HIT-Ab((PF4-H)) 0009802032

HemosIL® AcuStar
HIT-Ab(PF4-H) - 0009802032
ENGLISH - Insert revision 08/2013
Intended use
Fully automated chemiluminescent immunoassay for the detection of IgG, IgA and IgM antibodies in
human citrated plasma and serum that react with Platelet Factor 4 (PF4) when complexed to heparin on
the ACL AcuStar™. Heparin-associated antibodies are commonly found in patients with heparin induced
thrombocytopenia or thrombosis (HIT).
• With the cartridge still on a solid surface, press the two tabs placed on the sides of the piercing cap
(grey part) and apply pressure to the top portion of the cartridge until it snaps into a lock position. Once
in the locked position the tabs should not be visible.
Do not invert the open cartridge.
• Once the cartridge is placed on the instrument, additional periodic mixing is performed on board.
Summary and principle
Heparin-induced thrombocytopenia (HIT) is an immune complex mediated disorder that can cause
morbidity and mortality in patients receiving heparin therapy1. HIT is considered a paradoxical disease
in that anticoagulant is administered to prevent thrombosis; however the major clinical event in HIT is
an increased risk for venous and/or arterial thrombosis2. HIT is suspected when patients treated with
unfractionated heparin (UFH) or low molecular weight heparin (LMWH) show a decrease of platelet
counts greater than 50% from baseline, typically between day 5 and 10 from the initiation of the
anticoagulant treatment3. Cases of early-onset HIT and delayed-onset HIT have also been reported2.
Prompt diagnosis is very important because heparin treatment must be suspended and alternative
anticoagulants used in case of confirmed HIT.
Type II HIT, the immunoallergic type, is caused by the development of platelet-activating antibodies,
mostly directed against Platelet Factor 4 when complexed with Heparin (PF4/H)4. These antibodies are
the primary cause for inducing thrombosis both venous and arterial. The current working hypothesis
is that early exposure to PF4 complexes, perhaps induced by endogenous non-heparin factors, leads
to PF4 clustering and a T-cell-dependent antibody class switch of B-cells. Later in life, these B-cells
become again transiently activated when PF4 clusters are induced by heparin treatment2. Development
of pathology is mainly associated with heparin-dependent antibodies of the IgG isotype1. However, the
presence of only IgM and/or IgA was observed in some patients, including cases showing a thrombotic
complication5.
PF4/H antibody testing combined with an appropriate clinical assessment has been proven to be very
useful as an aid in the management of HIT suspected patients. Particularly, a negative result for a PF4/H
antibody test can support the clinical decision to exclude the presence of HIT, and therefore continue
heparin treatment2. A weak positivity for PF4/H antibodies may indicate that the antibodies are nonplatelet activating, while a strong positivity may indicate a higher risk of HIT. In both cases, confirmation
with a functional test is recommended. A clinical reassessment supported by laboratory data should be
performed before confirmation or exclusion of the diagnosis2.
The HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) assay is a chemiluminescent two-step immunoassay consisting of
magnetic particles coated with PF4 complexed to polyvinyl sulfonate (PVS) which capture, if present,
the PF4/Heparin antibodies from the sample. After incubation, magnetic separation, and a wash step, a
tracer consisting of a mixture of 3 isoluminol-labeled monoclonal antibodies (anti-human IgG, anti-human
IgA and anti-human IgM) is added and may bind with the captured PF4/Heparin IgG, IgA and/or IgM
isotypes on the particles. After a second incubation, magnetic separation, and a wash step, reagents
that trigger the luminescent reaction are added, and the emitted light is measured as relative light units
(RLUs) by the ACL AcuStar optical system. The RLUs are directly proportional to the PF4/Heparin
antibodies concentration in the sample.
The ACL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) assay utilizes a 4 Parameter Logistic Curve fit (4PLC) data reduction
method to generate a Master Curve. The Master Curve is predefined and lot dependent and it is stored in
the instrument through the cartridge barcode. With the measurement of calibrators, the predefined Master
Curve is transformed to a new, instrument specific 4PLC Working Curve. The concentration values of the
calibrators are included in the calibrator tube barcodes.
Composition
The AcuStar HIT-Ab(PF4-H) kit consists of:
R
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge for 25 determinations (Cat. No. 0009802033): 1 cartridge containing
1 vial of magnetic particle suspension coated with PF4/PVS complex, 1 vial of assay buffer, 1
vial of tracer consisting of mAb anti-human IgG, IgM and IgA antibodies labeled with isoluminol,
and 1 vial of sample diluent used for the regular predilution of the sample. The reagents are in a
phosphate or Tris buffer containing bovine serum albumin, bovine fetal serum, PF4/PVS complex,
mouse monoclonal IgG, stabilizers, and preservative.
C1 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 (Cat. No.0009802034): 1 x 1 mL barcoded tube of a solution with
humanized mAb anti-PF4-Heparin in Tris buffer containing bovine serum albumin, stabilizers and
preservative.
C2 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 2 (Cat. No. 0009802035): 1 x 1 mL barcoded tube of a solution with
humanized mAb anti-PF4-Heparin in Tris buffer containing bovine serum albumin, stabilizers, and
preservative.
The calibrators are lot specific and they can not be used with other lots of reagents.
PRECAUTIONS AND WARNINGS:
The human derived material in this product was tested by FDA approved methods and found nonreactive
for Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV 1/2 antibodies. Handle as if potentially
infectious6.
All reagents contain less than 0.1% sodium azide that may form explosive azides in metal plumbing. Use
proper disposal procedures.
Hazard class: None
Risk phrases: None
Safety phrases: None
This product is For in vitro Diagnostic Use.
Preparation
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge: Microparticles settle during shipment and storage and require mixing to
resuspend.
