Características de Crecimiento, Germinación, Esporulación y

Revista Mexicana de Fitopatología
ISSN: 0185-3309
[email protected]
Sociedad Mexicana de Fitopatología, A.C.
México
Gutiérrez Alonso, Juan Gabriel; Nieto Ángel, Daniel; Téliz Ortiz, Daniel; Zavaleta Mejía, Emma;
Vaquera Huerta, Humberto; Martínez Damián, Teresa; Delgadillo Sánchez, Felipe
Características de Crecimiento, Germinación, Esporulación y Patogenicidad de Aislamientos de
Colletotrichum gloeosporioides Penz. obtenidos de Frutos de Mango (Mangifera indica L.)
Revista Mexicana de Fitopatología, vol. 19, núm. 1, enero-junio, 2001, pp. 90- 93
Sociedad Mexicana de Fitopatología, A.C.
Texcoco, México
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9 0 / Volumen 19, Número 1, 2001
Características de Crecimiento, Germinación, Esporulación y
Patogenicidad de Aislamientos de Colletotrichum
gloeosporioides Penz. obtenidos de Frutos de
Mango (Mangifera indica L.)
Juan Gabriel Gutiérrez-Alonso, Daniel Nieto-Ángel, Daniel Téliz-Ortiz, Emma
Zavaleta-Mejía, Instituto de Fitosanidad, Programa de Fitopatología, Colegio de
Postgraduados (CP), Carr. México-Texcoco, km 35.5, Montecillo, Edo. de México CP
56230; Humberto Vaquera-Huerta, ISEI, Programa de Estadística, CP; Teresa MartínezDamián Depto. de Fitotecnia, Universidad Autónoma Chapingo, Carr. México-Texcoco,
km 38.5, Chapingo, Edo. de México CP 56230; y Felipe Delgadillo-Sánchez, INIFAPCampo Experimental Bajío, Carr. Celaya-San Miguel de Allende, km 6.5, Apdo. Postal
112, Celaya, Guanajuato, México CP 38010. Correspondencia: [email protected]
(Recibido: Abril 19, 2001 Aceptado: Julio 30, 2001)
Resumen.
Gutiérrez-Alonso, J.G., Nieto-Ángel, D., Téliz-Ortiz, D.,
Zavaleta-Mejía, E., Vaquera-Huerta, H., Martínez-Damián, T.
y Delgadillo-Sánchez, F. 2001. Características de crecimiento,
germinación, esporulación y patogenicidad de aislamientos
de Colletotrichum gloeosporioides Penz. obtenidos de frutos
de mango (Mangifera indica L.). Revista Mexicana de
Fitopatología 19:90-93.
Se aislaron cepas de Colletotrichum gloeosporioides de
frutos de mango afectados por antracnosis y colectados en
las regiones productoras de Veracruz, Sinaloa, Michoacán,
Guerrero y Chiapas, México, para comparar su crecimiento,
germinación, esporulación y patogenicidad. Un análisis
discriminante probó la existencia de grupos diferentes,
basándose en la tasa de germinación (TG) y pruebas de
patogenicidad (% de severidad) en fruto. El aislamiento
Sinaloa presentó los valores más altos de TG (6.8%
germinación/h) y 94% de severidad. En contraste, el
aislamiento Veracruz 1 presentó 0.19% de TG, no obstante
mostró una severidad de 100% en frutos. El aislamiento
Michoacán presentó un comportamiento similar a Veracruz 1,
excepto que ocasionó una severidad de sólo 22%. El
aislamiento de Chiapas presentó una TG de 3.9% y ocasionó
una severidad de daño similar a la de Michoacán; mientras
que las TG de los aislamientos de Veracruz 2 y Guerrero fueron
de 6.7 y 5.3%, respectivamente, pero no fueron patogénicos.
Este comportamiento diverso entre los diferentes aislamientos
sugiere una variabilidad genética elevada en C.
gloeosporioides.
Palabras clave adicionales: variabilidad genética, análisis
discriminante, antracnosis, aptitud parasítica.
Abstract. Strains of Colletotrichum gloeosporioides from
mango fruits affected by anthracnose and collected from the
states of Veracruz, Sinaloa, Michoacan, Guerrero and Chiapas,
Mexico, were used to compare their growth, germination,
sporulation and pathogenicity. A discriminatory analysis
proved the existence of different groups based on germination
rate (GR) and pathogenicity tests (% severity) on fruit. The
Sinaloa isolate presented the highest GR values (6.8%
germination/h) and 94% severity. In contrast, the GR of isolate
Veracruz 1 was 0.19%, nevertheless it showed a severity of
100% in fruits. The Michoacán isolate showed a similar
behaviour as Veracruz 1, with the exception that it caused a
severity of only 22%. The isolate from Chiapas had a GR of
3.9% and it caused a severity similar to Michoacan; while
Veracruz 2 and Guerrero isolates had a GR of 6.7 and 5.3%,
respectively; however they were not pathogenic. This diverse
behaviour among the different isolates suggests a high level
of genetic variability of C. gloeosporioides.
