Evaluación de dos técnicas de ... aislado del tejido adiposo.

Evaluación de dos técnicas de crioconservación sobre la calidad del RNA
aislado del tejido adiposo.
Garcia-Sobreviela MP.1,2, Valero M.1,3, Lagos J. 1,3, Arenaz I. 2,4, Arbones-Mainar JM 1,2.
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Grupo de Investigación ADIPOFAT.
Unidad de Investigación Traslacional. Hospital Universitario Miguel Servet. Instituto Aragonés de
Ciencias de la Salud. Zaragoza
3 Servicio de Cirugía General y Digestiva. Hospital Royo-Villanova. Zaragoza
4 Biobanco ARAGON.
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INTRODUCCIÓN
La extracción de RNA de calidad (con alto rendimiento y sin impurezas) es un paso crucial
para la determinación de la expresión génica. Este proceso es especialmente complicado
en tejidos con alto contenido lipídico como el tejido adiposo. El objetivo de este estudio es
comparar dos métodos distintos de crioconservación de tejido adiposo humano y los
efectos que estos métodos tienen sobre la calidad del RNA.
METODOLOGÍA
Se congelaron, controlando los tiempos desde el explante hasta su procesado, 18
muestras de tejido visceral y subcutáneo en nitrógeno líquido y 18 muestras de ambos
tipos de grasa congeladas en un bloque criogénico con isopentano enfriado
−80°C.
Todas las muestras estudiadas se almacenaron a -80ºC durante un tiempo inferior a un
año y posteriormente, se realizó la extracción de RNA con TRIzol de las muestras
crioconservadas, evaluando la calidad del mismo mediante técnicas espectrofotométricas,
electroforéticas y funcionales (PCR).
RESULTADOS
En la extracción de RNA se obtuvo mayor rendimiento para el tejido visceral
independientemente del método de crioconservación y una mejoría en calidad y pureza
para las muestras de tejido adiposo subcutáneo congelado con isopentano. El protocolo
de criopreservación con isopentano combinado con la extracción mediante TRIzol
produce RNA de calidad suficiente para ser utilizado en distintas aplicaciones como PCR
convencional, qPCR y microarrays.
CONCLUSIONES
Con la congelación del tejido adiposo con isopentano obtenemos una mejoría en calidad,
pureza y funcionalidad del RNA, considerándolo superior a la congelación con nitrógeno
liquido. Es importante reducir al máximo el daño ocasionado en muestras con pocas
células y alto contenido lipídico, como las del tejido adiposo subcutáneo; por eso, se
utilizará dicha técnica para crioconservar la colección de grasa.