• The first time that the cartridge is used, gently invert the cartridge 30 times avoiding the formation of
foam.
• Check for the complete resuspension of the microparticles. If the microparticles are not totally
resuspended continue to invert the cartridge until the microparticles have been completely
resuspended.
• If the microparticles do not resuspend, DO NOT USE CARTRIDGE.
• Once the microparticles have been resuspended, place the cartridge on a solid surface and gently
remove the Red Secure Shipping Tab from the cartridge.
HIT-Ab
(PF4-H)
Verwendung
In a cross-reactivity study, 46 samples of the following conditions were tested with the AcuStar HITAb(PF4-H) assay: containing paraproteins IgG or IgM, with elevated levels of IgG or IgM, positive for
Rheumatoid Factor (RF), and from pregnant women (at least 10% multiparous).
Sample group
N
N (Positive)
% Positive HIT-Ab(PF4-H)
Rheumatoid Factor
10
0
0%
Elevated IgG and IgM
20
0
0%
Paraprotein IgG and IgM 6
0
0%
Pregnant women
10
0
0%
Expected values
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2: Are liquid and must be mixed by gentle inversion several times before use
to assure homogeneity of the calibrator. Avoid foam formation.
Please Note: Do not use the reagent if you observe any change in appearance of components included
in the kit or if you observe any damage in the packaging materials.
Reagent storage and stability
Unopened reagents and calibrators are stable until the expiration date shown on the cartridge and tube
labels when stored at 2-8°C.
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge - Stability after opening on board the ACL AcuStar System is 12 weeks.
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2 - Stability after opening on board the ACL AcuStar System is 4 hours.
For optimal stability remove calibrators from the system and store them at 2-8°C capped in the original
vial.
Instrument/test procedures
Refer to the ACL AcuStar Operator’s Manual for the complete assay procedure instructions.
Specimen collection and preparation
Plasma: Nine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer to
CLSI Document H21-A5 for further instructions on specimen collection, handling, and storage7.
Thaw frozen samples rapidly at 37°C. After thawing the assay must be performed within 2 hours.
Serum: Following collection, the serum should be separated from the clot. Follow CLSI Document
H18-A3 recommendations for storage conditions for samples8.
Centrifuge specimens containing visible particulate matter before testing.
Additional reagents and control plasmas
The following are not supplied with the kit and must be purchased separately.
AcuStar HIT Controls
Cat. No. 0009802122
Quality control
Two levels of control are recommended for a complete quality control program . HemosIL AcuStar HIT
Controls Low and High are designed for this program. Each laboratory should establish its own mean and
standard deviation, and should establish a quality control program to monitor laboratory testing. Controls
should be analyzed at least once every 8 hour shift when testing is taking place, in accordance with
good laboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information. Refer to
Westgard et al for identification and resolution of out-of-control situations10.
9
Traceability of calibrators and control materials
The reported values were determined over multiple runs on the ACL AcuStar System using specific lots
of reagents and against an internal House Standard.
Sample matrix
41 paired citrated-plasma/serum samples were analyzed with the AcuStar HIT-Ab(PF4-H) assay. The
concentration values were compared by Passing and Bablok regression using the plasma sample values
as reference (X-axis), and the correlation coefficient calculated with Pearson correlation. The slope and
intercept were respectively 1.01 and 0.03 and the correlation coefficient (r) 0.993.
Please Note: The ACL AcuStar automatically accounts for the differences in dilution between plasma
and serum samples. Reported serum sample values do not need to be corrected by a factor.
Refer to the ACL AcuStar Operator’s Manual for additional information.
Results
HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) results are reported in U/mL (HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Arbitrary
Units).
Test Range:
System
ACL AcuStar
0.00 – 128.00 U/mL Please Note: For samples >128.00 U/mL results will be reported as >128.00 U/mL and flagged as
>Norm.
Although a positive reaction obtained using this assay may indicate the presence of a heparin-associated
antibody, the detection of antibodies, however, DOES NOT CONFIRM the diagnosis of heparin-induced
thrombocytopenia (HIT). Some patients may have naturally occurring antibodies to PF4.
The presence of PF4/H antibodies in a normal population is not expected. A set of studies was performed
to assess the optimal cut-off of HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) on the ACL AcuStar systems as described
below.
150 plasma samples from apparently healthy individuals (blood bank donors) were tested. The 95%
reference interval was 0.07 -1.01 U/mL. In addition, a population of 91 samples (61 citrated plasma and
30 sera) from heparin-exposed patients (UFH and LMWH) with no clinical suspicion of HIT were tested.
The 95% reference interval was 0.04 – 2.27 U/mL.
Finally, a method comparison with the Serotonin Release Assay (SRA) on 201 plasma samples from HIT
suspected patients (14 SRA positive and 187 SRA negative) indicated that the optimal cut-off determined
by ROC analysis was 1.00 U/mL (83.1% Agreement, 95% CI = 77.2% - 88.0%).
Based on these studies it has been determined that on heparin treated patient samples, HemosIL
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) results equal or higher than 1.00 U/mL may indicate the presence of HIT
antibodies. The assay results should be used with other information, including the clinical context, in
forming a diagnosis.
Performance characteristics
Precision:
Within run and total (run to run and day to day) precision was assessed over multiple runs.
ACL AcuStar
Mean (U/mL)
%CV (Within run)
%CV (Total)
Low HIT-Ab(PF4-H) Control
0.53
4.2
6.4
High HIT-Ab(PF4-H) Control
2.72
3.0
6.0
HIT-Ab(PF4-H) plasma sample
1.70
5.7
6.2
Method Comparison:
An in-house method comparison was performed with both plasma and serum samples using two
commercially available FDA cleared ELISA assays.
