Embrión agámico Clonación y Células madre Embrión agámico UNIVERSITÀ PONTIFICIA REGINA APOSTOLORUM Gemelos Mosaicos Clonación P Definición: embrión originado sin pasar por la unión del gameto masculino (espermatozoide) y del gameto femenino (oocita) Quimeras Partenogénesis Células madre P Tipos < Escisión gemelar: gemelo monocigotico < Clonación: transferencia de núcleo < Partenogénesis. Ramón Lucas Lucas, LC [email protected] www.ramonlucas.org 1 2 Gemelos monocigóticos Gemelos monocigóticos P Surgen de la división del óvulo fecundado en diversas etapas tempranas del desarrollo. Son de cuatro tipos P Se diferencian en cuatro tipos según el tiempo de la división. Gemelos monocigóticos Tiempo desde la fecundación Embriones Placenta Cavidad Amniótica Corion 72 horas 2 2 2 2 4-8 Dias 2 1 2 1 8-14 Dias 2 1 1 1 + 14 Dias Siameses 3 Gemelos monocigóticos P Surgen de la división del óvulo fecundado en diversas etapas tempranas del desarrollo. Son de cuatro tipos P Primer tipo < Primeras 72 horas después de la fecundación no se ha formado la masa celular interna, ni el amnios y el corion < Cada uno posee placenta, cavidad amniótica y corionica proprias P Segundo tipo < División entre los días 4 y 8 después de que la masa celular interna se ha formado y las células destinadas a convertirse en corion se han diferenciado, pero las células del amnios todavía no < Placenta y cavidad corionica común. 4 Embrión agámico: Quimeras P Tercer tipo < Después de los 8 días de la fecundación el amnios también se ha formado < Tienen en común: placenta, cavidad amniótica y corionica P Cuarto tipo < Si la división se inicia mas tarde una vez formado el disco embrionario la división es incompleta y se forman siameses. Dependiendo de la estructura del cuerpo compartida se llaman: – – – – anterior: toracopago posterior piopago cefálico: craneopago caudal isquiopago. 5 P Es un animal compuesto por diferentes poblaciones celulares que derivan de más de un óvulo fecundado, o de la unión de más de dos gametos < Quimeras primarias: pueden generarse por agregación de embriones diferentes en un estadio temprano de desarrollo. Este parece ser el caso del individuo con dos tipos celulares genéticamente diferentes (XX y XY) – Explicación: este individuo XX/XY se originó como resultado de una agregación de dos embriones, uno masculino y otro femenino que estaban desarrollandose al mismo tiempo < Quimeras secundarias: pueden surgir espontáneamente por transferencia de células entre madre y embrión, o de un embrión a otro. 6 Embrión agámico: Partenogénesis Embrión agámico: mosaicos, híbridos P Del gr. P Mosaicos < Es un individuo compuesto por diferentes poblaciones celulares, aunque derivado de un único óvulo fecundado < En el mosaico, las diferentes poblaciones celulares se originan durante el desarrollo mediante un proceso de mutación, recombinación somática o no disyunción P Híbridos < Resulta de la unión de dos genomas diferentes en una misma célula (es decir, a partir de dos progenitores con genomas diferentes). parqenoj, virgen, genesij , generación. P Modo de reproducción de algunos animales inferiores y plantas a partir de óvulos femeninos que no han sido fecundados por espermatozoides masculinos P De modo natural, los mamiferos dotados de placenta, no se reproducen con esta modalidad P Los problemas antropológicos y éticos son similares a los de la clonación, dado que es una forma de reproducción agámica. P Se pone el problema de la individualidad debido a la no “viabilidad” por falta de “imprinting genómico”. 7 8 La situación actual en el mundo P GB Clonación y células madre: posibilidades terapéuticas e implicaciones éticas < El caso Wilmut 1997 Obeja Dolly (Edimburgo) – 6 Julio 2001: se declara contro la clonación humana – 25 Noviembre 2002: pide a la Fertilization Authority del Gobierno autorización para clonar embriones humanos con finalidad terapéutica – 8 Febrero 2005: GB: si a Wilmut: puede clonar embriones humanos para la investigación de terapias de una enfermedad motorio-neruronal P Italia < Referendum sobre la abolición de la ley 40 P EE.UU. < Favorable Clinton; oposición Busch; favorable Obama 9 10 La situazione en España P Ley 35/1988, de 22 de noviembre, sobre Técnicas de Reproducción Asistida P Ley 45/2003, de 21 de noviembre, por la que se modifica la Ley 35/1988, de 22 de noviembre, sobre Técnicas de Reproducción AsistidaLey actual P Ley 14/2006 de Técnicas de Reproducción humana asistida, de 26 de mayo 2006 < (BOE, núm. 126, de 27 de mayo de 2006) P Ley 14/2007, de 3 de julio 2007 de Investigación biomédica < (Ley, BOE, núm. 159, de 4 de julio de 2007). 