Presentació UPLC-MS

Utilizació
Utilización de la UPLCUPLC-MS/MS
MS/MS en la
monitorització
monitoritzación farmacoterapé
farmacoterapéutica de
inmunosupresores en un hospital de
tercer nivel: un añ
año de experiencia
MS Techonology Days
Sesión Clínica
Raúl Rigo Bonnin
Laboratori Clínic
Hospital Universitari de Bellvitge
¿ Por qué decidimos implantar la tecnología
UPLC-MS/MS en nuestro laboratorio?
• Motivos metrológicos y post-metrológicos
• Problemas con everolimus
• Mejores características metrológicas que los inmunoanálisis
• Incoherencia de resultados de algunos pacientes debido a
interferencias:
• Anticuerpos
• Hematocrito
• Reducir tiempos de respuesta de entrega de resultados
• Permite medir, simultáneamente, la concentración
ciclosporina A, everolimus, sirolimus y tacrolimus
de
• Motivos organizativos
• Iniciativa de la directiva de nuestro hospital de apostar por
nuevas tecnologías y potenciar la Investigación, Desarrollo e
Innovación (I+D+i),
• Solicitud por parte de los clínicos para medir:
• Antirretrovirales
• Hormonas (testosterona libre),
• Fármacos (voriconazol, meropenem, valproato y fenitoína
libres, daptomicina, ganciclovir, gencitabina, fulvestrant, NVPBEZ235)
• Proyecto conjunto con la Unidad de Trasplante de nuestro
hospital
• Motivos económicos
• Reducción de personal
•A medio-largo plazo sale más rentable: coste inicial elevado,
coste/muestra reducido
2011
2012
2013
2014
2015
• Otros motivos
• Cada vez son más los laboratorios clínicos europeos que
utilizan sistemas de medida basados en LC-MS/MS, debido a:
• Procedimiento de referencia
• Incremento de la automatización
• Existen mejoras en programas de gestión de datos que
facilitan la interpretación de los resultados
• Existe un mayor número de protocolos de trabajo y reactivos
validados (marca CE)
Reactivos con Marca CE IVD Directiva 98/79/EC
MassTrak Immunosuppressants XE
(Waters)
tacrolimus + everolimus
MassTox Immunosuppressants
(Chromsystems)
Ciclosporina A+everolimus+sirolimus+tacrolimus
ClinMass Immunosuppressants
(Recipe)
Ciclosporina A+everolimus+sirolimus+tacrolimus
…pese a todos esos motivos, seguíamos
teniendo dudas:
• ¿ Necesitaremos una persona especializada en HPLC y MS/MS,
tal y como se comenta ?
• ¿ Por qué esta tecnología está poco implantada en la rutina de
los laboratorios clínicos españoles ?
• ¿ Estará la industria del diagnostico in vitro que fabrica este
tipo de analizadores a la altura de las necesidades de un
laboratorio clínico de un hospital ?
• Tiempo de respuesta tras una avería ≤ 1 día
• Soporte técnico en todo momento
• ¿ Podremos asumir la carga asistencial de nuestro laboratorio ?
Durante 2011, se han solicitado en
nuestro laboratorio…
19/día
15/día
4/día
4/día
INCONVENIENTES
VENTAJAS
EVALUACIÓN DEL SISTEMA DE
MEDIDA Acquity UPLC®-TQD®
UPLC
MS/MS
MassTrak Immunosuppressants XE RUO
(Waters)
• 7 materiales de calibración
• 3 materiales de control
• Mezcla de estándares internos
• Solución de ajuste de masas (tunning)
EVALUACIÓN REALIZADA
• Características metrológicas
• Imprecisión intraserial
•
•
•
•
•
•
•
•
Imprecisión interdiaria
Sesgo
Error de medida
Límites de detección y cuantificación
Intervalo de medida (linealidad)
Selectividad
Contaminación por arrastre
Recuperación, efecto matriz y eficiencia del proceso
• Estudio de intercambiabilidad
http://www.iupac.org/objID/Article/pac7405x0835
http://old.iupac.org/divisions/V/501/draftoct19.pdf
http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulator
yInformation/Guidances/ucm070107.pdf
http://www.eurachem.org/guides/pdf/valid.pdf
http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scienti
fic_guideline/2011/08/WC500109686.pdf
EP10-A3
__________
Preliminary Evaluation of Quantitative
Clinical Laboratory Measurement
Procedures; Approved Guideline—Third
Edition
C50-P
___________
Mass Spectrometry in the Clinical
Laboratory: General Principles and
Guidance; Proposed Guideline
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
50 µL muestra + 200 µL ZnSO4 0,1 M + 500 µL IS
20 s de agitación
11000 g durante 2 min
2 min por muestra
2,3 h para 50 muestras
RESULTADOS DE LA EVALUACIÓN
Imprecisión intraserial, imprecisión
interdiaria y sesgo relativo
< 14 %
< 14 %
Error de medida relativo
< 30 %
314 µg/L
314 µg/L
4,7 %
-2,3 %
11,5 µg/L
11,5 µg/L
-4,2 %
-6,5 %
< 30 %
8,7 µg/L
8,7 µg/L
-3,3 %
-3,3 %
8,5 µg/L
6,3 %
8,5 µg/L
-3,4 %
Límites de detección, límites de
cuantificación e intervalos de medida
14 %
Límite de
detección
Límite de
Cuantificación
Intervalo de medida
(linealidad)
7,2 µg/L
17 µg/L
(17-2290) µg/L
Tacrolimus
0,4 µg/L
0,7 µg/L
(0,7-35) µg/L
Sirolimus
0,6 µg/L
1,6 µg/L
(1,6-35) µg/L
Everolimus
