La variación del volumen celular bajo diferentes concentraciones de

Revista Colombiana de Anestesiología
ISSN: 0120-3347
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Sociedad Colombiana de Anestesiología y
Reanimación
Colombia
García, Mario J.; Ardila, Angel M
La variación del volumen celular bajo diferentes concentraciones de solución salina (NaCL)
Revista Colombiana de Anestesiología, vol. 37, núm. 2, mayo-julio, 2009, pp. 106-109
Sociedad Colombiana de Anestesiología y Reanimación
Bogotá, Colombia
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Rev. Col. Anest. Mayo-Julio 2009. Vol. 37- No. 2: 101-109
La variación del volumen celular bajo diferentes
concentraciones de solución salina (NaCL)
Introducción
Metodología
Es bien conocido que el hematocrito describe la
fracción de células dentro una muestra completa de
sangre. En solución isotónica—o la solución salina
normal—el volumen celular tiende a permanecer
constante a pesar de la partícula permanente y el
flujo de agua existente entre las áreas intra y extracelulares. En soluciones hipertónicas cierta cantidad de agua fluye de la célula, así disminuyendo el
volumen celular hasta que se logra un balance entre
las presiones osmóticas extra e intracelulares. Por
otra parte, y dentro de las soluciones hipotónicas,
la célula recibe un fluido de la región extracelular,
causando un aumento en el volumen celular hasta
que se equilibran las presiones osmóticas, tal como
se observó en el caso anterior1-3.
El presente proyecto obtuvo la aprobación requerida de parte del ente revisor institucional y se
llevó acabo de conformidad con la Declaración de
Helsinki. La totalidad de los 12 partici­pantes ofrecieron registrarse voluntariamente en la investigación.
Todos firmaron un consentimiento prestado con
un conocimiento completo acerca de la naturaleza y objetivo del estudio, incluyendo los riesgos a
considerar.
Dentro de la práctica clínica, se usan varios tipos
de soluciones biocompatibles. 0.9% de NaCl es la
solución (NaCl) que más se acerca a la isotónica.
Sin embargo, no es inusual utilizar soluciones de
NaCl que incluyan concentraciones de nivel hipoosmolar (0.45%) a nivel hiper-osmolar (7.5%). En la
literatura médica, existen algunos informes sobre el
uso de soluciones NaCl hasta un 23.4%4-6.
El impacto hemodinámico atribuido a soluciones
hipotónicas se deriva del rescate de líquido que va
del espacio intracelular hacia el espacio intravascular. Esta conclusión clínica esta soportada por
múltiples estudios que enfatizan los efectos hemodinámicos de soluciones hipertónicas7-9.
Aunque el uso de soluciones hipertónicas va cada
vez en aumento, particularmente en la neurocirugía y el
trauma, existe poca investigación acerca del comportamiento volumétrico de las células cuando están sometidas a concentraciones cada vez mayores de NaCl.
En el presente trabajo experimental, las muestras
de sangre de personas saludables estuvieron sometidas bajo diferentes concentraciones de NaCl, desde
0.42% hasta 11.7% y el hematocrito fue cuantificado
posteriormente en un momento dado. El hematocrito cuantificado –obtenido dentro de las muestras
que se mezclaron con las diferentes concentraciones
de NaCl– fue comparado con el hematocrito basal
(sangre sin mezclar). Luego se determinó el grado
de variación resultante de cada concentración de
NaCl utilizada.
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Muestras de 20 cm3 de sangre fueron tomadas de
personas para luego ser anti-coaguladas con 1000
unidades de heparina. Por otro lado, se prepararon
tubos de ensayo con NaCl de diferentes concentraciones mediante soluciones comerciales de agua
destilada, de 0.9% NaCl a 11.7% NaCl. 1 cm3 de
sangre completa fue mezclada con 1 cm3 de cada
concentración de NaCl preparada. Las muestras fueron entonces colocadas en tubos micro-hematocritos
y luego puestas en un centrifugador por 10 minutos
a 10.000 RPM.
En cada tubo micro-hematocrito el volumen de
la sangre completa y el volumen celular fueron medidos en términos de lo largo en la correspondiente
columna. Los resultados fueron tabulados estadísticamente y procesados. Finalmente, establecimos 53
asambleas [conjuntos] de 18 micro-hematocritos, lo
cual incluyó los micro-hematocritos base (sangre sin
diluir) junto con 17 muestras de micro-hematocritos
adicionales diluidas en las diferentes concentraciones de solución salina.
