DNA recombinante

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DNA recombinante
La tecnología de DNA recombinante genera
herramientas para estudiar los genes y sus productos
Insertar en
vector de
expresión
Deducir
secuencia de
aminoácidos
Secuencia de
aminoácidos
Transformar
E. coli u otro
hospedero
Preparar
péptidos
sintéticos
Sintetizar
sonda
específica
Anticuerpo específico
Preparar anticuerpos
específicos para una
proteína
Escrutinio de una
biblioteca de DNA
por Southern blot
Escrutinio de una
biblioteca de
expresión por
Western blot
Plásmidos de expresión
Caracteristicas adicionales:
-  Promotor regulable
-  Terminador de la transcripcion
-  Sitio de reconocimiento por el ribosoma
Transformacion en celulas eucariontes
Biobalística
Transformación directa
Microinyección
Virus
Clonación en células animales
Métodos de transfección
Permeabilización química de las membranas
Electroporación
Liposomas
Vectores
Vectores derivados de virus animales
SV40
Retrovirus
Vacuna
Vectores mixtos
Métodos de selección
Detección de actividades enzimáticas
Resistencia a inhibidores
Resistencia a antibióticos
Integración dirigida
Vectores de expresión para células animales
Promotor
inducible para
animales
Construcción de Reporteros
5’UTR X
Promotor del gen X
3’UTR X
Gen reportero
El resto de características de los vectores de expresión son similares
Proteínas reporteras
Proteína verde
fluorescente
(GFP)
Betaglucoronidasa
(GUS)
Luciferasa de
luciérnaga
(LUC)
Creando ratones Knockout
Bancos de mutantes en los organismos modelos
Transformación de células vegetales
Agrobacterium tumefaciens
Transformación mediada por Agrobacterium
tumefaciens
Transformación por biobalística
¡ Suerte en el examen !
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