The results summarized below are based on a cut-off of 1.00 U/mL for the AcuStar. Overall % Agreement
for plasma and serum were:
ELISA 1 Assay
ELISA 2 Assay
Plasma Samples
Serum Samples
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) results + 81 18
+ 45 1
- 11 156
- 4 75
Predicate Device
N % Co-Positivity (95% CI)
Co-Negativity (95% CI) % Agreement (95% CI)
ELISA 1 Assay Plasma 266
88.0% (79.6% - 93.9%)
89.7% (84.1% - 93.8%)
89.1% (84.7% - 92.6%)
ELISA 2 Assay Serum 125
91.8% (80.4% - 97.7%)
98.7% (92.9% - 100.0%)
96.0% (90.9% - 98.7%)
Clinical performance:
A multicenter study was performed at three hospitals on 610 samples (409 citrated plasma and 201 sera)
using two commercially available FDA cleared ELISA assays. One hospital used only sera samples, the
other two hospitals used only plasma samples and these results were combined.
The samples were from patients exposed to heparin who showed HIT related symptoms and hence were
suspected to suffer from HIT.
The results summarized below are based on a cut-off of 1.00 U/mL for the AcuStar:
ELISA 1 Assay
ELISA 2 Assay
Plasma Samples
Serum Samples
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) results + 16 23
+ 37 9
- 11 359
- 14 141
Predicate Device
N % Co-Positivity (95% CI)
Co-Negativity (95% CI) % Agreement (95% CI)
ELISA 1 Assay Plasma 409
59.3% (38.8% - 77.6%)
94.0% (91.1% - 96.1%)
91.7% (88.6% - 94.2%)
ELISA 2 Assay Serum 201
72.5% (58.3% - 84.1%)
94.0% (88.9% - 97.2%)
88.6% (83.3% - 92.6%)
The precision, method comparison, and clinical study results were obtained using specific lots of
reagents and controls.
Limitations/interfering substances
HIT-Ab(PF4-H) results on the ACL AcuStar are not affected by hemoglobin up to 500 mg/dL, bilirubin up to
18 mg/dL, triglycerides up to 1250 mg/dL, heparin (Low Molecular Weight and Unfractionated) up to 1 IU/
mL, and Rheumatoid Factor up to 800 IU/mL.
The assay is not affected by prozone effect. The assay protocol has a washing step after the sample
incubation that precludes the prozone effect.
Please Note: Positive Rheumatoid Factor samples may increase the value of an already positive HIT
sample.
Twenty six samples diagnosed with Antiphospholipid Syndrome (APS) were tested with the HemosIL
AcuStar HIT-Ab(PF4-H). All 26 samples reported negative with HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) demonstrating
that the assay is not affected by APS antibodies.
- 0009802032
Vollautomatischer Chemilumineszenz-Immunoassay zur Bestimmung von IgG, IgA und IgM Antikörpern
in menschlichem Citratplasma und Serum, die mit Plättchenfaktor 4 (PF4) reagieren, welcher mit Heparin
komplexiert ist. Zur Verwendung auf ACL AcuStar™ Analysensystemen. Heparin assoziierte Antikörper
werden üblicherweise bei Patienten mit Heparin induzierter Thrombozytopenie oder Thrombose (HIT)
gefunden.
Testprinzip und Zusammenfassung
Die Heparin-induzierte Thrombozytopenie (HIT) ist eine durch Immunkomplexe vermittelte Störung, die
zu Morbidität und Mortalität bei Patienten unter Heparintherapie führen kann1. HIT wird als paradoxe
Erkrankung angesehen, bei der Antikoagulantien zur Verhinderung einer Thrombose eingesetzt werden,
jedoch das klinische Ereignis der HIT ein erhöhtes Risiko für venöse und/oder arterielle Thrombosen
ist2. Ein Verdacht auf eine HIT liegt vor, wenn Patienten, die mit unfraktioniertem Heparin (UFH) oder
niedermolekularem Heparin (LMWH) behandelt werden, einen Abfall der Thrombozytenzahl um mehr als
50% vom Ausgangswert zwischen dem 5. und 10. Tag nach Beginn der Antikoagulation zeigen3. Fälle von
früherem oder späterem Auftreten einer HIT wurden ebenfalls berichtet2. Die unverzügliche Diagnose ist
von entscheidender Bedeutung, da die Heparinbehandlung eingestellt und in bestätigten Fällen einer HIT
durch alternative Antikoagulantien ersetzt werden muss.
Die HIT Typ II, der immun-allergische Typ, wird durch die Entstehung von Plättchen-aktivierenden
Antikörpern verursacht, die hauptsächlich gegen den Komplex aus Plättchenfaktor 4 und Heparin (PF4/H)
gerichtet sind4. Diese Antikörper sind der Hauptgrund für die Entwicklung einer Thrombose, sowohl venös
als auch arteriell. Die derzeitige Hypothese lautet, dass eine frühere Exposition mit PF4/H-Komplexen
(eventuell ausgelöst durch endogene Faktoren) zu einer weiteren PF4/H-Komplexierung, sowie zu einer
T-Zell abhängigen Veränderung der Antikörper-Klasse der B-Zellen führt. Zu einem späteren Zeitpunkt
werden diese B-Zellen wieder transient aktiviert, falls es zu PF4/H-Komplexierung durch die Behandlung
mit Heparin kommt2. Die Entwicklung der pathologischen Symptomatik ist hauptsächlich verbunden
mit Heparin-abhängigen Antikörpern vom IgG Isotyp1. Jedoch wurde bei einigen Patienten nur die
Anwesenheit von IgM und/oder IgA beobachtet. Dabei traten Fälle mit thrombotischen Komplikationen
auf5.
