 - A2 )PROBLEMA
x Concentración ST = UREA mg/dl
(A1 - A2) STANDARD
VALOR NORMAL: 7 – 18mg/dl
REPORTE
---------------------------------------------------------Nombre del paciente:
UREA:
Nombre del alumno:
Profesora: FAUSTINA OROZCO GUTIERREZ
Edad:
Valor Normal:
Fecha:
Revisado:
________________________________________________________________________
PRÁCTICA #3
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ÁCIDO ÚRICO
TECNICA: SPINREACT
INTRODUCCION
El ácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo de las
purinas. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de
urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de ácido úrico son indicativos de
patología renal y generalmente se asocia con la gota. El diagnóstico clínico
debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio
MUESTRAS: SUERO O PLASMA, estabilidad 3-5 días a 2-8°C y 6 meses con
una temperatura de -20°C, en Orina de 24Hrs. Estabilidad 3 días a
temperataura ambiente
MATERIAL: 1 gradilla, 5 tubos de ensayo 12 x 75, pipeta pasteur/bulbo,
aplicador de madera, 1 pipeta de 5 mls. 1 tubo sin edta.
PROCEDIMIENTO:
Al tener separado el plasma proceder a etiquetar 3 tubos como:
BLANCO
PROBLEMA
STANDARD
Agregar 1.0 mls. Del reactivo a todos los tubos
_________
__________
25 Landas(Suero)
____________
___________
25 Landas (ST)
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C ó 10 mins. 15-25°C
Leer la absorbancia del patrón y la muestra, frente al blanco de reactivos. El
color es estable como mínimo 30 minutos., Leer a 520 nanómetros
CÁLCULOS: (A) Muestra
X (Concentración ST) = mg/dl de ácido úrico
(A) Standard
VALORES NORMALES: Suero o plasma Mujeres: 2.5 – 6.8mg/dl
Hombres: 3.6 – 7.7mg/dl
__________________________________________________________________________
Nombre del paciente:
Ácido úrico:
Nombre del alumno:
Maestra: Faustina Orozco de Palafox
PROFRA: Faustina Orozco Gutiérrez
Edad:
Valor Normal:
Fecha:
Revisado:
PRÁCTICA #4
DETERMINACION CUANTITATIVA DE COLESTEROL
TECNICA: POINTE
INTRODUCCIÓN: El aumento de los niveles normales del colesterol sérico
(Hipercolesterolemia) se considera desde hace ya muchos años, un factor de
riesgo de primer grado para las enfermedades cardiovasculares por ello, su
determinación se considera rutinaria en el laboratorio clínico. Aumenta en
Ictericia obstructiva, colelitiasis, mixidema, síndrome nefrótico etc.
Muestra: suero estable por 7 días a temp. De 18 a25°C y congelado 6 meses.
PROCEDIMIENTO
OBTENIDO EL SUERO ETIQUETAR LOS 3 TUBOS DE RUTINA
BLANCO
PROBLEMA
STANDARD
Agregar a cada uno de ellos 1.0ml del reactivo previamente calentado a 37°C
por 5 minutos.
_____________
10 landas (Suero)
_____________
________________
_____________
10 landas(ST)
Mezcla e incubar todos los tubos a 37°C por 5 minutos
Leer en absorbancia contra el blanco del reactivo a 500 nm en
espectrofotómetro
CÁLCULO: ABSORBANCIA (PROBLEMA) X CONC. (st)= mg/dl Colesterol
ABSOBANCIA (STANDARD)
MATERIAL: LO MISMO QUE LA PRÁCTICA ANTERIOR
VALOR NORMAL: Debajo de:
Ligeramente alto:
Alto:
200mg/dl
200 – 239mg/dl
240mg/dl
_________________________________________________________________________
NOMBRE DEL PACIENTE:
EDAD;
COLESTEROL:
NOMBRE DEL ALUMNO:
MAESTRA: Faustina Orozco de Palafox
FECHA:
REVISADO:
_________________________________________________________________________
PROFRA. FAUSTINA OROZCO GUTIERREZ
PRACTICA #5
TECNICA: POINTE
DETERMINACION CUANTITATIVA DE CREATININA
IMPORTANCIA CLÍNICA: La creatinina es un producto final del metabolismo
de la creatina muscular, se elimina de la sangre por filtración glomerular y su
concentración en sangre depende de la masa muscular del cuerpo, sus
elevaciones suelen ser paralelas a las de urea, aún cuando en general son
más tardías. No aumenta durante las enfermedades renales hasta que el
riñón no se encuentre lo suficientemente dañado.