Additional keywords: Genetic variability, discriminatory
analysis, anthracnose, parasitic fitness.
Colletotrichum gloeosporioides Penz. es el agente causal
de una diversidad de daños y síntomas en diferentes frutales
tropicales y subtropicales en México, y afecta diferentes
órganos vegetales de la planta, así como en distintas etapas
fenológicas del cultivo. En aguacate ocasiona pérdidas del 4
Revista Mexicana de FITOPATOLOGIA / 91
al 7% en postcosecha (Vidales, 1997); en cítricos reduce el
rendimiento hasta en 49% (Orozco-Santos, 1984); y en mango,
las pérdidas fluctúan de 15 a 50% (Becerra-Leor, 1995).
Morales-García (1996) reportó diferentes variantes de
Colletotrichum gloeosporioides, que se obtuvieron de frutos
de aguacate con diferentes tipos de síntomas y lugares de
procedencia, lo que reflejó un grado de variabilidad alto entre
las poblaciones de este patógeno. Para 1992 se reconocieron
900 especies de Colletotrichum y cerca de 600 variantes de
Colletotrichum gloeosporioides (Bailey y Jeger, 1992). Bonde
et al. (1991), distinguieron varias formas patogénicas basadas
en los hospederos específicos y características culturales.
Maas (1983), utilizó el criterio de patogenicidad para
diferenciar aislamientos de C. gloeosporioides, C. fragariae,
C. coccodes, C. trifolii, C. dematium, Glomerella cingulata
y Gloeosporium spp. y observó que la patogenicidad varió
con el aislamiento y el tejido inoculado. En una investigación
efectuada con cepas de C. gloeosporioides aisladas de
mango, se observó que el 5% de los conidios fueron
binucleados heterogéneos, lo cual podría explicar en parte la
variación observada por los investigadores (Alahakoon et
al., 1992). Debido a que en aislamientos de C.
gloeosporioides obtenidos de frutos de mango afectados
por Antracnosis, se ha observado variación principalmente
en el crecimiento, forma y color de colonias (datos no
publicados), en la presente investigación se realizó la
caracterización de aislamientos de C. gloeosporioides
provenientes de las principales regiones productoras de
mango en México: Veracruz, Sinaloa, Michoacán, Guerrero y
Chiapas. Los parámetros considerados fueron tasa de
germinación de conidios, tasa de crecimiento micelial,
esporulación in vitro y su patogenicidad (severidad) en
mango cv. Haden.
MATERIALES Y MÉTODOS
De frutos de mango cv. Haden afectados por Antracnosis,
que se colectaron en las regiones productoras de Veracruz,
Sinaloa, Michoacán, Guerrero y Chiapas se obtuvieron
cultivos de Colletotrichum gloeosporioides. De cada región
se seleccionó el aislamiento que produjo la mayor
esporulación, excepto para Veracruz, donde se seleccionaron
dos. La purificación de los aislamientos se realizó mediante
cultivos monoconidiales en medio sólido papa-dextrosa-agar
(PDA). Una vez purificados, de cada aislamiento se tomaron
discos (6 mm de diámetro) de medio de cultivo con micelio del
hongo, se colocaron individualmente sobre placas de PDA,
y se mantuvieron en cámara de incubación a 25 ± 2°C y luz
fluorescente continua. El crecimiento micelial se midió
diariamente hasta que el hongo llenó la caja Petri. Con los
datos de crecimiento se realizaron regresiones lineales para
la obtención de tasas de crecimiento micelial (TCM),
considerando el crecimiento en mm por unidad de tiempo.