Die Testung auf PF4/H Antikörper, kombiniert mit einer entsprechenden klinischen Einschätzung, zeigt
sich als sinnvoll zur Unterstützung des Managements von Patienten mit Verdacht auf HIT. Besonders ein
negatives Ergebnis eines PF4/H Antikörper Tests kann die klinische Entscheidung für den Ausschluss
einer HIT und damit die Fortführung der Heparin-Behandlung unterstützen2. Ein schwach positives
Ergebnis für PF4/H Antikörper kann dafür sprechen, dass die Antikörper nicht Plättchen-aktivierend sind.
Ein stark positives Ergebnis dagegen kann für ein höheres Risiko einer HIT sprechen. In beiden Fällen
wird die Bestätigung durch einen funktionellen Test empfohlen. Eine klinische Neubewertung, unterstützt
durch die Laborergebnisse, sollte vor der Bestätigung oder dem Ausschluss der Diagnose stehen2.
Der HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Test ist ein Zweistufen-Chemilumineszenz-Immunoassay. Er besteht
aus Magnetpartikeln die mit PF4, welches mit Polyvinylsulfonat (PVS) komplexiert ist, beschichtet
sind. Dieser Komplex erfasst, falls vorhanden, die PF4/Heparin Antikörper der Probe. Nach Inkubation,
magnetischer Separation und einem Waschvorgang, wird ein Tracer hinzugefügt, der aus einer Mischung
von 3-Isoluminol markierten monoklonalen Antikörpern (anti-human IgG, anti-human IgA and anti-human
IgM) besteht. Dieser Tracer kann an die eingefangenen PF4/Heparin IgG, IgA und/oder IgM Isotypen
binden. Nach einer zweiten Inkubation, magnetischen Separation und einem Wasch-Schritt werden die
Reagenzien, welche die Lumineszenz-Reaktion auslösen, zugegeben. Das emittierte Licht wird in Form
von relativen Licht Einheiten (RLUs) vom optischen System des ACL AcuStar Analysensystems erfasst.
Die RLUs sind direkt proportional zur Konzentration der PF4/Heparin Antikörper in der Probe.
Der ACL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Test verwendet zur Datenreduktion eine logistische Kurvenanpassung mit 4
Parametern (4PLC) zur Erstellung einer Masterkurve. Die chargenabhängige Masterkurve ist vordefiniert
und wird im Gerät über den Barcode der Kartusche gespeichert. Durch Messung des Kalibrators
wird die vordefinierte Masterkurve in eine neue gerätespezifische 4PLC Arbeitskurve umgesetzt. Die
Konzentrationsangaben des Kalibrators sind im Barcode des Kalibratorröhrchens enthalten.
Inhalt
Die AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Packung enthält:
R
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge für 25 Bestimmungen (Art. Nr. 0009802033): 1 Kartusche enthält 1
Flasche einer Suspension aus Magnetpartikeln, die mit einem PF4/PVS Komplex beschichtet
sind; 1 Flasche Pufferlösung; 1 Flasche Tracer, bestehend aus monoklonalen anti-human IgG, IgM
und IgA Antikörpern, die mit Isoluminol markiert sind; und eine Flasche Probendiluent, das für die
automatische Vorverdünnung der Probe verwendet wird. Die Reagenzien sind in einem Phosphatoder TRIS-Puffer gelöst, der bovines Serum-Albumin, bovines fetales Serum, PF4/PVS Komplexe,
monoklonale Maus IgG, Stabilisatoren und Konservierungsmittel enthält.
C1 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 (Art. Nr. 0009802034): 1 barcodiertes Röhrchen x 1 mL einer Lösung von
humanem mAb anti-PF4-Heparin gelöst in Tris Puffer, mit bovinem Serum-Albumin, Stabilisatoren
und Konservierungsmitteln.
C2 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 2 (Art. Nr. 0009802035): 1 barcodiertes Röhrchen x 1 mL einer Lösung von
humanem mAb anti-PF4-Heparin gelöst in Tris Puffer, mit bovinem Serum-Albumin, Stabilisatoren
und Konservierungsmitteln.
Die Kalibratoren sind chargenspezifisch und können nicht mit anderen Reagenzchargen kombiniert
werden.
Warnung:
Das verwendete Humanmaterial wurde mit FDA anerkannten Methoden als nicht reaktiv für Hepatitis-BAntigen (HBsAg), Anti-HCV und HIV 1/2-Antiköper getestet. Als potentiell infektiöses Material behandeln6.
Alle Reagenzien enthalten weniger als 0,1% Natriumazid (Natriumazid kann in metallenen Abflussrohren
potenziell explosive Azide bilden). Bitte die entsprechenden Abfallbeseitigungsvorschriften beachten.
Gefahrenklasse: keine
Risikoeinstufung: keine
Sicherheitseinstufung: keine
Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.
Herstellung
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge: Mikropartikel setzen sich während des Transports und der Lagerung ab, so dass
Mischen zur Resuspendierung notwendig ist.
• Vor der ersten Verwendung der Kartusche muss diese etwa 30 Mal vorsichtig umgeschwenkt werden;
Schaumbildung vermeiden.
• Vergewissern Sie sich, dass die Flasche mit den Mikropartikeln vollständig resuspendiert ist. Falls
die Mikropartikel noch nicht vollständig resuspendiert sind, mischen Sie die Kartusche erneut durch
vorsichtiges Umschwenken.
Lagerung und Haltbarkeit
Die ungeöffneten Reagenzien und Kalibratoren sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar.
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge - Haltbarkeit im ACL AcuStar System nach Öffnen: 12 Wochen
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2 - Haltbarkeit im ACL AcuStar System nach Öffnen: 4 Stunden
Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Kalibratoren aus dem Gerät entnommen und im Kühlschrank bei
2-8°C im verschlossenen Originalgefäß aufbewahrt werden.