0,4 µg/L
0,9 µg/L
(0,9-35) µg/L
Ciclosporina A
Selectividad, contaminación por arrastre
Recuperación, efecto matriz y eficiencia del
proceso
Intercambiabilidad
Ciclosporina A
EMIT® 2000 Cyclosporin (Siemens Healthcare Diagnostics) adaptado al
analizador Cobas Mira® (Roche Diagnostics)
SanCiclosporina; c.massa (µ g/L)
Ciclosporina A
1400
COBAS MIRA
1200
1000
800
Cobas Mira (Immunoanàlisi) =
1,26·ACQUITY (UPLC-MS/MS)
600
400
200
0
0
200
400
600
800
1000
1200
UPLC ACQUITY TQD
• Existe un sesgo proporcional entre los resultados
• Los resultados del UPLC-MS/MS son un 26 % más bajos
Everolimus
Innofluor Certican® (Seradyn Inc.) adaptado al analizador TDx FLx (Abbott
Diagnostics)
SanEverolimus; c.massa (µ g/L)
13
11
Everolimus
TDx
9
7
TDx FLx (Immunoanàlisi) =
ACQUITY (UPLC-MS/MS)
5
3
1
1
3
5
7
9
11
13
UPLC ACQUITY TQD
• Los resultados son intercambiables
Sirolimus y tacrolimus
Architect i1000® (Abbott Diagnostics)
SanSirolimus; c.massa (µ g/L)
18
16
Sirolimus
ARCHITECT
14
12
10
8
Architect i1000 (Immunoanàlisi) =
ACQUITY (UPLC-MS/MS)
6
4
2
2
4
6
8
10
12
14
16
18
UPLC ACQUITY TQD
• Los resultados son intercambiables
SanTacrolimus; c.massa (µ g/L)
30
ARCHITECT
25
Tacrolimus
20
15
10
Architect i1000 (Immunoanálisis)
= 1,11·ACQUITY (UPLC-MS/MS)
5
0
0
5
10
15
20
25
30
UPLC ACQUITY TQD
• Existe un sesgo proporcional entre los resultados
• Los resultados del UPLC-MS/MS son un 11 % más bajos
Ventajas de la utilización de UPLC-MS/MS
• Mejora en la calidad de los resultados (más fiables):
• CV, sesgos y errores de medida menores
• Mayor capacidad de detección e intervalos de medida más amplios.
• Mayor selectividad y especificidad (reducción
interferencias con otros fármacos, “Hematocrito”, …)
de
posibles
• Se consigue disminuir la variabilidad asociada a la medición de la
concentración de los inmunosupresores (variabilidad metrológica)
• Es el procedimiento de referencia:
• Se han establecido los intervalos terapéuticos vigentes
• Se realizan la
farmacodinámicos.
mayoría
de
estudios
farmacocinéticos
y
• Permite medir la concentración de CSA, EVR, SRL y TAC
simultáneamente.
• Permite reducir el tiempo de procesamiento de las muestras:
• 50 muestras = 2,3 horas
• A medio-largo plazo es rentable
• En un año se amortiza el coste del analizador.
• Aplicabilidad no tan lejana en los laboratorio clínicos
• Existen equipos de reactivos que facilitan enormemente la
aplicación en los laboratorios
• Permite incorporar
laboratorio
nuevas
magnitudes
• Promueve e incentiva la I+D+i
• Colaboración con diversos servicios clínicos
en
el
catálogo
del
Tras un año aplicando esta tecnología…
• ¿ Necesita esta tecnología personal especializado ?
• Más que una persona especialista en LC-MS/MS:
• Se necesita una persona
cromatografía y MS/MS
dedicada
con
nociones
básicas
de
• Protocolos de trabajo bien detallados
• Servicio técnico que de una respuesta inmediata y solucione con
rapidez y eficacia los problemas que puedan surgir
• Un técnico de laboratorio y un facultativo especialista (Bioquímico
clínico)
• ¿ Se han de revisar y visualizar los cromatogramas de todas
las muestras ?
• Sí, la intensidad de los picos (TIC), la forma de los picos, los
tiempos de retención
• En un futuro, y con un software adecuado, quizás se pueda
prescindir de este proceso
• ¿ Ha estado la industria del diagnóstico in vitro que fabrica
este tipo de analizadores a la altura de las necesidades de
nuestro laboratorio ?
• SI, hemos tenido soporte técnico en todo momento.
• Punto que más hemos valorado en nuestro servicio (rapidez y
eficacia del servicio técnico)
• Tiempo de respuesta tras una avería ≤ 1 día
¿ Por qué en España esta tecnología está poco implementada
en la rutina de los laboratorios ?
•
• En nuestra opinión es viable implementarla, eso sí, dependerá de
cada laboratorio:
• Personal disponible
• Recursos económicos
• Número de muestras diarias
• Entrega de resultados diaria
Otras consideraciones de interés…
• ¿ Cuál ha sido el número de averías graves generadas durante
un año ?
• Ninguna
• No hemos requerido del servicio técnico
•
¿ Y averías menores ?
• Falta de cebado de circuitos y cánulas
• Obstrucciones menores en el circuito
• Pérdida del vacío del analizador de masas como consecuencia de
apagones de luz
• ¿ Qué tipo de mantenimientos son necesarios ?
DIARIO (≈
≈ 30 min)
• Limpieza de cono de muestra
• Preparación de fases móviles
• Comprobación de las presiones y fluídicas del sistema
• Cebado del sistema
SEMANAL (≈
≈ 30 min)
• Ventilación de la bomba de vacío
MENSUAL (≈
≈ 20 min)
•Revisión de los niveles de aceite de la bomba de vacío
•Limpieza de los filtros metálicos de la fase móvil
ANUAL
GRACIAS