Con base en los datos obtenidos se compararon las muestras de hematocritos –o sea, las que
fueron diluidas con diferentes concentraciones de
NaCl– con el correspondiente hematocrito base
(muestras sin diluir) mediante la relación Hematocrito/ (Basal/2). Fue necesario compararlo contra
Basal/2 pues al diluirse la muestra de sangre con
NaCl, la relación fue de 1:1. Esto quiere decir que
sólo debido a la dilución, el hematocrito cayó a la
mitad de su valor real. Cualquier variación adicional obedece al equilibrio osmótico con la solución
salina utilizada.
Resultados
Se cuantificó el volumen total (VT) y el volumen
globular (VG) de cada muestra. Tal como se afirmó
Cell volume variation under different concentrations of saline solution - García, J.M., Ardila A.M.
Rev. Col. Anest. Mayo-Julio 2009. Vol. 37- No. 2: 101-109
anteriormente, la relación VG/VT (hematocrito) fue
comparada con la correspondiente mitad del hematocrito basal mediante la ecuación Hematocrito/
(Basal/2). Vale la pena recalcar que se compara
contra la mitad del hematocrito basal debido a que
toda concentración diferente de NaCl hace que la
concentración celular caiga a la mitad de ello sin
considerar los efectos hipotónicos o hipertónicos de la
solución. Como se puede esperar, esta ecuación –Hematocrito/(Basal/2)– indicó la variación del volumen
celular dada por la tonicidad de la solución NaCl.
La Tabla 1 muestra el cálculo efectuado con
nueve de las 17 concentraciones estudiadas y con
cinco de las 53 asambleas. Estas cinco asambleas
corresponden a uno de los 12 voluntarios que gozan de buena salud. Por tanto, por cada voluntario
saludable, obtuvimos una relación promedio por
estudiante de hematocrito/(basal/2) junto con su
incertidumbre. Esta incertidumbre incluye la incertidumbre instrumental y la aleatoria. Más tarde,
los promedios obtenidos por cada individuo con su
respectiva incertidumbre fueron manejados estadísticamente como muestras independientes con
diferentes variaciones. A partir de estos datos se
elaboró la Tabla 2.
La Ilustración 1 muestra la relación de la ecuación Hematocrito/(Basal/2) versus la concentración
de NaCl, una vez procesados los datos. La relación
que se observa indica el aumento o disminución
en el volumen celular como un índice del volumen
base.
La ilustración 1 es muy notable pues las últimas
cinco que se diluyeron –o sea, la correspondiente
mezcla de sangre con 7.02%, 8.19%, 9.36%, 10.53 y
11.70% de solución NaCl– presentaron un importante incremento en el volumen celular con respecto al
nivel más alto en términos contracción volumétrica
obtenida cuando la mezcla de sangre se realizó utilizando concentraciones de NaCl cerca de 5%.
Al inspeccionarse la calidad de plasma en los
tubos de micro-hematocrito correspondientes a lo
diluido, ello presentó un colorido rojizo derivado my
probablemente de la hemoglobina liberada al plasma por medio de los glóbulos rojos. Esto se puede
observar claramente en la Ilustración 2.
Es evidente que el aumento en la liberación de
hemoglobina con soluciones NaCl es igual o mayor
a 7.02%. Para algunas de las 53 muestras estudiadas, aun se presentaron puntos pequeños de
hemoglobina libre cuando la concentración de NaCl
fue de 5.85% pero en ningún caso se demostró este
resultado con soluciones hipertónicas de NaCl menos que o igual a 4.68%.
Otro resultado extraordinario que se desprende
de la Ilustración 1, es que la curva de contracción
volumétrica de las células rojas se torna plana al
estar bajo concentraciones cada vez mayores de
NaCl, pues se da cuando la solución utilizada llega
a niveles entre 5% y 6%. Todo lo cual nos indica que
el argumento de rescatar mas volumen del espacio
intracelular mediante la colocación de solución
hipertónica adicional pierde peso y, por ende, no
parece justificarse.
Al tomar en cuenta los resultados que se han
descrito, según lo cual la concentración de NaCl de
igual o mayor al 7.02% provocará un aumento en el
volumen celular (cuando se compara con el efecto
observado con soluciones de menor concentración)
y una liberación de hemoglobina proveniente de las
células rojas, nos permite suponer de manera razonable que este nivel de solución NaCl hipertónica
puede causar daños celulares.