Bestimmungsansatz
Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem ACL AcuStar GeräteBedienerhandbuch zu entnehmen.
Probenmaterial- und Gewinnung
Plasma: 9 Teile frisches venöses Blut und 1 Teil Trinatriumcitrat-Lösung werden sorgfältig in einem
silikonisierten Glasröhrchen gemischt. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des
Deutschen Instituts für Normung – DIN 58 95 – oder dem CLSI Dokument H21-A5 zu entnehmen7.
Eingefrorene Proben rasch bei 37°C auftauen und anschließend zentrifugieren. Aufgetaute Proben
müssen innerhalb von 2 Stunden analysiert werden.
Serum: Nach der Abnahme sollte das Serum vom Blutkuchen getrennt werden. Folgen Sie den
Empfehlungen zu Lagerungsbedingungen von Proben gemäß des CLSI Dokuments H18-A38.
Proben, die sichtbare Schwebstoffe enthalten, vor der Analyse zentrifugieren.
Zusätzliche Reagenzien und Kontrollmaterialien
Die folgenden Kontrollen sind nicht in der Packung enthalten und müssen zusätzlich bestellt werden:
AcuStar HIT Kontrollen
Art. Nr. 0009802122
Qualitätskontrolle
Es werden zwei Kontroll-Level für ein umfangreiches Qualitätskontroll-Programm empfohlen9. Die
Kontrollen HemosIL AcuStar HIT Low (niedriger Bereich) und High (hoher Bereich) stehen dafür zur
Verfügung. Jedes Labor sollte für das Qualitätskontroll-Programm seinen eigenen Mittelwert und
Standardabweichung ermitteln. An Tagen, an denen Messungen durchgeführt werden, sollte spätestens
nach jeweils 8 Stunden eine Qualitätskontrolle gemessen werden. Weitere Informationen sind dem
Geräte-Bedienerhandbuch zu entnehmen. Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse
siehe z.B. Westgard et al.10. Siehe auch „Richtlinien der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung
laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen“ in der jeweils gültigen Fassung.
Standardisierung des Kalibrators und der Kontrollmaterialien
Die angegebenen Referenzwerte wurden bei mehreren Läufen am ACL AcuStar System mit spezifischen
Reagenzchargen und gegen einen internen “Haus-Standard” ermittelt.
Probenmatrix
41 gepaarte Citratplasma/Serum Proben wurden mit dem AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Test analysiert. Die
Konzentrationswerte wurden mittels einer Passing Bablok Regressionsanalyse verglichen. Dabei wurde
der Plasmaprobenwert als Referenz (X-Achse) eingesetzt und der Korrelationskoeffizient mit der Pearson
Korrelation berechnet. Slope und Intercept lagen bei 1,01 beziehungsweise 0,03, die Korrelation (r) ergab
einen Wert von 0,993.
Hinweis: Der ACL AcuStar berücksichtigt automatisch die Unterschiede in der Verdünnung bei Plasmabzw. Serumproben. Ergebnisse von Serumproben müssen nicht durch einen Umrechnungsfaktor
korrigiert werden.
Weitere Informationen sind dem im ACL AcuStar Geräte-Bedienerhandbuch zu entnehmen.
Ergebnisse
HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Ergebnisse werden in U/mL (frei gewählte Units) angegeben.
Test Bereich:
System
ACL AcuStar
0,00 – 128,00 U/mL Hinweis: Für Proben mit mehr als 128,00 U/mL werden die Ergebnisse mit >128,00 U/mL angegeben
und als > Norm markiert.
Obwohl ein positives Ergebnis mit diesem Test die Anwesenheit von Heparin assoziierten Antikörpern
anzeigen kann, bestätigt ein positives Ergebnis nicht die Diagnose einer HIT. Bei einigen Patienten
können natürlicherweise Antikörper gegen PF4 auftreten.
Einschränkungen
HIT-Ab(PF4-H) Ergebnisse auf dem ACL AcuStar werden durch Konzentrationen an Hämoglobin bis zu 500
mg/dL, Bilirubin bis zu 18 mg/dL, Triglyceriden bis zu 1250 mg/dL, Heparin (LMW und unfraktioniert) bis
zu 1 IU/mL und Rheumafaktor bis zu 800 IU/mL nicht beeinflusst.
Der Test zeigt keinen Prozone-Effekt. Das Testprotokoll beinhaltet nach der Inkubation einen WaschSchritt, der den Prozone-Effekt verhindert.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Inmunoensayo quimioluminiscente totalmente automatizado para la detección de anticuerpos IgG, IgA
e IgM que reaccionan con Factor Plaquetario 4 (FP4) cuando éste forma un complejo con la heparina,
en el sistema ACL AcuStar™. Los anticuerpos asociados a la heparina se encuentran comúnmente en
pacientes con trombocitopenia inducida por heparina o trombosis (TIH).
Sumario y principio
La trombocitopenia inducida por heparina (TIH) es una enfermedad provocada por un inmunocomplejo,
que puede causar elevada morbilidad y mortalidad en pacientes que reciben terapia con heparina1. La
TIH es una enfermedad paradójica ya que la administración de un anticoagulante para la prevención
de trombosis, puede provocar un riesgo muy elevado de complicaciones trombóticas venosas y/o
arteriales2. Se sospecha la existencia de TIH cuando los pacientes tratados con heparina no fraccionada
(HNF) o con heparina de bajo peso molecular (HBPM) muestran un descenso del recuento de plaquetas
superior al 50% del nivel basal, habitualmente entre el quinto y el décimo día del inicio del tratamiento3.
También se han descrito casos con un inicio más temprano o más tardío2. El diagnóstico rápido es muy
importante porque de confirmarse un cuadro de TIH, el tratamiento con heparina debe suspenderse y
usarse anticoagulantes alternativos.
