OBSERVACIÓN Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS BUCALES

OBSERVACIÓN EN FRESCO Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS BUCALES
Objetivo
El alumno aplicará los conocimientos obtenidos en el curso para identificar los
microorganismos que habitan en la microbiota bucal.
Generalidades
La identificación de bacterias es un trabajo un tanto detectivesco en el cual se deben
reunir todas las características que se puedan obtener en el laboratorio como morfología
colonial en medios selectivos o de uso general, morfología microscópica y coloración de
Gram, etc.
La composición de la microbiota bucal varía desde el nacimiento y durante toda la vida
influenciada por el desarrollo de la biopelícula dental, primero por la adherencia
microbiana mediada por distintos mecanismos; a la adhesión de los primeros
colonizadores le siguen fenómenos de coagregación, lo que constituye el denominado
"mosaico de microorganismos", el cual varía de acuerdo con las propiedades biológicas y
físicas del sitio.
El conocimiento de la ecología de la cavidad bucal permite determinar el proceso que
involucra, fundamentalmente, la etiopatogenia de la caries dental y por consecuencia, su
prevención: también contribuye a identificar las complicaciones sistémicas por la
microbiota bucal.
MATERIAL Y EQUIPO
3 portaobjetos
1 cubreobjetos
1 tubo de ensaye de 13 X 100 con tapón de rosca con solución salina estéril
1 placa agar nutritivo
1 placa agar EMB
1 placa agar sal y manitol
1 placa agar MacConkey
Hisopos estériles
Puente de tinción
Cristal violeta
Yodo de Gram o lugol
Etanol al 95% o alcohol acetona
safranina
aceite de inmersión
Mechero
Microscopios
TÉCNICA
1. Tomar una muestra de alrededor de los dientes incluyendo las encías con un hisopo
estéril, sembrar en las placas de agar nutritivo, EMB, MacConkey y sal y manitol. Incubar a
36° C por 24 horas. Anotar resultados y observaciones.
2. Con el otro hisopo tomar nuevamente muestra y realizar 2 extendidos e introducir el
hisopo en el tubo con sol. salina estéril.
3. Los extendidos secarlos con ayuda del mechero y proceder a teñir como indica la
técnica de Gram.
4. Observar al microscopio con objetivo de 100 X.
5. Tomar una muestra con el hisopo en solución salina, colocarla en el portaobjetos y
cubrir. Observar en 40 X.
PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
1. Investigar los microorganismos de la microbiota bucal, así como las características
morfológicas en cada medio y microscópicas tintoreales.
2. Anotar resultados y observaciones de las extensiones y de crecimiento en las placas de
agar, obtenidas en la práctica.
3. Anotar los géneros que crecieron en cada placa.