kit de conteo para cd4% - Annar Diagnóstica Import

KIT DE CONTEO PARA CD4%
Nombre del Producto:
Kit de conteo para porcentaje de CD4%
Código N º
05-8404
Contenido
El paquete contiene reactivos para 100 pruebas:
• 100 ml de Buffer 1
• 100 ml de Buffer 2
• 1000 µl CD4 mAb PE (MEM-241, anticuerpo monoclonal conjugados
de PE para CD4 humano)
• 1000 µl CD45 mAb FITC (MEM-28, anticuerpo monoclonal
conjugados de FITC para CD45 humano)
Información General: Los pacientes con SIDA presentan
linfopenia de células T, pérdida de linfocitos CD4+ y un aumento
relativo de subtipo CD8+ y subtipos CD3+ CD4-CD8-. El uso del
umbral de 200 células T CD4+ por µl de sangre para el inicio de una
terapia antirretroviral (TAR) en pacientes adultos pueden no ser
apropiados para los niños ya que el recuento de células CD4 en los
lactantes es significativamente más elevado que el de los adultos.
Por lo tanto, se debe realizar una medición del porcentaje de CD4 en
pacientes pediátricos con el fin de proporcionar una terapia
antirretroviral controlada y confiable, así como la supervisión de los
pacientes.
Distribución de Antígeno y Especificidad: El anticuerpo
monoclonal MEM-241 reconoce el antígeno humano CD4,
glicoproteina transmembrana de la familia de inmunoglobulinas,
presente en un subgrupo de linfocitos T y también expresada en
niveles bajos de monocitos, macrófagos en tejidos y granulocitos.
Aproximadamente un 60 a 90 % de las células mononucleares de la
sangre así como una subpoblación de monocitos con una señal más
leve, se encuentran teñidos. El anticuerpo se estudió en el 8° Taller
Internacional Diferenciación de Moléculas Celulares Humanas. CD4
es el receptor celular primario para el virus de inmunodeficiencia
humana VIH.
El anticuerpo monoclonal HI-28 reacciona con todas las formas
alternativas de antígenos humanos CD45 (Antígeno común de
leucocitos), una proteína transmembrana tipo I de cadena simple de
180-220 kDa expresada en el alto nivel de todas las células de
origen hematopoietico, salvo los eritrocitos y plaquetas. El
anticuerpo se ha agrupado a las células CD45 en el 3er Taller
Internacional sobre Diferenciación de Antígenos Leucocitos
Humanos.
Clon
Isotipos
CD4 mAb PE
CD45 mAb FITC
MEM-28
MEM-241
CD4 mAbPE
CD45 mAb FITC
IgG1 monoclonal
IgG1 monoclonal
Aplicaciones:
• Identificación y enumeración de subgrupos de linfocitos ayudantes
/ inductores de CD4+ así como de las células CD45+ de linaje
hemopoietico.
• Determinación del porcentaje de células T CD4+ en relación con
todos los linfocitos
• Estudios de infección del VIH. Pacientes infectados con VIH
liberan linfocitos ayudantes / inductores CD4+ y simultáneamente
aumentan las células T CD8+.
• Caracterización de los subtipos de leucemias y linfomas de células
T
• Para uso de diagnóstico in vitro
Método:
• Añada 20 µl de sangre (EDTA como anticoagulante) a un tubo de
ensayo Partec.
• Añada 10 µl de CD4 mAb PE y 10 µl de CD45 mAb FITC.
Mezcle suavemente e incube durante 15 minutos a temperatura
ambiente, protegido de la luz.
• Añada 400 µl de Buffer 1 y agite suavemente
• Directamente antes de la medición añada 400 µl de Buffer 2 y
analice de inmediato (en 10 minutos)
• Analice la muestra de sangre en un dispositivo CyFlow Partec.