La enfermedad de TIH de tipo II, el tipo inmunoalérgico, está causada por la aparición de anticuerpos
activadores de las plaquetas, dirigidos principalmente contra el factor plaquetario 4 (FP4), cuando éste
se encuentra formando un complejo con la heparina (FP4/H)4. Estos anticuerpos son la causa primaria
de la inducción de la trombosis venosa y arterial. La actual hipótesis de trabajo es que una exposición
temprana del individuo a los complejos de FP4, quizás inducida por factores endógenos no relacionados
con la heparina, causaría la agregación del FP4 y la activación de las células B mediante las células T.
En otra época, más tardía, estas células B podrían activarse de nuevo, transitoriamente, en presencia
de agregados de FP4 inducidos por el tratamiento con heparina2. La evolución de la patología está
principalmente asociada con los anticuerpos dependientes de heparina del tipo IgG1. Sin embargo
la presencia de anticuerpos únicamente del tipo IgM y/o IgA se ha observado en algunos pacientes,
incluyendo casos con complicaciones trombóticas5.
El análisis de anticuerpos anti-FP4/H combinado con una apropiada supervisión médica constituyen una
gran ayuda en el manejo de los pacientes con sospecha de TIH. Particularmente, un resultado negativo
de anticuerpos anti-FP4/H puede dar soporte a la decisión clínica de descartar la presencia de TIH
y de continuar con el tratamiento de heparina2. Un resultado débilmente positivo de anticuerpos antiFP4/H puede indicar que los anticuerpos no llegarán a activar a las plaquetas, mientras que una fuerte
positividad puede indicar un alto riesgo de TIH. En ambos casos, se recomienda la confirmación con un
test funcional. Antes de proceder con la confirmación o exclusión del diagnóstico de TIH debe realizarse
una nueva supervisión clínica teniendo en cuenta el resultado de las pruebas de laboratorio2.
El ensayo HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) es un inmunoensayo quimioluminiscente de dos pasos
constituido por partículas magnéticas recubiertas con FP4 en complejo con polivinil sulfonato (PVS) que
capturan los anticuerpos anti-FP4/heparina, si estos están presentes en la muestra. Tras una incubación,
separación magnética y lavado, se añade un trazador que consiste en una mezcla de 3 anticuerpos
monoclonales marcados con isoluminol (anti-IgG humana, anti-IgA humana y anti-IgM humana), que se
pueden unir a las IgG, IgA y/o IgM anti-FP4/heparina capturadas en las partículas. Tras una segunda
incubación, separación magnética y lavado, se añaden reactivos que inician la reacción luminiscente y la
luz emitida se mide con el sistema óptico del ACL AcuStar en unidades relativas de luz (RLU). Las RLU
son directamente proporcionales a la concentración de anticuerpos anti-FP4/heparina que contiene la
muestra.
El ensayo ACL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) utiliza un método de reducción de datos con una curva logística
de 4 parámetros (4PLC) para generar una Curva Maestra. La Curva Maestra se encuentra predefinida
y depende del lote, y se almacena en el instrumento a través del código de barras del cartucho. Con
la medición de los calibradores, la Curva Maestra predefinida se transforma en una nueva curva de
4PLC, la de Trabajo, específica para el instrumento. Los valores de concentración de los calibradores se
incluyen en los códigos de barras de los tubos de los calibradores.
Composición
El kit AcuStar HIT-Ab(PF4-H) está formado por:
R
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge para 25 determinaciones (Cat. No. 0009802033): 1 cartucho que contiene
1 vial de una suspensión de partículas magnéticas recubiertas con el complejo FP4/PVS, 1 vial
de tampón de ensayo, 1 vial de trazador formado por anticuerpos monoclonales anti-IgG, anti-IgM
y anti-IgA humanas marcados con isoluminol y 1 vial de diluyente de muestra que se utiliza para
la pre-dilución regular de las muestras. Los reactivos están en una solución tampón fosfato o Tris
que contiene albúmina de suero bovino, suero fetal bovino, complejo FP4/PVS, IgG monoclonal
de ratón, estabilizadores y conservante.
C1 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 (Cat. No.0009802034): 1 x 1 mL de una solución de anticuerpo
monoclonal humanizado anti-FP4/heparina en tampón Tris que contiene albúmina de suero
bovino, estabilizadores y conservante, en tubo con código de barras.
C2 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 2 (Cat. No. 0009802035): 1 x 1 mL de una solución de anticuerpo
monoclonal humanizado anti-FP4/heparina en tampón Tris que contiene albúmina de suero
bovino, estabilizadores y conservante, en tubo con código de barras.
Los calibradores son específicos del lote y no pueden usares con otros lotes de reactivos.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS:
El material de origen humano utilizado en este producto ha sido analizado por métodos aprobados por
la FDA y se ha encontrado negativo para el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) y para
anticuerpos anti-HCV y anti-HIV 1/2. Manejarlo con precaución como si fuese potencialmente infeccioso6.
Todos los reactivos contienen menos del 0,1% de azida sódica, que puede formar azidas explosivas en
contacto con tuberías de metal. Utilizar procedimientos adecuados para su desecho.
Indicaciones de peligro: Ninguna
Frases de Riesgo: Ninguna
Frases de Seguridad: Ninguna
Este producto es sólo para el diagnóstico in vitro.
Cartucho HIT-Ab(PF4-H): Las micropartículas sedimentan durante el envío y el almacenamiento, por lo que
se deben mezclar para conseguir su resuspensión.
• Cuando se utiliza el cartucho por primera vez, debe invertirse suavemente 30 veces, evitando que se
forme espuma.
Hinweis: Positive Rheumafaktor Proben können den Wert einer bereits positiven HIT Probe erhöhen.