MUESTRA: SUERO y es estable por 24 horas refrigerada (2-8°C)
MATERIAL: LO MISMO QUE LA PRÁCTICA ANTERIOR
Nota: Dependiendo del ST hacerla a la mitad
PROCEDIMIENTO
ETIQUETAR 3 TUBOS COMO:
BLANCO
PROBLEMA
STANDARD
Agregar a todos los tubos 1.0mls. del reactivo de trabajo
___________
50Landas (suero)
___________
_______________
____________
50 Landas (ST)
Mezclar y exactamente a los 60 segundos leer en absorbancia a
510nanometros contra el blanco del reactivo el problema y el estándar y
anotar esta lectura con A1 de cada uno de ellos.
Pasados otros 60 segundos volver a leer el problema y estándar y anotar las
lecturas como A2
Profra. Faustina Orozco Gutiérrez
CÁLCULO: (A1-A2)PROBLEMA x CONC. ST = mg/dl de creatinina
(A1-A2)STANDARD
VALOR NORMAL: 0.40 -1.40mg/dl
_________________________________________________________________________
Nombre del paciente:
Creatinina:
Valor Normal:
Nombre del alumno:
Maestra:
Edad:
Faustina Orozco de Palafox
Fecha:
Revisado:
_________________________________________________________________________
Profesora: Faustina Orozco Gutiérrez
PRÁCTICA #6
DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS.
TECNICA: SPINREACT
SIGNIFICADO CLÍNICO:
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Al igual que
el colesterol, son transportados a las células del organismo por las
lipoproteínas en la sangre. Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos
puede elevar los niveles de triglicéridos. Diversas dolencias como
disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o diabetes
mellitus, pueden estar asociadas con su elevación.
MUESTRAS. SUERO O PLASMA HEPARINIZADO O EDTA. Estabilidad de la
muestra 5 días de 2 a 8°C.
MATERIAL: 1 gradilla ,3 tubos 12 x 17, 1 pipeta de 5mls.
PROCEDIMIETO
ETIQUETAR 3 TUBO DE RUTINA
BLANCO
PROBLEMA
ESTÁNDAR
1.0ml. De Reactivo de trabajo a todos los tubos
___________
10 Landas de Suero
___________
____________
________
10 landas ST
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C
Leer en absorbancia el (ST) y la (M) frente al Blanco del reactivo a 505 NM.
El color es estable como mínimo por 30minutos.
CALCULO: (A)PROBLEMA x 200 mg/dl = mg/dl de triglicéridos del problema
(A) Estándar
VALORES NORMALES:
HOMBRES:
MUJERES:
40 - 160mg/dl
35 - 135mg/dl
_________________________________________________________________________
Nombre del paciente:
Trigliceridos:
Nombre del alumno:
Maestra:
Faustina Orozco de Palafox
Edad:
Valor Normal:
Fecha:
Revisado:
_________________________________________________________________________
PRÁCTICA #7
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE BILIRRUBINA
(TOTAL Y DIRECTA)
TECNICA: SPINREACT
SIGNIFICADO CLINICO: La bilirrubina se origina por la degradación de la
hemoglobina. Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. La
hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en
plasma. Causas probables de la Hiperbilirrubinemia:
Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia
neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.
Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones
hepáticas. El diagnóstico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos del laboratorio.
MUESTRAS: SUERO O PLASMA libre de hemólisis ( separar lo antes posible
de los hematíes).Estabilidad del suero 4 días de 2 a 8°C o 2 meses a -20°C.
Material: 6 tubos de ensayo 12 x 75, 2 pipetas de 5ml, gradilla
Etiquetar 4 tubos de la siguiente manera
BLANCO
1.- DEL R1
2.- DEL R2
B.(TOTAL)
BLANCO
B.(DIRECTA)
--------
---------
1.5 ML.
1.5 ML.
1.5 ML.
---------
--------
1.5 ML.
3.- DEL R3
---------
50 LANDAS
---------
50 LANDAS
4.- ST
100 LANDAS
--------
100 LANDAS
--------
5.- SUERO
---------
100 LANDAS
----------
100 LANDAS
6.- Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15 – 25 °C
7.- Leer en absorbancia a 555 nanometros, ajustar el espectrofotómetro a
cero frente a agua destilada.