11 PERSONA HUMANA Totalidad unificada CUERPO ALMA Material Espiritual Espacial Temporal - moverse... - aquí, ahí... - año 2011 - duración: un día Actos materiales - nutrirse, crecer... - ver, oír, tocar... Muere No ocupa ni espacio ni tiempo Actos inmateriales - pensar, razonar... - amar, decidirse... - angustiarse, temer... Inmortal 12 P Clonación (klon = retoño) P Clonación (klon = retoño) < Definición: producción artificial individuos genéticamente casi idénticos a otros ya existentes < Por clonación humana se entiende la reproducción asexual y agámica de la totalidad del organismo humano, con objeto de producir una o varias “copias” substancialmente idénticas, desde el punto de vista genético, al único progenitor” (Dignitas personae 28). < Tipos: – Clonación reproductiva: tiene la finalidad de producir un nuevo individuo igual al clonado L – Clonación terapéutica: tiene la finalidad de producir un nuevo individuo, para obtener de él una serie de células troncales embrionarias para transplantarlas en el paciente y sustituir las enfermas . L 13 14 P Método: < Transferencia del núcleo: – 1 se extrae el núcleo del óvulo receptor (aploide) Blackface; – 2 se sustituye con el núcleo de una célula somática de adulto (diploide) Finn Dorset; – 3 se implanta en el útero de un tercero Blackface. Este núcleo (de célula somatica) introducido en el óvulo anucleado (célula germinal) pierde las diferenciaciones, y da origen a un nuevo individuo genéticamente idéntico Dolly Finn Dorset < Animación: Web-Paginas: – /ClonazioneRiproduttiva/frame125.html – /ClonazioneTerapeutica/frame404.html 15 16 Clonación humana Casos: < 1993 Robert Stillman - Jerry Hall (George Washington University): ¿primeros hombres clonados? < 1997 Oveja Dolly (Edimburgo) < 1998-2004: muchos animales < 2005: Corea: Hwang Woo-Suk ¿primeros hombres? = Fraude < 2007: USA: Trasferencia de nucleo; UK: embriones híbridos. 17 18 Criterios generales P El caso Wilmut < 1997 Oveja Dolly (Edimburgo) < 6 Julio 2001: Ian Wilmut, se declara en contra de la clonación humana – Pide una moratoria, subrayando los límites y peligros para el hombre – Sus preocupaciones: los peligros más probales de la clonación serían: – El aborto involuntario – Muerte probable después de nacer – Graves deformaciones y anomalias < 25 Noviembre 2002: Wilmut pide a la Fertilization Authority del Gobierno inglés autorización para clonar embriones humanos con finalidad terapéutica < 28 Noviembre 2004: los expertos confirman que para clonar embriones en GB es necesaria la autorización de la Fertilization Authority < 8 Febrero 2005: GB: sì a Wilmut: puede clonar embriones humanos para buscar terapias a la enfermedad nuronal motoria P Libertad de investigación y dignidad de la persona < Finalidad primaria de la medicina y del progreso – defensa y protección de la vida, no manipulación o eliminación < El fin bueno no justifica los medios < No todo lo que es técnicamente posible es moralmente admisible – No es desconfianza ni oposición al desarrollo científico, sino hacer que esté al servicio del hombre y no de su destrucción. < 2006: Denuncias de sus colaboradores. 19 20 Criterios generales P Libertad de investigación y dignidad de la persona (cont.) P Juicio ético < Reproductiva animal: lícita, pero regulada < Reproductiva humana: siempre ilícita < Terapéutica humana: problema origen de las células madre < Ciencia y ténica: ¿neutras? – El científico – Los instrumentos técnicos P Criterios ético-filosóficos < Diferencia entre ciencia y cientificismo < 1. Identitad individual de cada persona – Ciencia: búsqueda de la verdad empírica mediante el método de lo verificable empíricamente – Cientificismo: rechazo de toda realidad y conocimiento que no sea el proporcionado por las ciencias empíricas. < 2. Total indisponibilidad de la persona; no es un medio < 3. Naturaleza de la sexualidad y de la procreación. 