26 Patientenproben mit diagnostiziertem Antiphospholipid Syndrom (APS) wurden mit HemosIL AcuStar
HIT-Ab(PF4-H) getestet. Alle 26 Proben reagierten negativ mit HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H). Dies zeigt,
dass der Test von APS-Antikörpern nicht beeinflusst wird.
In einer Studie zur Bestimmung der Kreuzreaktivitäten wurden 46 Proben mit den folgenden
Bedingungen mit dem AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Test untersucht: Paraproteine IgG oder IgM, erhöhte Level
von IgG oder IgM, Rheumafaktor (RF) positiv und von schwangeren Frauen (mindestens 10% multipar).
Patientengruppe
N
N (Positiv)
% Positiv HIT-Ab(PF4-H)
Rheumafaktor
10
0
0%
Erhöhte IgG und IgM
20
0
0%
Paraprotein IgG und IgM 6
0
0%
Schwanger
10
0
0%
Referenzbereiche
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2: Flüssigstabil. Mischung durch mehrmaliges Umschwenken vor der
Verwendung, um die Homogenität des Kalibrators sicherzustellen. Schaumbildung vermeiden.
Hinweis: Verwenden Sie die Reagenzien nicht, falls Sie eine Veränderung in der Erscheinung der
Komponenten des Testkits beobachten oder falls Sie eine Beschädigungen des Materials feststellen.
Aplicación
Preparación
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 08/2013
• Falls die Mikropartikel sich nicht vollständig resuspendieren lassen, verwenden Sie die Kartusche
nicht.
• Wenn die Mikropartikel resuspendiert sind, stellen Sie die Kartusche auf eine stabile Oberfläche und
entfernen Sie vorsichtig die rote Transportsicherung von der Kartusche.
• Anschließend drücken Sie die beiden seitlichen Klappen der Bohrungskappe (grauer Teil) und üben
Sie Druck auf die Oberseite der Kartusche aus bis die Kappe einrastet. Befindet sich die Kartusche
in der eingerasteten Position, sollten die seitlichen Klappen nicht mehr sichtbar sein. Drehen Sie die
offene Kartusche nicht auf den Kopf.
• Sobald die Kartusche im Instrument platziert ist, werden zusätzlich periodische Mischvorgänge im
Gerät durchgeführt.
HIT-Ab(PF4-H) - 0009802032
Die Anwesenheit von PF4/H Antikörpern in der Normalbevölkerung wird nicht erwartet. Folgende Studien
wurden durchgeführt, um den optimalen Cut-off von HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) auf dem ACL AcuStar
Analysensystem zu ermitteln.
150 Plasmaproben von offensichtlich gesunden Probanden (Blutspendern) wurden getestet. Das 95%
Referenzintervall lag bei 0,07 -1,01 U/mL. Zusätzlich wurde eine Population von 91 Patienten (61
Citratplasmaproben und 30 Serumproben) unter Heparintherapie (UFH und LMWH) ohne klinischen
Verdacht auf eine HIT untersucht. Das 95% Referenzintervall lag bei 0,04 – 2,27 U/mL.
Abschließend wurde ein Methodenvergleich mit einem Serotonin Release Assay (SRA) bei 201
Plasmaproben von Patienten unter HIT-Verdacht durchgeführt (14 SRA positiv und 187 SRA negativ). Auf
Grund der ROC-Analyse wurde der optimale Cut-off mit 1,00 U/mL bestimmt (83,1% Übereinstimmung,
95% CI = 77,2 - 88,0%).
Basierend auf diesen Studienergebnissen konnte gezeigt werden, dass bei Patienten unter
Heparintherapie HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Ergebnisse gleich oder größer 1,00 U/mL
die Anwesenheit von HIT Antikörpern anzeigen können. Die Testergebnisse sollten bei der
Diagnosestellung immer im Zusammenhang mit weiteren Informationen, wie z.B. dem klinischen Kontext,
herangezogen werden.
Testcharakteristik
Präzision:
Die Präzision im Lauf und von Tag zu Tag wurde bei mehreren Läufen bestimmt.
ACL AcuStar
Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Summe)
HIT-Ab(PF4-H) Kontrolle niedriger Bereich
0.53
4.2
6.4
HIT-Ab(PF4-H) Kontrolle hoher Bereich
2.72
3.0
6.0
HIT-Ab(PF4-H) Plasmaprobe
1.70
5.7
6.2
Methodenvergleich:
Es wurde ein in-house Methodenvergleich mit Plasma- und Serumproben unter Verwendung von zwei
kommerziell verfügbaren FDA zugelassenen ELISA Tests durchgeführt.
Die unten aufgeführten Ergebnisse basieren auf einem Cut-off von 1,00 U/mL für den ACL AcuStar. Die
Gesamtübereinstimmung für Plasma und Serum lag bei:
ELISA 1 ELISA 2
Plasmaproben
Serumproben
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Ergebnisse + 81 18
+ 45 1
- 11 156
- 4 75
Vergleichsmethode N % Co-Positivität (95% CI) Co-Negativität (95% CI) % Übereinstimmung (95% CI)
ELISA 1 (Plasma) 266
88.0% (79.6% - 93.9%)
89.7% (84.1% - 93.8%)
89.1% (84.7% - 92.6%)
ELISA 2 (Serum) 125
91.8% (80.4% - 97.7%)
98.7% (92.9% - 100.0%)
96.0% (90.9% - 98.7%)
Klinische Leistungsfähigkeit:
Es wurde eine Multicenter-Studie an drei Krankenhäusern mit 610 Proben (409 Citratplasma und 201
Serum) im Vergleich zu zwei kommerziell verfügbaren FDA zugelassenen ELISA Tests durchgeführt. Eine
Klinik verwendete nur Serumproben, in den anderen beiden kamen nur Plasmaproben zum Einsatz. Die
Ergebnisse daraus wurden kombiniert.
