bioanálisis

SO LU C I O N ES D E CO NSU MIBL ES PARA B I OANÁLI SI S
Soluciones de preparación de muestras y
cromatografía líquida para operaciones cuantitativas de
BIOANÁLISIS
En Waters comprendemos los singulares desafíos a los que se enfrenta la comunidad
bioanalítica, como la necesidad de aumentar al máximo la sensibilidad, incrementar el
rendimiento y crear nuevos métodos robustos que se puedan transferir a laboratorios
de todo el mundo. En consecuencia, creamos soluciones de preparación de muestras y
cromatografía líquida para bioanálisis cuantitativo en torno a un flujo de trabajo sencillo
y lógico que ofrece muestras limpias y separaciones selectivas.
Y para llegar al cenit en la calidad de los datos bioanalíticos, la productividad del
laboratorio y el cumplimiento normativo, integramos estas químicas punteras con
la solución del Sistema de bioanálisis regulado de Waters. Combina
deliberadamente la nueva ACQUITY UPLC® I-Class de dispersión reducida
–la mejor entrada actual de su clase para MS– con el espectrómetro de
masas de alta sensibilidad Xevo ® TQ-S, bajo el control de un nuevo
software utilizando el sistema de información científica UNIFI™,
preparado para ajustarse a la normativa.
2
SO LUCI ONE S DE CONSUMI B LE S PARA B I OA NÁ LISIS
3
SO LU C I O N ES D E PREPARACIÓ N D E MUE STRAS
Principales Ventajas:
■
Un diseño singular elimina pasos dilatorios para
aumentar el rendimiento.
■
Filtrado libre de precipitados para lograr el
máximo de actividad del sistema frente a los
métodos clásicos.
■
Perfecto por su limpieza, compatibilidad con
MS y recuperación del analito.
4
PL ACA DE P RECI P I TACI ÓN DE P ROTE Í NAS SIR OC C O
SIMPLEMENTE TRANSPARENTE
La placa de precipitación de proteínas (PPT) Sirocco™ elimina los pasos adicionales dilatorios de manipulación de muestras
que se emplean tradicionalmente con la PPT clásica. La singular tecnología de las membranas y puntas de válvula permite que
el analista lleve a cabo la precipitación de proteínas en el pocillo seguida del paso final de filtración. Este enfoque permite
un procesamiento eficiente de las muestras que obtiene filtrados transparentes con pequeños volúmenes de muestra. Sirocco
puede automatizarse para procesar gran número de muestras de forma eficiente.
COMPARACIÓN DE TIEMPOS DE PROCESAMIENTO
RECUPERACIÓN
Con las placas Sirocco, las muestras pueden procesarse en un
tiempo significativamente menor que con PPT clásica,
aumentando así el rendimiento del laboratorio.
La placa Sirocco fue analizada para determinar la
recuperación del analito utilizando 7 analitos salpicados
en plasma de rata, empleando un estándar interno. Los
resultados muestran excelentes recuperaciones en todos los
analitos enumerados.
45 minutos
Ejemplo de carga
PPT Sirocco
15 minutos
Ejemplo de carga
100
Recuperación por PPT (%)
PPT Clásica
80
60
40
20
no
lol
pra
Pro
en
olo
l
Al
pr
ol
be
tal
La
pre
no
lol
Ox
rol
ol
do
lol
Me
top
Vacío
Na
Mezcla
At
en
olo
l
0
Mezcla
Mix
Centrifugación
Inyección Directa
Transferencia
del
sobrenadante
5
SO LU C I O N ES D E PREPARACIÓ N D E MUE STRAS
El camino más rápido a lo más limpio
Los productos de preparación de muestras Ostro™ ofrecen una solución novedosa para la limpieza de fosfolípidos en plasma
y suero. Con un desarrollo de métodos mínimo o nulo y utilizando un protocolo sencillo, esta tecnología puede
incorporarse rápidamente para optimizar el flujo de trabajo de su laboratorio. La placa Ostro de 96 pocillos proporciona
extractos más limpios y reproducibles que otros dispositivos o técnicas de eliminación de fosfolípidos y permite análisis
más sensibles, mayor rendimiento de muestras y menos tiempo de parada de los instrumentos.
ELIMINACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS
REPRODUCIBILIDAD
El nivel restante de 5 fosfolípidos tras la preparación de muestras
con Ostro es menor que en la extracción líquido-líquido y que en
la extracción líquida respaldada por sólidos.
Eliminación % comparativa de fosfolípidos totales de 6 lotes
diferentes de plasma utilizando Ostro (RSD 0.19%), placa de
eliminación de fosfolípidos del competidor A (RSD 24.5%) y placa
de eliminación de fosfolípidos del competidor B (RSD 40.9%).
