Práctica No. 3: Preparación de Medio de Cultivo Bacteriológico McConkey

Práctica No. 3:
Preparación de Medio de Cultivo Bacteriológico McConkey
Objetivo
Que el alumno se familiarice con las técnicas empleadas en Microbiología para el cultivo y
la manipulación de bacterias en condiciones de esterilidad.
Introducción
El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y
aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de muestras clínicas, de
alimentos, agua, productos lácteos y productos farmacéuticos. En este medio se aíslan y
diferencian bacilos entéricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la
lactosa.
El agar MacConkey II es una medio selectivo y diferencial para la detección de organismos
coliformes y patógenos entéricos. Actualmente existen una gran cantidad de medios
diseñados para el aislamiento, cultivo e identificación de bacterias entéricas. El artículo
base sobre el agar MacConkey, uno de los primeros que se desarrollaron, fue publicado en
1905 y contenía una descripción detallada de su composición y de los diferentes patrones
de crecimiento obtenidos. Su composición se ha modificado en numerosas ocasiones
El Agar MacConkey en su fórmula original fue utilizado para diferenciar cepas de
Salmonella typhosa de otros miembros del grupo coliforme. La fórmula fue modificada
para mejorar el crecimiento de cepas de Salmonella y Shigella y con ello también se
mejoraron las reacciones diferenciales entre los microorganismos patógenos entéricos y el
grupo coliforme. El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como
inhibidores de organismos Gram (+). Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la
lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el
cual es debido a una caída en el pH por la fermentación de la Lactosa. Las colonias que no
fermentan la lactosa (como las de S. typhi, S. paratyphi y S. disentery) permanecen
incoloras.
Actualmente existen una gran cantidad de medios diseñados para el aislamiento, cultivo e
identificación de bacterias entéricas. El artículo base sobre el agar MacConkey, uno de los
primeros que se desarrollaron, fue publicado en 1905 y contenía una descripción detallada
de su composición y de los diferentes patrones de crecimiento.
Su composición se ha modificado en numerosas ocasiones. La fórmula del agar
MacConkey II es de 1983 y se diseñó especialmente para mejorar su capacidad de inhibir el
“swarming” de Proteus spp y para alcanzar una definitiva diferenciación entre
fermentadores y no fermentadores de la Lactosa.
Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que inhiben
el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relación con otros
medios similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las
bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos.
La diferenciación de organismos entéricos se lleva a cabo con la combinación de Lactosa
con el indicador Rojo neutro. Se producen colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de
fermentar la Lactosa y colonias sin color en caso contrario.
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colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa). Salmonella,
Shigella, Pseudomonas.
colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares
precipitadas. E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa).
Materiales
1. Vaso de precipitado de 50 ml..
2. Matraz Erlenmeyer de 500 ml.
3. Agitador magnético.
4. Pizeta.
5. Cajas de Petri desechables.
6. Pipeta graduada de 10 ml.
7. Tubos de ensayo 16 x 150 mm (con rosca).
8. Espátula.
9. Par de guantes de asbesto.
10. Probeta graduada de 250 ml.
11. Gradilla.
12. Pinzas de bisección (estéril).
13. Pipeteador manual o automático.
14. Papel aluminio grueso.
15. Algodón.
16. Gasas.
17. Papel Kraft.
Reactivos
1. Agar McConkey
2. Agua Destilada
Equipos
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Autoclave.
Balanza analítica.
Placa de calentamiento con agitación.
Esterilizador.
Campana de flujo laminar.
Procedimiento
Suspender 50 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta
su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15
libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre 45-50°C y vaciar en
placas de Petri estériles.
Preguntas
1.
2.
3.
4.
5.
6.
El medio de cultivo que hemos preparado, ¿es un medio definido o indefinido?
¿Qué elementos nutritivos contiene este medio?
¿Por qué crees que en él pueden crecer todo tipo de bacterias?
¿Por qué es necesario ajustar el pH del medio?
¿Para qué se añade el agar-agar?
¿Qué cualidades tiene esta sustancia?