Cálculos: (A) Bilirrubina Total – (A) Blanco Muestra X 19.1 = Bilirrubina total
(A) Bilirrubina Directa- (A)Blanco Muestra X 14= Bilirrubina Directa
VALORES NORMALES:
BILIRRUBINA TOTAL:
HASTA 1,10 mg/dl
BILIRRUBINA DIRECTA: HASTA 0,25 mg/dl
Nombre del paciente:
Resultados:
Nombre del alumno:
Maestra: Faustina Orozco de Palafox
PROFRA. Faustina Orozco Gutiérrez
Edad:
Valores Normales:
Fecha:
Revisado:
PRÁCTICA #8
DETERMINACION CUANTITATIVA DE PROTEINAS TOTALES
TECNICA: SPINREACT
SIGNIFICADO CLINICO: Las proteínas son compuestos orgánicos
macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como
elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos fracciones,
albúmina y globulinas. Su determinación es útil en la detección de:
-Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o
aumento en la concentración de proteínas específicas.
-Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis
proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
Muestras: Suero o plasma Heparinizado, estabilidad de la muestra: 1 mes en
nevera a ( 2-8°C)
MATERIAL: 1 GRADILLA. 1 PIPETA DE 5MLS. 3 TUBOS 12 X 75
ETIQUETAR 3 TUBOS DE RUTINA
BLANCO
PROBLEMA
ESTÁNDAR
1.OML DE REACTIVO A TODOS LOS TUBOS
--------
25 LANDAS(SUERO)
--------
----------
-------25LANDAS (st)
MEZCLAR E INCUBAR 5 MINUTOS A 37°C
LEER LA ABSORBANCIA (A) DEL ESTÁNDAR Y PROBLEMA, FRENTE AL
BLANCO DEL REACTIVO A 540 NANOMETROS. (EL COLOR ES ESTABLE
COMO MÍNIMO 30 MINUTOS).
CÁLCULO: (A) PROBLEMA X 7 = G/DL DE PROTEÍNAS TOTALES
(A) ST
VALORES NORMALES: ADULTOS: 6.6 - 8.3 g/dl
RECIEN NACIDOS: 5.2 - 9.1g/dl
Reporte:
Nombre del paciente:
Resultado:
Nombre del alumno:
Maestra: Faustina Orozco de Palafox
Profra. Faustina Orozco Gutiérrez
Edad:
Valor Normal:
Fecha:
Revisado:
PRÁCTICA
#9
DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA
TECNICA: SPINREACT
SIGNIFICADO CLINICO: La albúmina es una de las más importantes proteínas
plasmáticas producidas por el hígado. Entre sus múltiples funciones se
incluye nutrición, transporte de sustancias como calcio, bilirrubina, ácidos
grasos, drogas y esteroides. Alteraciones en los valores de albúmina indican
enfermedades del hígado, desnutrición, lesiones de la piel como dermatitis,
quemaduras severas o deshidratación.
MUESTRAS: SUERO O PLASMA LIBRE DE HEMOLISIS, estabilidad 1 mes a (28°C) o 1 semana a 15 – 25°C.
MATERIAL: 3 TUBOS 12 X 75, GRADILLA, 1 PIPETA DE 5MLS.PUNTILLAS,
MICROPIPETA
PROCEDIMIENTO
ETIQUETAR 3 TUBOS COMO:
BLANCO
PROBLEMA
STANDAR
1.O ML. DE REACTIVO A TODOS LOS TUBOS
-------------
5 LANDAS (SUERO)
-----------
-------5 LANDAS (st)
MEZCLAR E INCUBAR 10 MINS. A TEMPERATURA AMBIENTE
-LEER EN ABSORBANCIA (A) DEL ST Y PROBLEMA, FRENTE AL BLANCO
DEL REACTIVO A 630 NM. EL COLOR ES ESTABLE 1 HORA A TEMP.
AMBIENTE.
CÁLCULO: (A) PROBLEMA X 5
(A)
= g/dl de albúmina del problema
ST
VALORES NORMALES: 3.5 A 5.0 g/dl
REPORTE:
_________________________________________________________________________
NOMBRE DEL PACIENTE:
RESULTADO:
EDAD:
VALORES NORMALES:
NOMBRE DEL ALUMNO:
MAESTRA: FAUSTINA OROZCO GUTIERREZ
FECHA:
REVISADO:
________________________________________________________________________
PROFRA. Faustina Orozco Gutiérrez
PRÁCTICA #10
DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS TRANSAMINASA GLUTAMICO
OXALACETICA (TGO), ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST).