21 22 1. La identidad personal A) En la clonación no se duplica la identidad personal A EN LA CLONACIÓN Imposibile duplicarla desde el punto de vista biológico P Imposible duplicarla desde el punto de vista biológico NO SE DUPLICA LA IDENTIDAD PERSONAL Imposibile duplicarla desde el punto de vista psicológico-espiritual B En su identidad biológico-genética 1 IDENTIDAD PERSONAL < La identidad genética, por si sola, no constituye la identidad biológica del individuo – eventuales cambios, debidos a factores biológicos o ambientales LA CLONACIÓN, SIN EMBARGO, VIOLA LA IDENTIDAD DE LA PERSONA 23 En su identidad psicológico-espiritual < Mucho menos constituye la identidad personal – El desarrollo de la personalidad, el ambiente social y cultural, la educación recibida, configuran una identidad diversa. Ej. gemelos monocigoticos. 24 P Imposible duplicarla desde el punto de vista psicológico-espiritual Patrimonio genético único < La «identidad» corpórea nunca sería una identidad personal. La persona es «corpore et anima unus», unión substancial de un principio material (cuerpo) y otro espiritual (alma) < El alma humana es simple, no puede provenir de la materia, ni ser generada por los padres, ni producida por los científicos en los laboratorios; el alma no puede clonarse < El alma humana es creada directamente por Dios en cada hombre. Esto hace a cada persona no sólo un individuo de nuestra especie, sino un ser único e irrepetible. 25 P Identidad biológico-genética < El patrimonio genético no agota toda la identidad personal, pero es ciertamente una parte constitutiva. Daña la dignidad del hombre el que alguien pueda decidir y programar la constitución genética de otro < Si “hasta hoy nos hemos preocupado de garantizar a los hombres la libertad de conciencia..., hoy debemos preocuparnos de proteger también su autonomía genética , dado que las técnicas de clonación la amenazan” Identidad biológico-genética Que nadie tenga poder sobre otro hasta el punto de poder programar lo que él debe ser fijando su património genético Identidad personal Propias capacidades psíquicas Identidad psicológica Propia autodeterminación 26 P Identidad biológico-genética < “En caso de que la clonación tuviera un objetivo reproductivo , se impondría al sujeto clonado un patrimonio genético preordenado, sometiéndolo de hecho –como se ha dicho– a una forma de esclavitud biológica de la que difícilmente podría liberarse. El hecho de que una persona se arrogue el derecho de determinar arbitrariamente las características genéticas de otra persona, representa una grave ofensa a la dignidad de esta última y a la igualdad fundamental entre los hombres ” (Dignitas personae 29). < La clonación conduciría: – a una concepción selectiva del hombre – a una forma de manipulación y fijación genética. 27 28 2) Total indisponibilidad de la persona a ser tratada como medio P Identidad psicológica < En la identidad personal entra en juego toda la dimensión psíquica del individuo. Si por una parte es cierto que el alma no puede clonarse, por otra: – La psicología del «clonado» estaría gravemente comprometida: se vería cargada de esperanzas en relación a la persona de la cual es copia – El valor del “clonado” no dependería de su identidad personal, sino de las cualidades que como “copia” posee – Se puede imaginar el dolor profundo del “clonado”: – Que sabe que no vale por sí, sino en relación a otro – Que es consciente de una identidad que no acepta, pero que le ha sido impuesta por otro – Graves riesgos penales: hoy un individuo che no se acepta así mismo (color, forma del cuerpo...), no tiene más remedio que aguantarse. La situación sería diversa si esta persona pudiese culpar a alguien, que se atribuyó el derecho de predeterminar situaciones que él no acepta. 29 < El carácter absoluto de la persona impide que pueda ponerse a disposición de alguien como un instrumento < La clonación hace precisamente eso. Esto es evidente en la clonación: – por fines futiles: padres que quieren una hija rubia y con ojos azules, o que sea la «copia» de una actriz – por fines eugenésicos o raciales: querer seleccionar la raza, planificar las generaciones futuras según un «modelo» ideado por alguien que se arroga el derecho de disponer de los derechos de otros hombres. 