BD MacConkey Agar without Salt
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INSTRUCCIONES DE USO – MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR PA-256009.01 Rev.: Abr 2013 BD MacConkey Agar without Salt USO PREVISTO BD MacConkey Agar without Salt (agar MacConkey sin sal) es un medio de diferenciación para el aislamiento de Enterobacteriaceae, estafilococos y enterococos a partir de muestras clínicas tales como la orina. PRINCIPIOS Y EXPLICACIÓN DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. El agar MacConkey común, tal como BD MacConkey II Agar, se utiliza para el aislamiento selectivo de Enterobacteriaceae y determinados organismos no fermentadores1,2. La inhibición de bacterias gram positivas se debe principalmente a la presencia de cristal violeta. En comparación con el agar MacConkey común, BD MacConkey Agar without Salt no inhibe bacterias gram positivas tales como los enterococos y los estafilococos, dado que no contienen cristal violeta2. En BD MacConkey Agar without Salt, las peptonas proporcionan los nutrientes. Las sales biliares actúan como inhibidores suaves de las bacterias no intestinales y contribuyen a inhibir la proliferación de Proteus. La lactosa junto con el rojo neutro conforman el sistema indicador para la fermentación de lactosa. En ambos medios, se producen colonias incoloras o de color naranja o rosa, según la capacidad de la cepa aislada para fermentar lactosa. Se obtiene una mejor inhibición de la proliferación de Proteus debido a la ausencia de sal. Por tanto, este medio se recomienda especialmente para el análisis bacteriológico cuantitativo de orina. REACTIVOS Fórmulas* por litro de agua purificada Peptonas 20,0 g Lactosa 10,0 Sales biliares 5,0 Rojo neutro 0,075 Agar 12,0 pH 7,4 ± 0,2 *Ajustada y/o complementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PRECAUCIONES . Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y eliminación del producto en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA ÚTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 a 8 °C en su envase original hasta justo antes de su uso. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e incubarse durante los tiempos de incubación recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10 unidades almacenadas en un área limpia a una temperatura de 2 a 8 °C pueden utilizarse durante una semana. PA-256009.01 -1- CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener más datos, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar en atmósfera aerobia a 35 a 37 °C durante 18 a 14 horas. No incubar en atmósfera enriquecida con dióxido de carbono. Cepas Escherichia coli ATCC 25922 Proteus mirabilis ATCC 12453 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Shigella flexneri ATCC 12022 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Sin inocular Crecimiento Colonias de color rosa a rojo; posiblemente rodeadas de zonas de precipitación biliar, medio de rosa a rojo Colonias de color marrón claro; inhibición de la proliferación; medio de amarillo a naranja Colonias de color marrón claro, medio de amarillo a naranja Colonias de color marrón claro; medio naranja Colonias pequeñas y rojizas Colonias rosadas de pequeñas a medianas Naranja rojizo, ligeramente opalescente PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD MacConkey Agar Without Salt, suministrado en placas Stacker de 90 mm. Con control microbiológico. Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliares, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras BD MacConkey Agar Without Salt puede utilizarse para todos los tipos de muestras clínicas. Sin embargo, se utiliza principalmente para análisis de orina (véase también CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Se puede utilizar la orina de la parte media de la micción, de la sonda o recogida mediante punción vesical suprapúbica. Emplear técnicas asépticas al recoger las muestras urinarias. Es preciso realizar una siembra en estrías de la orina directamente en el medio (no más tarde de las 2 horas siguientes a la recogida de la muestra) o bien refrigerarla (durante menos de 24 horas) para evitar el crecimiento excesivo de los agentes infecciosos o contaminantes previamente a la inoculación del medio. Procedimiento de análisis Recoger con un asa calibrada (0,01 o 0,001 mL) una muestra de orina no diluida, adecuadamente mezclada. Comprobar que el asa se cargue correctamente. Inocular la muestra en el centro de la placa en una única siembra en estrías a partir de la cual se efectúa la dispersión del inóculo. 