100
350000
% de eliminación de fosfolípidos
Suma de recuentos del área de 5 fosfolípidos
400000
300000
250000
200000
80
70
60
50
40
30
20
10
150000
0
1
100000
2
Ostro
50000
0
Ostro
LLE
SSLE
Suma de 5 fosfolípidos abundantes portadores de fosfatidilcolina con m/z 496, 524, 704,
758 y 806.
6
90
3
Competidor A
4
5
Competidor B
6
PRO DUC TOS DE P RE PARACI ÓN DE MUE STRA S OS T R O
Principales Ventajas:
■
Elimina significativamente más
fosfolípidos que las técnicas de la
competencia, para obtener extractos
más limpios.
■
Mejora la reproducibilidad para lograr
métodos más homogéneos y consistentes.
■
Aumenta el rendimiento con un
protocolo fácil de poner en práctica.
7
SO LU C I O N ES D E PREPARACIÓ N D E MUE STRAS
Principales Ventajas:
■
Máxima sensibilidad para compuestos
farmacéuticos tradicionales y péptidos
terapéuticos.
■
Mínimos efectos de la matriz para
análisis por LC/MS/MS.
■
Inigualable calidad del producto,
rendimiento y reproducibilidad.
8
Productos Oasis para extracción de muestras
Sensibilidad en su forma más pura
La sensibilidad es uno de los principales requisitos para el éxito de un análisis biológico. Lograr la máxima sensibilidad
requiere el aislamiento de compuestos de interés de las interfases presentes en las muestras biológicas. Los productos
patentados Oasis® para extracción en fase sólida (SPE) están disponibles en una amplia gama de formatos y rellenos, que
permiten a los investigadores desarrollar metodologías selectivas para los compuestos de interés. Los productos Oasis
facilitan a los investigadores la creación de métodos de SPE reproducibles y de alta precisión, insuperables en su
sensibilidad y selectividad.
SENSIBILIDAD
LOQ de la benzodiacepina alprazolam 1 pg/mL de 375 µL de plasma
1.61
1.19
100
%
A. Muestra enriquecida
A. Muestra enriquecida
1.66
1.52
1.73
1.55
0
LOQ del propionato de fluticasona 5 pg/mL de 375 µL de plasma
%
100
1.54
1.58
1.62
1.70
1.66
1.74
1.78
100
0
0.8
1.0
1.2
1.6
1.8
2.0
B. Blanco de matriz
%
B. Blanco de matriz
1.01
0
1.4
100
%
Los rellenos mixtos Oasis, creados en
torno al singular copolímero Oasis HLB
humectable con agua, ofrecen dos modos
de retención, lo que permite mayor
selectividad y sensibilidad de limpieza
para compuestos ácidos o básicos, incluso
si el relleno de los pocillos se seca.
Obtenga una sensibilidad inigualable con
la placa Oasis µElution, que puede
concentrar una muestra hasta 15x sin
necesidad de evaporación o reconstitución.
1.54
1.58
1.62
1.66
1.70
1.74
1.78 min
0
0.88
0.8
1.18
1.06
1.0
1.50
1.73
1.28 1.38
1.2
1.4
1.6
2.03
1.82 1.92
1.8
2.0 min
EFECTOS DE LA MAT RIZ
Tras la extracción con un relleno mixto Oasis, se evaluaron los efectos de la matriz para un grupo de 5 antidepresivos en varios lotes de orina. Se determinó que
la RSD de los factores de la matriz se hallaba entre el 5.5 y el 8.4 %, bastante
inferior al límite del 15 % exigido por los organismos reguladores.
Analito
% RSD de los factores de
la matriz
Amitriptilina
6.03
Nortriptilina
5.53
Imipramina
8.36
Desipramina
7.15
Doxepina
5.96
CALIDAD
El cuidadoso diseño de procesos y los exhaustivos controles de calidad de Waters han establecido un nuevo estándar en reproducibilidad
lote a lote para rellenos EFS. Esto permite a los investigadores desarrollar métodos bioanalíticos consistentes, exactos y precisos.
% de recuperación
No hacen falta reservas de lotes: Altas recuperaciones homogéneas a lo largo de más de 15 años de producción.
105
95
85
5
0
RSD de la recuperación para:
10
Procainamida: 1.90%
Ranitidina: 1.68%
15 Años
Paracetamol: 1.65%
9
Soluciones de cromatog raf ía líquida
Tecnología de columnas
Gracias a la mayor sensibilidad, mejor rendimiento y excepcional fiabilidad analítica que ofrece la tecnología UPLC®, el
Sistema ACQUITY UPLC® se ha convertido en la plataforma de LC de elección para análisis biológicos. Con 5 sustratos de
partículas y 20 químicas de columna inferiores a 2 µm disponibles para aplicaciones biofarmacéuticas y de moléculas
pequeñas, Waters tiene una columna de UPLC para satisfacer cualquier exigencia de sus aplicaciones.