30 < Por fines terapéuticos: < La clonación «terapéutica» se presenta como el proyecto que pretende pararse antes de la anidación en el útero o, en todo caso, antes del nacimiento, con el fin de producir células y tejidos a partir de embriones humanos clonados, es decir de seres humanos de los cuales se preve la interrupción de la vida, para poderlos utilizar como fuente de material biológico, en orden a reparar tejidos u órganos degenerados en un individuo adulto < Antropología equívoca: el cuerpo humano se piensa como una máquina compuesta de piezas de recambio. El cuerpo humano es costitutivo de la dignidad e identidad personal, forma parte de la subjetividad, y no es lícito usarlo como instrumento. El sujeto clonado es un ser humano y no es lícito programar su existencia como un “depósito de piezas de recambio”. – La contradicción antropológica y la ilicitud moral permanecen, porque la finalidad humanística a la cual se apela no es moralmente coherente con el medio utilizado: manipular un ser humano en sus primeros estadios vitales para obtener el material biológico necesario para la experimentación de nuevas terapias, interrumpiendo su ciclo vital, contradice el valor de salvar otras vidas o de curar enfermedades de otros seres humanos. Ningún fin considerado bueno puede justificar una acción en sí misma mala – El valor de la vida humana, fuente de igualdad entre los hombres, hace ilícito un uso puramente instrumental de la existencia de un ser igual a nosotros, llamado a la vida sólo para servir de material biológico para otros. 31 P “Desde el punto de vista ético, la llamada clonación terapéutica es aún más grave. Producir embriones con el propósito de destruirlos, aunque sea para ayudar a los enfermos, es totalmente incompatible con la dignidad humana, porque reduce la existencia de un ser humano, incluso en estado embrionario, a la categoría de instrumento que se usa y destruye. Es gravemente inmoral sacrificar una vida humana para finalidades terapéuticas” (Dignitas personae 30) . 32 P En la clonación se daría < procreación sin sexualidad: la generación de una persona humana se verificaría mediante una operación técnica, asexual < se separaría completamente sexualidad y reproducción, llegando a una forma de rechazo explicito de la procreación sexual < “llevando hasta el extremo el carácter inmoral de las técnicas de fecundación artificial, se propone dar origen a un nuevo ser humano sin conexión con el acto de recíproca donación entre dos cónyuges y, más radicalmente, sin ningún vínculo con la sexualidad . Tal circunstancia da lugar a abusos y a manipulaciones gravemente lesivas de la dignidad humana” (Dignitas personae 28) < además se daría una ruptura radical en los lazos de parentesco: la filiación, la consanguinidad, la paternidad. Una mujer podría ser hermana de su madre, no tener padre o ser hija de su abuelo. 33 34 LAS CÉLULAS Germinales Somáticas 23 cromosomas 46 cromosomas Células Madre (Estaminales) Diferenciadas Oseas nerviosas epáticas... - Adultas 35 Espermatozoide Clasificadas según la potencialidad Clasificadas según el origen - Embrionarias Óvulo - Totipotentes: toda célula y organismo completo - Pluripotentes: no organismo completo; si células de cualquier linaje - Multipotentes: solo generan células de su propia capa o linaje - Unipotentes: únicamente un tipo de célula particular 36 Célula madre P Definición: son aquellas células que, independientemente de su origen, (embrionales o adultas) tienen dos propiedades: < La prolongada capacidad de multiplicarse sin diferenciarse; < La capacidad de dar origen a células progenitoras de tránsito, de las que descienden células sumamente diferenciadas, por ejemplo, nerviosas, musculares o hemáticas – (TheNational Institutes of Health resource for stem cell research) . Tipos de células madre: según origen P Células madre embrionarias , – en el embrión en los primeros estadios del desarrollo – en embriones producidos “ad hoc” o supernumerarios de la FIVET # Células madre adultas – en diferentes tejidos humanos: médula ósea, encéfalo... 37 Uso terapéutico P Las células madre pueden dar origen a otras células “diferenciadas”, que pueden curar y sustituir células dañadas en el organismo de un enfermo. De este modo, enfermedades todavía incurables, podrían pronto ser tratadas con resultado positivo. ¿Quién no ve en esto una puerta abierta a la esperanza? P El problema ético está en el origen de la células madre: ¿de dónde se toman?. 