6-9. Si en estos medios se cultivan muestras diferentes de orina, realizar una siembra en estrías para su aislamiento. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde; realizar luego la siembra en estrías a partir de este área inoculada. Todas las muestras también deben cultivarse en una placa de agar sangre, tal como BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood, para detectar colonias aisladas exigentes que tal vez no crezcan en BD MacConkey Agar Without Salt. Incubar la placa de agar sangre en una atmósfera aerobia enriquecida con CO2 e incubar el medio de agar MacConkey en aire ambiente a una temperatura de 35 a 37 °C durante 24 a 48 horas. Resultados Después de la incubación, los organismos fermentadores de lactosa tales como E. coli aparecerán de color rosado o de rosa a rojo y pueden estar rodeados de una precipitación biliar turbia y rosada. Los organismos no fermentadores de lactosa tales como Proteus spp. serán PA-256009.01 -2- incoloros. Los organismos no fermentadores de lactosa pueden cambiar el color del medio a beige amarillento, mientras que la coloración naranja rojiza cambia a rosa con el crecimiento de los organismos fermentadores de lactosa. Los estafilococos en ambos medios producen colonias de rosa pálido a rosado, mientras que los enterococos producen colonias pequeñas de color rojo. Se requieren más pruebas bioquímicas para la identificación final de las cepas aisladas. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO BD MacConkey Agar Without Salt es adecuado para el aislamiento de numerosos microorganismos de crecimiento aerobio, tales como Enterobacteriaceae, Pseudomonas y otros bacilos gram negativos no fermentadores, enterococos, estafilococos y muchos otros organismos aislados de la orina o de otras muestras clínicas y materiales no clínicos tales como alimentos2-6. Es posible que los estreptococos y otros organismos que precisan sangre o suero para su crecimiento no crezcan o no sean recuperados suficientemente en este medio. Por tanto, si se espera hallar tales organismos, se debe cultivar la muestra también en una placa de agar sangre o chocolate. Los patógenos genitourinarios, como Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia, Ureaplasma y otros organismos exigentes, no crecen en este medio. Consultar las referencias para conocer las técnicas de detección adecuadas para estos organismos7-9. Aunque en este medio puede efectuarse la diferenciación conforme a la fermentación de lactosa y determinadas pruebas de diagnóstico, se precisa el análisis bioquímico y, en caso indicado, inmunológico empleando cultivos puros para lograr la identificación completa. Se ha notificado que la incubación de las placas de agar MacConkey en atmósfera con CO2 aumentado reduce el crecimiento y la recuperación de un número de cepas de bacilos gram negativos10. Se requieren pruebas bioquímicas y/o serológicas adicionales para identificar las cepas aisladas obtenidas en estos medios. REFERENCIAS 1. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in feces. J. Hyg. 5:333-379. 2. MacFaddin, 1985. Media for the isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria: Williams and Wilkins, Baltimore. 3. Hitchins, A. D., P. A. Hartman, and E. C. D. Todd. 1992. Coliforms-Escherichia coli and its Toxins, p. 325-369. In C. Vanderzant, and D. F. Splittstoesser (ed.), Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health Association, Washington. D.C. 4. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8th ed. AOAC International. Gaithersburg, MD. 5. WHO. 1963. International Standards for Drinking Waters, 7th ed., Churchill Ltd. London. 6. DGHM. 1983. Verfahrensrichtlinien für die mikrobiologische Diagnostik, chapter 2.1. Fischer Verlag, Stuttgart, Germany. 7. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Mazura-Reetz, G. T. Neblett, and J. M. Galperin. 1979. MacConkey Agar: CO2 vs. ambient incubation. Abst. Ann. Mtg. American Society for Microbiology. C179. PA-256009.01 -3- ENVASE/DISPONIBILIDAD BD MacConkey Agar Without Salt Nº de cat. 256009 Medios en placa listos para usar, 20 placas Nº de cat. 257286 Medios en placa listos para usar, 120 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, póngase en contacto con su representante local de BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 [email protected] http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. PA-256009.01 -4- © 2013 BD