Tomando en cuenta que las últimas cinco diluciones mostraron características de lesión celular, nos dimos en la tarea de buscar un modelo
matemático de análisis de regresión por el método
de mínimos cuadrados (least squares) omitiendo
estas últimas cinco diluciones. Este modelo nos
permite predecir la variación del volumen celular
según la concentración de NaCl en la cual la célula
es viable.
Este modelo matemático resuelve la ecuación:
1.
ΔV corresponde a la variación del volumen
celular y C a la concentración de NaCl utilizada.
Esta función presenta un coeficiente de regresión
lineal de 0.996 y un nivel de confianza superior a
99.5% cuando se aplica al Chi-square goodness of
fit test10-12. En la Ilustración 3, se puede observar la
relación bien estrecha de la regresión lineal al gráfico log-log. Esta función se puede resumir en una
sencilla ecuación: ∆V =
4
1
lo cual mantiene el nivel
C
de confianza, según se demostró anteriormente.
discusión
Según la literatura médica, el uso de soluciones
provenientes de diferentes concentraciones de NaCl
usualmente se reporta2-9 y suponiendo que existen
estudios farmacológicos que apoyan la solución
isotónica ubicada cerca de 0.9%, no encontramos
un solo estudio acerca de concentraciones que describa el comportamiento del volumen celular bajo
diferentes concentraciones de NaCl.
La variación del volumen celular bajo diferentes concentraciones de solución salina - García, J.M., Ardila A.M.
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Por el contrario, sí existen varios estudios en
que se administran altas concentraciones de NaClarticularmente en una lesión cerebral traumática,
muchos de ellos arrojando resultados diversos y
frecuentemente utilizando soluciones salinas de
7.5%13-15.
No es razonable dudar sobre el impacto hemodinámico que se deriva del uso de hipertónicos con
soluciones salinas hasta un 7.5%. Varios estudios
con animales también confirman incuestionablemente ésta consideración 16-18. Sin embargo, y
no obstante los resultados de esta investigación,
valdría la pena hacer el esfuerzo y considerar las
posibles consecuencias que podrían traer las concentraciones de NaCl en producir no sólo hemólisis
sino también la disfunción celular sin un beneficio
adicional frente al obtenido con soluciones de cerca
de 4.5%.
Por otra parte, la curva volumétrica que se deriva
de la relación existente entre la variación en el volumen celular y la concentración de NaCl empleada
llega a su máximo nivel (contracción máxima en
el volumen celular) cuando la solución de NaCl se
acerca al 5%. Por tanto, no es razonable emplear
soluciones salinas de mayor concentración que de
5-6%, si el fin es disminuir el volumen intracelular o en rescatar liquido del espacio intracelular e
intersticial.
La contracción celular más alta observada en este
estudio fue alrededor de 35%, o sea que el volumen
celular declinó fuertemente para ubicarse en el 65%
frente a su volumen base. Esto sucedió cuando el
5.85% de NaCl fue utilizada. Sin embargo, se observaron algunos puntos de hemoglobina en plasma en
algunas asambleas diferentes a las que emplearon
esta solución. Esto no ocurrió en ninguna de las 53
asambleas hechas con NaCl hasta un 4.68%.
Es razonable suponer que en vivo nunca utilizaríamos tal cantidad de NaCl hipertónico, ya que
podríamos inducir una dilución de 1:1 (al evaluar in
vitro). Sin embargo, el equilibrio osmótico se da muy
rápidamente, pues solo toma milisegundos y pequeñas cantidades de NaCl hipertónicas para causar
una lesión celular. No existen estudios sobre la
medición de los niveles de hemoglobina en plasma,
luego de administrarse importantes cantidades de
salina hipertónica.
En resumen, se definió el comportamiento del
volumen celular bajo diferentes concentracioines
de NaCl. Este experimento demostró un importante
grado de hemólisis al someter las muestras de sangre ante concentraciones de NaCl igual o mayores
a 7.02%. No se presentó este efecto en soluciones
salinas entre el 0.41% y 4.68%.
Se encontró que la ecuación 1 permite la predicción teórica sobre la variación en el volumen
celular, como función de la concentración NaCl en
ese dominio de la función, y que no muestra lesión
celular.
Finalmente, es importante comentar que esta es
una prueba experimental. No es possible pretender
que se apliquen estos resultados en las prácticas
clínicas sin tomar consideraciones adicionales.
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