DEFINICIÓN:
La Got es una enzima con gran concentración en el corazón, en el hígado y
los músculos. Cuando hay una lesión de estos órganos la enzima es liberada
a la sangre y aparece elevada en los análisis.
Muestra: En suero y es estable por 10 días refrigerado ( 2-8°C) y congelado
(-20°C) por 2 semanas y 4 días a temperatura ambiente de (15 a 30°C).
Material: 1 tubo 12 x 75, 1 gradilla y pipeta de 2 mls.
PROCEDIMIENTO
Etiquetar nuestro tubo como problema
-Agregar 1.0 ml. De reactivo de trabajo e incubar por 5 minutos a 37°C
-Agregar 100 landas del suero e incubar 1 minuto a 37°C
-Pasado el minuto leer en absorbancia a 340 nm contra blanco de agua
-Volver a incubar por 2 minutos y volver a leer
-Calcular la diferencia de las lecturas y multiplicar por el factor 1768
VALOR NORMAL: 5 A 34 IU/L
Profra: Faustina Orozco Gutiérrez
REPORTE:
_________________________________________________________________________
Nombre del paciente:
Resultado:
Edad:
Valor Normal:
Nombre del alumno:
Maestra: Faustina Orozco Gutiérrez
Fecha:
Revisado:
_________________________________________________________________________
Profra: Faustina Orozco Gutiérrez
PRÁCTICA #11
DETERMINACION DE TRANSAMINASA GLUTAMICO-PIRUVICA
(GPT), ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT)
TECNICA: POINT
INTRODUCCIÓN: La GPT es una enzima con gran concentración en el hígado
y en menor medida en los riñones, corazón los músculos, cuando hay una
lesión de estos órganos la enzima es liberada a la sangre y aparece elevada
en los análisis, como es una transaminasa más específicamente hepática que
la GOT, aparece más elevada en enfermedades hepáticas que en otras.
Muestra: Suero No hemolizado es estable por 3 días a temperatura ambiente
(15-30°C) 7 días refrigerado (2-8°C) y 30 días congelado (-20°C).
Material: Gradilla, 1 pipeta de 2 mls. 2 tubos 12 x 75
PROCEDIMIENTO
- En un tubo agregar 1.0 ml. Del reactivo de trabajo
- Incubar a 37°C por 5 minutos
- Preparar el espectofotometro a 340 NM. Con agua destilada ajustar a 0
- Agregar 100 landas de suero, mezclar e incubar por 1 minuto
- Pasado el minuto leer e incubar 2 minutos volver a leer
- Restar la lectura A1 – la A2 y lo que se obtenga multiplicar por el factor
1768.
Valor Normal: 4 a 36 IU/L
REPORTE:
_________________________________________________________________________
Nombre del paciente:
Resultado:
Nombre del alumno:
Maestra: Faustina Orozco Gutiérrez
Edad:
VALOR NORMAL:
Fecha:
Revisado:
_________________________________________________________________________
PRÁCTICA #12
DETERMINCIÓN DE FOSFATASA ALKALINA
Introducción: La fosfatasa alkalina es una enzima localizada en la mayor parte
de los tejidos, pero sobretodos en hígado, huesos y vías biliares, es muy
preciso en la determinación de obstrucciones de los conductos biliares, Su
elevación suele ir asociada a la elevación de la Gamma-GT, excepto en
casos de problemas óseos que elevan la Fosfatasa alkalina.
Muestra: Suero no hemolizado refrigerado de (2-8°C) no más de 2 días.
MATERIAL: LO MISMO QUE LA PRÁCTICA PASADA
1.
2.
3.
4.
Pipetear 1.0 ml. Del reactivo de trabajo, incubar 5 mins. a 37°C
Ajustar espectrofotómetro a 405 NM con agua destilada
Agregar 25 Landas de suero e Incubar 1 mins.
Pasado el minuto leer la absorbancia e incubar 2 minutos y volver a
leer.
5. Calcular la A1-A2 x el factor (2187) y nos dará el resultado de
Fosfatasa Alkalina en UI/L
VALOR NORMAL : 35 – 123 UI/L
REPORTE:
___________________________________________________________________
Nombre del paciente:
Edad:
Resultado:
Valor Normal:
Nombre del alumno:
Fecha:
Maestra: Faustina Orozco Gutiérrez
Revisado:
___________________________________________________________________
Profra: Faustina Orozco Gutiérrez
[
BIBLIOGRAFIA
www.pointescientific.com
spinreact spinreact.com
Manual de procedimientos de Bioquímica Clínica
Diagnóstico Clínico por el laboratorio cuarta edición