Valores normales de aminoácidos en suero

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2000
Valores normales
de aminoácidos en suero
Martinez, Cintia E. - Sarno, María C. - Delfino, Mario R.
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura - UNNE.
Av. Libertad 5460 - (3400) Corrientes - Argentina.
E-mail: [email protected]
ANTECEDENTES
La determinación de aminoácidos plasmáticos es una práctica poco habitual en los laboratorios de análisis
clínicos. Sin embargo, se conocen distintas patologías que manifiestan cambios en los niveles normales de
estos compuestos, dentro de las cuales merecen ser mencionadas diversas hepatopatías incluyendo la necrosis
aguda, cirrosis congénita, enfermedad de Wilson y galactosemia. Son estas situaciones donde la
cuantificación de aminoácidos brinda un valor significativo tanto en el diagnóstico, como en el control del
tratamiento.
Existen en la bibliografía valores de referencia para los distintos aminoácidos en plasma, pero dado que los
analizadores automáticos usados en química clínica operan generalmente con suero, resulta conveniente
establecer una técnica analítica adaptada a esta matriz, que posibilite su inclusión dentro de las prácticas de
rutina de todo laboratorio de mediana complejidad.
OBJETIVOS
v Basándose en el método espectrofotométrico de Goodwin, modificar la técnica a fin de adecuarla al
análisis del suero.
v Establecer valores de referencia de aminoácidos totales en suero, sobre una población significativa de
individuos sanos.
EXPERIMENTAL
Muestras de partida: Sueros de cien pacientes sanos, edades comprendidas entre 20 y 45 años, con ayuno
previo de 8 horas, colectadas en el transcurso de la mañana en laboratorios de análisis clínicos de Corrientes.
Figura 1. Espectrograma de los DNF-aminoácidos
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Técnica: La cuantificación se basa en la reacción del nitrógeno amínico con el 1-fluoro-2,4-dinitro-benceno
(FDNB) sobre la base modificada del método de Goodwin, midiendo la absorbancia de los distintos
dinitrofenilaminoácidos. El espectrograma del FDNB y de los distintos DNF-aminoácidos da cuenta del
corrimiento batocrómico, por lo que las lecturas se realizan a 356 nm, tomando como blanco al reactivo
cromógeno.
RESULTADOS
Se han efectuado análisis por triplicado encontrándose una elevada repetibilidad, con errores relativos
porcentuales menores que 1,0%.
Para la curva de calibración se utilizaron tres aminoácidos de calidad certificada: ácido glutámico, glicina y
asparagina.
El histograma muestra la distribución de frecuencias (Figura 2). El valor medio encontrado es 6,59 mg N
amínico/100 ml. La desviación estándar (± σ) resulta 1,16 mg N amínico/100 ml, lo cual permite establecer
el rango de valores normales (± 2σ) en 4,27 - 8,91 mg N amínico/100 ml de suero.
La forma sigmoidea de la curva de frecuencias acumulativas (Figura 3) y la prueba numérica de χ2
demuestran que los resultados obtenidos siguen una distribución gaussiana.
Figura 2: Distribución de frecuencias de aminoácidos en suero.
Distribucion de Frecuencias
20
18
16
Frecuencia
14
12
10
8
6
4
2
0
4,25
4,75
5,25
5,75
6,25
6,75
mg N/100 ml.
7,25
7,75
8,25
8,75
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Figura 3: Frecuencias acumulativas del contenido de aminoácidos en suero.
Frecuencia Acumulativa
120
100
F Acum. %
80
60
40
20
0
4,25
4,75
5,25
5,75
6,25
6,75
7,25
7,75
8,25
8,75
N mg/100 ml
CONCLUSIONES
La aplicación del método propuesto permitió:
v Lograr eficazmente una adaptación de la técnica espectrofotométrica de Goodwin a suero como muestra
de partida.
v Determinar intervalos de referencia de N amínico en suero a fin de facilitar el diagnóstico médico clínico.
v Diseñar, a futuro, los parámetros operativos para esta reacción, que permitan aplicarla al autoanalizador
en el laboratorio.
BIBLIOGAFIA
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Barcelona 1980.
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Miller y Miller. Estadística para Química Analítica. 2° edición. Addison Wesley Iberoamericana.
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