•
•
•
Micropipetas y puntas de pipetas (Código 3112000.029 y
3111000.0165)
Guantes de latex
Sistema de recolección intravenosa con EDTA como
anticoagulante
Manipulación y Almacenaje: PE mAb CD4 y FITC mAb CD45 se
proporciona en 1 ml de solución salina de buffer fosfatado (PBS)
con pH 7.4, con contenido de BSA y azida de sodio a 0.09%,
suficiente para 100 pruebas. 10 µl de PE mAb CD4 y 10 µl de FITC
mAb CD45 son suficientes para etiquetar 1x106 células. Durante el
almacenaje a temperatura de 2 a 8°C en al oscuridad, el kit de
conteo de porcentaje de CD4 es estable hasta la fecha de expiración
impresa en la etiqueta. No congele o exponga a altas temperaturas.
Precauciones y advertencias: Los reactivos contienen 0.09% de
azida de sodio la cual bajo condiciones acidas produce acido
hidrazoico, un componente explosivo,. La azida de sodio puede
reaccionar con el plomo y el cobre formando un metal altamente
explosivo de azidos. En el momento de desechar la azida de sodio,
lave la tubería del instrumento con una gran cantidad de agua para
prevenir acumulación. Si se presenta contacto con la piel, enjuague
inmediatamente con abundante agua.
Población
celular
Comentario
Polígono R1
Concentración
(muestra de
sangre diluida)
27,390 células/ml
Concentración
(Muestra de
sangre pura)
1150 células /µl
Celulas T CD4+
LInfocitos
Leucocitos
Conteo
porentaje de
CD4+
Polígono R2
Rango RN1
R1/R2
53.760 células /ml
153,585 células /ml
50.9%
2258 células /µl
6151 células /µl
50.9%
Ejemplo de un resultado de conteo directo de porcentaje de CD4
utilizando el kit de conteo - visualización de CyFlow® SL Partec.
Con el análisis de 2 colores de CD4/CD45, el número absoluto de
leucocitos, linfocitos y linfocitos T CD4+ se visualiza en la gama
RN1 y los polígonos R2 y R1; éstos son usados con el fin de
calcular el conteo del porcentaje de CD4 como se muestra en la
gráfica.
Análisis de flujo citométricos: La fluorescencia de CD4-PE y
CD45-FITC puede ser analizada en un Citómetro de Flujo Partec
con una fuente de luz de 488 nm (láser de estado solidó azul). Para
contar las células T CD4+ y las células CD45+ transfiera el tubo de
ensayo con 840 µl con la muestra de sangre preparada en el
Citómetro de Flujo y realice un análisis de conteo. Para información
mas detallada acerca de la manipulación y calibración del
instrumento favor refiérase a los manuales de operación y a las notas
de aplicación.
La preparación de la sangre permite un procedimiento de conteo en
la muestra. Al seguir el anterior procedimiento el factor de dilución
es de 42. En el Contador CyFlow® este factor de dilución se
encuentra programado o puede ser configurado directamente por el
operario en el software del instrumento. Los resultados de conteo se
presentarán automáticamente como células T CD4 por µl de sangre
y como el porcentaje de células CD4+ en relación a todos los
linfocitos.
Materiales requeridos y recomendados
•
Citómetro de Flujo Partec (CyFlow®)
•
Tubos de ensayo Partec (Código No. 04-2000)
Puede ser dañoso si se ingiere. El contacto con ácidos libera un gas
toxico. Manténgase fuera del alcance de los niños. Mantenga lejos
de alimentos, bebidas y alimentos para animales. Utilice ropa de
protección adecuada. En caso de ingerir, acuda inmediatamente a un
médico y presente el envase o la etiqueta de este producto.
Manipule todos los especimenes y materiales como material
potencialmente contagioso. Descontamine con hipoclorito de sodio
al 0.05%. Este producto debe ser manipulado por personal
calificado. Los reactivos no son estériles. No es de uso en humanos.
Únicamente para uso de diagnostico in Vitro.
Referencias