38 Problema ético de las células madre adultas P Las células madre «adultas» se pueden obtener de la médula ósea de un adulto o de muchos otros tejidos < El uso de las células madre adultas no presenta ningún problema ético; es decir, es lícito en cuanto tales células se obtienen sin daño de los sujetos interesados. P “Para la valoración ética hay que considerar tanto los métodos de recolección de células troncales como los riesgos de su utilización clínica o experimental . < En lo que atañe a los métodos usados para la recolección de células troncales, éstos deben considerarse en relación a su origen. Se deben considerar lícitos los métodos que no procuran grave daño al sujeto del que se extraen. Esta condición se verifica generalmente en el caso de: a) extracción de células de tejidos de un organismo adulto; b) de la sangre del cordón umbilical en el momento del parto; c) de los tejidos de fetos muertos de muerte natural” ( Dignitas personae 32). 39 Problema ético de las células madre embrionarias P Las células madre embrionarias se pueden obtener de un embrión cuando todavía está en el estadio de blastocisto < Según el estado actual de la técnica para obtenerlas, el uso con fin de investigación o terapéutico plantea graves problemas éticos. , 40 P ¿Es éticamente lícito producir embriones humanos o usar embriones humanos ya producidos, para obtener células madre embrionarias? (Ad hoc, supernumerarios) P Respuesta: no. Razones: < El embrión es un sujeto humano con una identidad bien definida desde su concepción. Desde ese momento se desarrolla en modo coordinado, continuo y gradual; en ningún momento del desarrollo es una masa amorfa de células < En consecuencia, como individuo humano, tiene derecho a su propia vida. Cualquier intervención, que no sea en favor de él mismo, viola directamente ese derecho < Para obtener c.m.e. es necesaria la ablación de la masa celular interna del blastocisto. Esto provoca provoca su muerte. La acción es gravemente ilícita < Ningún fin bueno justifica medios malos. 41 42 P ¿Es éticamente lícito utilizar células madre embrionarias producidas por otros científicos o disponibles en el mercado? P Respuesta: no. Razón: < Mas allá de comprender la intención “buena” de quien las “utiliza”, se daría una cooperación material próxima en el mal con el “productor” de las c.m.e., y esta acción es moralmente ilícita. ¿La ciencia está bloqueada? P La ciencia es libre: < Resultados obtenidos con celulas madre adultas: – \My Pictures\StemCell\ Celulas-madre < Dificultad en el uso de las c.m.e. – \My Pictures\StemCell\ Pax3.rgo 43 44 P A. Vescovi: Nature, 17 abril 2003 – Injection of adult neurospheres induces recovery... – Stem cells of the brain and their therapeutic potential 45 46 47 48 ¿La ciencia está bloqueada? P Nature 2002 Cattherine Verfaillie (University of Mde Minnesota): aisladas CSA de la médula capaces de diferenciarse en tres lineas germinales: ecto, meso , endodermicas. P Endocrinology (2002) se obtiene insulina de CSA de pacientes diabéticos P Proceedings of the National Academy of Sciences (Gennaio 2003) las CSA del cordón se crioconservan P Proceedings of the National Academy of Sciences (Giugno 2003) aisladas CSA nerviosas, cutáneas, hepáticas. 49 P 30 Marzo 2004: Meeting della American Association of Cancer Research, Orlando in Florida. Michael Andreeff Universidadl Texas, Anderson Cancer Center a Houston anuncia que las CSA obtenidas de la médula ósea han curado el 70% de tumores en los ratones P 8 Settembre 2004: Policlinico San Matteo, Pavia, el pequeño Luca, talasémico, sana gracias a un transplante de CSA obtenidas de las hermanitas, concebidas mediante FA con la finalidad de ser donadoras compatibles 50 P Septiembre 2004: un equipo de investigadores japoneses devolvía la vista a 4 pacientes utilizando células extraídas de la boca de los afectados P 12 Octubre 2004, Chosun University’s Medical School (Corea del Sur): Hwang Mi-Soon South paralítica desde los 19 años. Le transplantan CSA de la sangre del cordón umbilical. A las seis semanas puede caminar. P 9 Settembre 2004: Congreso sobre CSA en Roma. Después del resultado positivo con CSA neuronales en los animales, Angelo Vescovi anuncia que ha comenzado los primeros experimentos terapéuticos con humanos. 