Posteriormente, del borde de la colonia de cada aislamiento,
se tomó un disco de 6 mm de diámetro conteniendo micelio
del hongo, se colocó en 2 ml de agua más Tween 20, se agitó
por 10 min y se cuantificó el número de conidios por ml
utilizando un hematocímetro; de cada disco se realizaron dos
mediciones, en total 10 por aislamiento. Para la evaluación
del porcentaje y tiempo de germinación, se prepararon
suspensiones de conidios (1 x 105 /ml) y de cada aislamiento
se depositó 0.1 ml de la suspensión sobre discos de PDA de
1.5 cm de diámetro. Los discos se incubaron a 25 ± 2°C y luz
fluorescente continua. En total se tuvieron cinco discos por
aislamiento. Las evaluaciones se realizaron cada hora durante
36 h, cuantificando 50 conidios por disco en microscopio
electrónico y aumento 10X. El criterio de germinación de
conidios fue la emergencia de tubos germinativos. Con los
datos de tiempo de germinación se realizaron regresiones
lineales para la obtención de tasas de germinación (TG) por
hora. Las pruebas de patogenicidad de los aislamientos se
realizaron en mangos cv. Haden, asperjando suspensiones
de conidios (1 x 105 /ml) a grupos de 10 frutos. A cinco de los
frutos se les hicieron 20 heridas por fruto y el resto se dejó
intacto. Los frutos inoculados se mantuvieron en cámara
húmeda y a temperatura ambiente (24 ± 2°C) durante una
semana, al cabo de la cual se evaluó la incidencia y severidad
de la Antracnosis, considerando cada fruto como una
repetición. En frutos con heridas, se cuantificó el número de
heridas infectadas y después se calculó el porcentaje de
severidad; en frutos sin heridas, la severidad se evaluó
mediante una escala de ocho clases, de acuerdo al método
propuesto por Horsfall y Barratt (1945), donde 1 = 0, 2 = 1.44,
3 = 2.77, 4 = 5.29, 5 = 9.85, 6 = 17.61, 7 = 29.49, y 8 = 45% de la
superficie del fruto dañada, una cara del fruto se consideró
como el 50%. Los datos generados se analizaron tanto de
manera univariada, mediante análisis de varianza y
comparación de medias por la prueba de Tukey (p = 0.05%),
como multivariada, mediante el procedimiento Manova y un
Análisis Discriminante en SAS. Estos últimos permitieron
identificar las diferencias entre los aislamientos, así como los
parámetros que originan esta variación.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los aislamientos de C. gloeosporioides mostraron
comportamientos muy diferentes con respecto a su
germinación, crecimiento, esporulación y capacidad
patogénica (Cuadro 1, Fig. 1). El aislamiento Sinaloa presentó
los valores más altos en cuanto a tasa de germinación (TG =
6.8% germinación de conidios/h), tasa de crecimiento micelial
(TCM = 6.3 mm/día), porciento de germinación (% G = 83.2) y
patogenicidad en frutos con heridas (PCH = 94%) de las seis
variantes consideradas en el estudio. En contraste, el
aislamiento Veracruz 1 presentó valores de TCM, TG, % G y
DE (densidad de esporulación) significativamente mucho más
bajos que Sinaloa, no obstante fue el aislamiento que mostró
mayor habilidad patogénica, dado que indujo un alto grado
de daño tanto en frutos con heridas (PCH = 100%) y sin
heridas (PSH = 27%). En cambio, los aislamientos de Guerrero
y Veracruz 2, aunque también destacaron por su tasa de
crecimiento micelial, de germinación y alta esporulación, su
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Cuadro 2. Coeficientes canónicos estandarizados entre clases (aislamientos de Colletotrichum gloeosporioides)
del análisis discriminante, para los parámetros de densidad de esporulación (DE), patogenicidad (severidad de
daño) en frutos de mango cv. Haden con heridas (PCH) y sin heridas (PSH), porcentaje de germinación (% G), tasa
de crecimiento micelial (TCM) y tasa de germinación (TG).
Parámetros
Funciones Discriminantes (FD)
FD1
FD2
FD3
FD4
FD5
DE
-1.133689666
-0.454207141
0.733501021
0.528264926
0.344494879
PCH
0.161154989
0.941520704
-0.276100300
0.370796376
0.156335600
PSH
-0.156935966
-0.204938449
-0.173129325
0.345474566
0.093341047
%G
1.395510445
-0.067117749
0.052848292
0.329903371
-0.466402036
TCM
-0.202526032
0.607697292
0.649592079
-0.478281642
-0.230150892
TG
1.434355220
0.149738321
-0.096425654
-0.186489055
0.458286147
enfermedad en frutos sin heridas, presentó deficiencias en
germinación y esporulación que pueden representar
desventajas para su éxito epidemiológico en campo frente a
otros aislamientos, que además de presentar características
como las observadas en el aislamiento Sinaloa, presenten
otras aptitudes parasíticas como son: período de latencia y
sobrevivencia no parasítica, que pueden ser factores
epidemiológicamente significativos en condicionar la
frecuencia, prevalencia y severidad de la Antracnosis en
mango. El comportamiento diverso que se observó entre los
distintos aislamientos de C. gloeosporioides sugiere un grado
de variabilidad elevado, que indica una gran plasticidad
genética de adaptación a diferentes condiciones. Diversos
autores también observaron una variabilidad (cultural,
morfológica y patogénica) extrema en aislamientos de C.
gloeosporioides (Simmonds, 1965), especialmente durante
su cultivo in vitro (Bailey y Jeger, 1992; Morales-García, 1996).
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