ACQUITY UPLC BEH C18
O
O Si
O
O
O Si
O
O
Con niveles sin precedentes de forma de los picos, eficiencia y estabilidad
química, la columna C18 BEH Technology™ [ híbrida con puentes de etileno]
de 1.7 µm es una solución de separación versátil y de rendimiento extremo
para una amplia gama de analitos. Con la capacidad de operar en un pH
entre 1 y 12, la columna BEH C18 utiliza el poder del pH para actuar sobre
la retención, selectividad y sensibilidad de los compuestos ionizables,
mejorando la sensibilidad de los análisis por LC/MS.
O Si
O
ACQUITY UPLC HSS T3
O
CH 3
O Si
O Si
O
O CH 3
Polar Group
O Si
O
Específicamente diseñada para la retención mejorada de compuestos y
metabolitos polares, la columna HSS [sílice de alta resistencia] T3 de 1.8 µm es
una columna C18 de baja densidad de ligandos que ofrece una excepcional
capacidad de retención sin necesidad de reactivos de par iónico. Esto permite
alcanzar límites de detección y de cuantificación más bajos para métodos de LC/MS
O
ACQUITY
OO Si UPLC BEH HILIC
OO Si
O
CH 3
O Si
Polar Group
CH 3
ACQUITY
UPLC BEH300 C18
O
OO Si
O O Si
O
O
O Si
O
O
O Si
O
10
O
O Si
Utilizando una fase móvil rica en acetonitrilo para mejorar la retención, la eficiencia
de ionización y la respuesta de la espectrometría de masas para compuestos
extremadamente polares, la columna BEH HILIC [cromatografía de interacción
hidrófila] de 1.7 µm permite límites de detección más bajos en comparación con
los métodos convencionales de fase reversa. Además, los extractos con alto contenido
orgánico de PPT, LLE o SPE pueden inyectarse directamente, lo cual mejora de
forma espectacular el rendimiento de muestras, la solidez y la sensibilidad.
Específicamente diseñada y sometida a pruebas de QC para el análisis rápido
de péptidos con alta resolución, la columna BEH C18 de 300 Å garantiza la
separación con éxito de una variada gama fisicoquímica de péptidos. Ahora se
puede utilizar una sola columna para retener y separar péptidos con una amplia
gama de hidrofobicidad, punto isoeléctrico y peso molecular.
COLUMNAS ACQUIT Y U P LC
Principales Ventajas:
■
Mejora la productividad del laboratorio
al reducir el tiempo de análisis sin
dejar de mejorar la calidad de los datos.
■
Alcanza límites de detección más bajos
al permitir una respuesta de MS más
elevada con picos cromatográficos estrechos.
■
Mejora la caracterización de las muestras
al reducir la supresión de MS debida a los
componentes residuales de la matriz.
11
Sales Offices:
Austria y exportación en Europa
(Europa Central y Sureste, CEI
y Oriente Medio) 43 1 877 18 07
Australia 61 2 9933 1777
Bélgica y Luxemburgo 32 2 726 1000
Brasil 55 11 4134 3788
Canadá 1 800 252 4752
China 86 10 6156 2666
República Checa 420 2 617 11384
Dinamarca 45 46 59 8080
Finlandia 358 9 5659 6288
Francia 33 1 30 48 72 00
Alemania 49 6196 400 600
Hong Kong 852 2964 1800
Hungria 36 1 350 5086
India 91 80 2837 1900
Irlanda 353 1 448 1500
Italia 39 02 265 0983
Japón 81 3 3471 7191
Corea 82 2 6300 4800
México 52 55 52 00 1860
Países Bajos 31 76 508 7200
Noruega 47 6 384 6050
Polonia 48 22 833 4400
Puerto Rico 1 787 747 8445
Russia/CEI 7 495 727 4490/ 290 9737
Singapur 65 6593 7100
España 34 93 600 9300
Suecia 46 8 555 115 00
Suiza 41 56 676 7000
www.waters.com/BA
Taiwán 886 2 2501 9928
Reino Unido 44 208 238 6100
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford, MA 01757 EE. UU.
T: 508 478 2000
F: 508 872 1990
www.waters.com
El sistema de gestión de calidad de las instalaciones de fabricación de
Waters en Taunton, Massachusetts y en Wexford, Irlanda, cumple los
estándares de gestión de calidad y garantía de calidad de la norma
internacional ISO 9001:2008. El sistema de gestión de calidad de
Waters es auditado periódicamente por el organismo de registro para
garantizar su cumplimiento.
Waters, T he Science of W hat’s Possible, UPLC, ACQUITY UPLC, UNIFI, Xevo, Oasis, Ostro, Sirocco y BEH Technology
son marcas comerciales de Waters Corporation.
©2011 Waters Corporation. Impreso en EE. UU.
Mayo de 2011 720003931ES SC-CM