bilirrubina - Especialidades Diagnósticas IHR Ltda


BILIRRUBINA
Código
Presentación
00952
50 PBS
TOTAL Y DIRECTA
Método JENDRASSIK
PRINCIPIO
La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado
produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide
fotocolorimétricamente a 546-578 nm.
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el
diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia
de un desarrollador acuoso que posibilite su reacción. De forma tal que,
para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada)
presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de
reacción.
CONTENIDOS
PROCEDIMIENTO
Long de onda para bilirrubina total:
Long de onda para bilirrubina directa:
Medición:
Temperatura:
578 nm (560-600 nm)
546 nm (530-555 nm)
1 cm de paso de luz
Ambiente
Medida frente a un blanco prueba.
Bilirrubina Total (BT)
Pipetear en tubos de ensayo:
BLANCO
PRUEBA
PRUEBA
Solución 1
200µl
200µl
Solución 2
-
1 gota
(50µl)
Solución 3
1 ml
1 ml
Prueba
200µl
200µl
ACIDO SULFANILICO
Acido Clorhídrico
Acido Sulfanílico R. P.
Agua Desmineralizada tipo II
1.5%
0.5%
cps
Mezclar, dejar estar 10 a 60 min a temperatura ambiente
NITRITO DE SODIO
Sodio Nitrito
Glicocola (glicina)
Sodio Cloruro
Sodio Hidróxido 0.1 N
Sodio Hidróxido 1.0 N
Sodio Azida
Agua Desmineralizada
0.1%
0.6%
0.4%.
15 %
1%
0.1%.
cps
Solución 4
1 ml
1 ml
Mezclar, dejar estar 5 - 30 min. a temperatura ambiente. Medir la extinción
de la prueba frente al blanco de prueba (EBT).
Bilirrubina Directa (BD)
SOLUCION DE CAFEINA
Cafeína R. P.
Sodio Benzoato
EDTA Di sódico
Sodio Acetato Anhidro
Agua Desmineralizada tipo II
10%
15%
0.2%
15%
cps
TARTRATO
Sodio Tartrato
Sodio Hidróxido
Agua Desmineralizada tipo II
21%.
6.2%
cps
Pipetear en tubos de ensayo:
BLANCO
PRUEBA
PRUEBA
Solución 1
200µl
200µl
Solución 2
-
1 gota (50µl)
Cloruro de sodio 0,9%
2 ml
2 ml
Prueba
200µl
200µl
Mezclar, dejar estar exactamente 5 min.(cronómetro) a temperatura
ambiente. Medir la extinción de la prueba frente al blanco de prueba (EBD).
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
•
Conservado entre 15°C y 30°C y protegido de la luz , estable hasta la
fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
•
Los reactivos contienen menos del 0.1% de azida sódica. La azida
sódica puede reaccionar con tuberías de cobre y plomo formando
compuestos explosivos. Las regulaciones locales para el desecho
de compuestos peligrosos deben ser respetadas, descartar con
abundante agua.
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS
•
Solución Salina o Cloruro de Sodio 0.9%
•
Baño termoregulado.
•
Espectrofotómetro o foto colorímetro de filtros capaz de medir
absorbancia a 546 nm y 578nm.
•
Pipetas automáticas.
•
Cronometro y/o timer.
MUESTRA
Suero o Plasma con heparina o EDTA libre de hemolisis. La muestra
debe ser preferentemente fresca. En caso de no efectuarse el ensayo en
el momento, el suero debe conservarse hasta 12 horas en el refrigerador
(2-10oC) y protegido de la luz.
La bilirrubina en suero es estable hasta tres meses conservado a -20°C y
protegido de la luz.
La acción de la luz es capaz de destruir en una hora hasta un 50% de la
bilirrubina presente en la muestra. Por tal motivo debe protegerse
cuidadosamente.
Cálculo:
La concentración ( C ) de bilirrubina en la prueba se calcula según:
Longitud de onda
Bilirrubina
Total
578 nm
Bilirrubina
Directa
546 nm
C (mg/dl)
10,8 x EBT
14,4 x EBD
C (µmol/l)
185 x EBT
246 x EBD
VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina total:
Bilirrubina directa:
hasta 1 mg/dll ó 17 µmol/l
hasta 0,25 mg/dl ó 4,3 µmol/l
CONTROL DE CALIDAD
Pueden ser empleados todos los sueros con valores de Bilirrubina Total y
Directa determinados por este método. Nosotros recomendamos el uso
de nuestro suero de origen humano IHR Diagnóstica para verificar la
funcionalidad del procedimiento de medida. Cada laboratorio debe
establecer su propio programa de control de calidad interno, así como
procedimientos de corrección en el caso de que los controles no cumplan
con las tolerancias aceptables.
1/2
2007-03v2.0

BILIRRUBINA
TOTAL Y DIRECTA
Código
Presentación
00952
50 PBS
Método JENDRASSIK
CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO
LINEARIDAD
La reacción es lineal hasta 25 mg/dl. Para valores superiores, diluir la muestra con
suero fisiológico y el resultado obtenido se multiplica por el factor de dilución
REPETITIVIDAD
Concentración media
0.98 mg/dl B.Directa
0.9 mg/dl B.Total
S.D.
0.025
0.05
C.V.%
2.6
5.6
REPRODUCIBILIDAD
Concentración media
0.96 mg/dl B.Directa
0.9 mg/d B.Total
S.D.
0.028
0.05
C.V.%
2.9
5.6
EXACTITUD
Una comparación entre este procedimiento y un reactivo similar usando 30 muestras
entre 0.5 y 5.5 mg/dl produjo las siguientes ecuaciones:
Bilirrubina Total y= 0.98x+0.02 con un coeficiente de correlación (r) igual a 0.987.
Bilirrubina Directa y= 1.04x+0.07.con un coeficiente de correlación (r) igual a 0.998.
INTERFERENCIAS
Algunos medicamentos y sustancias pueden interferir, para mayor información
consulte Yooung, D.S. et al, Clin. Chem. 21:1D (1975)5 .
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Ehrlich, P., Zeitschr, Sur Anal. Chemie 23:275 (1884).
Michaelsson, M., Scand. J. Clin. Lab. Invest. (Suppl. 49) 13:1 (1961).
Martinek, R.G., Clin. Chim. Acta 13:161 (1966).
Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders, p.1028 (1976).
Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
Gambino, S.R., et al, Bilirubin Asay (Revised), Commission on Continuing Education, Am. Soc.
of Clin. Path., Chicago, (1968).
Índice de Símbolos
Producto para
diagnóstico
in-vitro
Referencia o
Código
Pruebas
por Kit
Para usar
consulte las
instrucciones
Precaución
Consultar las
instrucciones
Fabricante
Número de Lote
Fecha de
Caducidad
Fecha de
Fabricación
Limite de
Temperatura
Riesgo Biológico
ESPECIALIDADES DIAGNOSTICAS IHR Ltda.
PBX: +(2) 552 5444 / Calle 7 A No. 45-07 Santiago de Cali - Colombia
e-mail: [email protected]
www.ihrdiagnostica.com
2/2
2007-03v2.0