51 P Enero 2005: científicos argentinos consiguen que el páncreas de un diabético produzca insulina al implantarle en los vasos sanguíneos células extraídas de su propia médula ósea P 24 febrero 2005: Publicación en Nature: el gen Pax3 regula el desarrollo de las ASC. Descubierto el modo según el cual el Pax3 mantiene la ASC en estado indiferenciado, que le permitirá después, oportunamente orientada, diferenciarse P 2 Abril 2006, Nature Medicine. Franfurt, el equipo del Dr. Manuel Grez extrae de la médula ósea células madre precursosaras de células hematopoieticas, las inyecta y cura dos hermanos (25 y 25 años) afectados de granulomatosis (inmunodeficiencia inmunitaria) ligada a una modificación del gen X. 53 52 P 10 Febrero 2005: conferencia en el XX Congreso Nacional de la Sociedad Española de Medicina Estética (Barcelona): < Juan Carlos Izpisúa – Director del Centro de Medicina Regenerativa de Barcelona y del Instituto Salk de California – Uno de los más firmes defensores de la investigación con células madre embrionarias < Reconoce: “las células embrionarias fracasan, mientras las adultas siguen dando resultados” < "Implantar este tipo de células en un enfermo le puede provocar cáncer" porque "no sabemos como actúan una vez introducidas en el cuerpo humano... pueden proliferar de forma descontrolada y provocar tumores" < Todavía "estamos lejos" de poder usar estas técnicas para curar enfermedades humanas como el Parkinson. 54 P Resultados obtenidos en España con las ASC: < La Clínica Universitaria de Navarra ha realizado más de una docena de intervenciones en casos de corazones infartados que se han regenerado a partir de inyectarles células estaminales extraídas del propio paciente. Todos ellos se han recuperado satisfactoriamente < En marzo de 2004, investigadores del Hospital Clínico de Barcelona llevaban a cabo un tratamiento experimental con 14 personas afectadas de esclerosis múltiple avanzada que consiguieron estabilizar la evolución de la enfermedad gracias a células madre obtenidas de su propia sangre < Un equipo del hospital madrileño de La Paz conseguía en noviembre de 2004 curar fístulas perianales complejas utilizando también células del paciente extraídas del tejido adiposo. 55 P Patient-Specific Embryonic Stem Cells Derived from Human SCNT Blastocysts P Woo Suk Hwang et al. P Science, published online 19 May 2004, 10.1126/science.1112286 < On 19 May 2005, Science publishes a study, by Hwang et al., that marks new progress --via an improved method of somatic cell nuclear transfer --toward the long-term goal of producing "patient-specifc" stem cell lines that might someday be used for human treatment. Science is making this article (posted on our publishbefore-print service, Science Express), along with related News and Policy Forum articles. 56 P Science, published online 19 May 2004, 10.1126/science.1112286 P Clonación de embriones y obtención de células madre embrionarias < El investigador principal del estudio, el doctor Woo Suk Hwang, y sus colaboradores exponen en su informe que para este trabajo han empleado 185 ovocitos procedentes de 18 mujeres (de las cuales 10 eran menores de 30 años) y células de la piel de 11 donantes (mujeres y hombres de entre 56 y dos años de edad) obtenidas a partir de una biopsia. Entre estos últimos, había individuos con diabetes juvenil, con daños en la médula espinal o con un trastorno de inmunodeficiencia (hipogammaglobulonemia) que provoca un aumento del riesgo de infecciones < El siguiente paso fue extraer el núcleo de los ovocitos, u óvulos, e insertarles los núcleos de las células epiteliales. Tras una serie de técnicas, similares a las que se emplearon en la clonación de la oveja Dolly, los óvulos comenzaron a dividirse como si hubieran sido fecundados hasta convertirse en blastocitos (conjunto de células indiferenciadas) < En la fase de blastocito (cuando el embrión tiene seis días), los investigadores extrajeron células madre y consiguieron 11 líneas celulares. Por cada línea celular se utilizaron una media de 17 ovocitos. 57 58