Práctica 11 Microorganismos Asociados a Micetomas y Parásitos Intracelulares Obligados Introducción: Los micetomas constituyen una entidad clínica causada por diversas especies de microorganismos, incluyendo bacterias (micetoma actinomicótico) y hongos (micetoma eumicótico), por lo que es importante distinguir ambos grupos con objeto de obtener el dx y por ende el tratamiento adecuado. El término micetoma corresponde a un tipo de lesiones inflamatorias, deformantes, endurecidas, tumoriformes, indoloras, que involucran piel, tejidos subcutáneos y huesos, aunque usualmente hay una diseminación sistémica. El exudado purulento presente en las lesiones contiene “gránulos” microscópicos (microcolonias o conglomerado de filamentos) cuyo tamaño, color y textura varía de acuerdo al agente etiológico. El micetoma eumicótico es causado por hongos de las clases Ascomycetes y Deuteromycetes, mientras que el micetoma actinomicótico es causado por bacterias de los géneros Actinomyces, Nocardia, Actinomadura y Streptomyces. De estos últimos son los dos primeros los que mayor importancia presentan en la Medicina Veterinaria. Actinomyces Características generales: Son m.o. anaerobios y aerobios facultativos, no móviles, no poseen cápsula y no forman esporas. Las bacterias pertenecientes a este género son bacilos pleomórficos Gram + , que generalmente se observan como largos filamentos ramificados. A esta morfología y agrupación que recuerda a la de los hongos se le denomina “pseudomicelio”. Especies importantes: -A. bovis -A. viscosus -A. pyogenes -A. suis Requerimientos para cultivo in vitro: Los actinomices son nutricionalmente exigentes y requieren de medios enriquecidos para su desarrollo. Medios de cultivo: - Agar infusión cerebro corazón - Agar sangre - Caldo tioglicolato Los cultivos pueden ser incubados a 37ºC en condiciones de microaerobiosis, sin embargo el crecimiento se ve favorecido en condiciones de anaerobiosis. Actinomyces ssp, en agar sangre forman colonias pequeñas, lisas, brillantes, convexas y no hemolíticas después de 4 a 6 días de incubación. Nocardia Características generales: Son m.o aerobios estrictos, no móviles, no poseen cápsula y no forman esporas. Con base en la composición de su pared celular, el génreo Nocardia está relacionado con los géneros Corynebacterium y Mycobacterium (grupo CNM). Las nocardias son bacterias que forman pseudomicelios con tendencia a fragmentarse en formas bacilares y cocoides. Son Gram + y parcialmente ácido resistentes, lo que también puede demostrarse con la tinción de Kinyoun. Especies importantes: -N. Asteroides Requerimientos para cultivo in vitro: Las nocaridas crecen con facilidad en la mayoría de los medios de cultivo de uso general. Medios de cultivo: Agar de Sabouraud Dextrosa Agar tripticasa soya Agar sangre Las nocardias son de crecimiento lento y las colonias sólo son aparentes hasta después de 49 a 72 hrs de incubación a temperatura ambiente o a 37ºC. En agar sangre éstas son en un principio pequeñas y secas, con el tiempo se vuelven rugosas, yesosas y toman una coloracón que va del blanco al amarillo naranja. II. PARASITOS INTRACELULARES OBLIGADOS Los géneros bacterianos que pueden llevar al término su ciclo biológico únicamente dentro de cells eucariotas contituyendo, por lo tanto parásitos intracelulares obligados, comprenden a los órdenes Chlamydiales y Ricketsiales. Para el MVZ son de mayor importancia dentro de la primera el género Chlamydia y en la segunda familia los géneros: Coxiella, Erhlichia, Anaplasma, Haemobartonella, Neorickettsia y Eperythrozoon, debido a los cuadros patológicos en los animales domésticos a los cuales se asocian. Chlamydia Características generales: Microorganismos anaerobios, Gram -, que presentan un ciclo de desarrollo característicos, el cual involucra una forma infecciosa extracelular (cuerpo elemental) y una forma de multiplicación intracelular (cuerpo reticular). La forma extracelular es de forma esférica con un tamaño de 0.25 um. A pesar de que se consideran Gram – para su observación se utiliza la tinción Jiménez con la que los cuerpos elementales se observan como cocos muy pequeños de color rojo sin agrupación definida. La fase intracelular de las clamidias está representada por microcolonias constituidas por cuerpos elementales, cuerpos reticulados y formas intermedias. Su observación se lleva a cabo utilizando la tinción de Giemsa; en este caso se observan inculisiones basofílicas (morado) características en el citoplasma de las cells infectadas. Especies importantes: -C. psttaci Requerimientos para cultivo in vitro: El cultivo in vitro de estos m.o requiere entonces de sistemas biológicos, tales como animales de laboratorio (embriones de pollo, cuyes, ratones) o cultivo de tejidos (cultivo celular), y es solamente mediante su utilización como pueden llegar a aislarse en el laboratorio.