Die Proben waren von Patienten unter Heparinbehandlung, die HIT ähnliche Symptome zeigten und
folglich unter Verdacht standen an einer HIT zu leiden.
Die unten aufgeführten Ergebnisse basieren auf einem Cut-off von 1,0 U/ml für den ACL AcuStar:
ELISA 1 ELISA 2
Plasmaproben
Serumproben
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Ergebnisse + 16 23
+ 37 9
- 11 359
- 14 141
Vergleichsmethode N % Co-Positivität (95% CI) Co-Negativität (95% CI) % Übereinstimmung (95% CI)
ELISA 1 (Plasma) 409
59.3% (38.8% - 77.6%)
94.0% (91.1% - 96.1%)
91.7% (88.6% - 94.2%)
ELISA 2 (Serum) 201
72.5% (58.3% - 84.1%)
94.0% (88.9% - 97.2%)
88.6% (83.3% - 92.6%)
Die Ergebnisse der Präzision, des Methodenvergleichs und der klinischen Studien sind mit spezifischen
Reagenzien- und Kontrollchargen ermittelt worden.
ESPAÑOL - Revisión Prospecto 08/2013
• Comprobar que las micropartículas estén totalmente resuspendidas. Si no lo están, continuar
invirtiendo el cartucho hasta que se resuspendan completamente.
• Si las micropartículas no se resuspenden completamente, NO UTILIZAR EL CARTUCHO.
• Una vez que las micropartículas se han resuspendido, colocar el cartucho sobre una superficie sólida
y sacar con cuidado la lengüeta roja de seguridad del cartucho.
• Manteniendo el cartucho sobre la superficie sólida, presionar las dos pestañas situadas en el lateral
de la tapa perforadora (parte gris) y presionar la parte superior del cartucho hasta que quede en
posición de bloqueo. Una vez en la posición de bloqueo, las pestañas no deben ser visibles. No
invertir el cartucho abierto.
• Una vez colocado en el instrumento, el cartucho es sometido a una agitación adicional periódica.
Calibradores 1 y 2 HIT-Ab(PF4-H): Son líquidos y se deben mezclar suavemente por inversión varias
veces antes de usar para asegurar su homogeneidad. Evitar la formación de espuma.
Atención: No utilice el reactivo si observar cualquier alteración en el aspecto de los componentes del kit
o cualquier daño en el material de embalaje.
Conservación y estabilidad de los reactivos
Los reactivos y calibradores que no hayan sido abiertos son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en las etiquetas del cartucho y de los tubos si se conservan a 2-8°C.
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge - Estabilidad tras apertura en el instrumento ACL AcuStar: 12 semanas.
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2 - Estabilidad tras apertura en el instrumento ACL AcuStar: 4 horas.
Para una estabilidad óptima, retirar los calibradores del sistema y conservarlos a 2-8°C en el vial original
con tapón.
Instrumento/procedimiento
Consultar el manual de usuario del ACL AcuStar, donde se encuentran todas las instrucciones del
ensayo.
Recolección y preparación de las muestras
Plasma: Recoger nueve partes de sangre venosa recién extraída en una parte de anticoagulante
citrato trisódico. Para obtener más información sobre recolección, manejo y conservación de muestras,
consultar el documento H21-A5 del CLSI7.
Las muestras congeladas se deben descongelar rápidamente a 37°C. El ensayo se debe llevar a cabo
en un plazo de 2 horas tras la descongelación.
Suero: El suero debe separarse del coágulo después de la recolección. Seguir las recomendaciones del
documento H18-A3 del CLSI para las condiciones de almacenamiento de las muestras8.
Centrifugar las muestras que contengan partículas visibles antes de realizar el ensayo.
Reactivos adicionales y plasmas de control
Los siguientes reactivos no se incluyen en el kit y deben adquirirse por separado.
AcuStar HIT Controls
Cat. No. 0009802122
Control de calidad
Se recomiendan dos niveles de control para realizar un programa completo de control de calidad9. Los
controles HemosIL AcuStar HIT bajo y alto se han elaborado para dicho programa. Cada laboratorio
debería establecer su propio promedio y su desviación estándar, además de implantar un programa de
control de calidad para monitorizar los ensayos del laboratorio. Los controles deben analizarse como
mínimo una vez en cada turno de 8 horas de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio. Consultar
el manual de usuario del instrumento si se desea más información. Consultar la publicación de Westgard
et al. para la identificación y resolución de situaciones anormales del control de calidad10.
Trazabilidad de los calibradores y controles
Los valores indicados se establecieron mediante múltiples determinaciones con el sistema ACL AcuStar
utilizando lotes específicos de reactivos frente a un estándar interno.
Tipo de muestra
Se analizaron con el ensayo AcuStar HIT-Ab(PF4-H) 41 muestras pareadas de plasma citratado y suero.
Los valores de concentración se compararon por regresión de Passing & Bablock utilizando los valores
de la muestra de plasma como referencia (eje X) y se calculó el coeficiente de correlación de Pearson.
La pendiente y la intersección fueron 1,01 y 0,03 respectivamente, y el coeficiente de correlación (r) fue
0,993.
Atención: El sistema ACL AcuStar tiene en cuenta automáticamente la diferencia de dilución entre
muestras de suero y de plasma. Valores obtenidos para muestras de suero no tienen que ser corregidos
por un factor.
Consultar el manual de usuario del ACL AcuStar si se desea más información.
Resultados
Los resultados del ensayo HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) se reportan en U/mL (Unidades Arbitrarias
HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H)).
Rango del ensayo:
Sistema
ACL AcuStar
0,00 - 128,00 U/mL Atención: Los resultados de las muestras superiores a 128,00 U/mL serán reportados como >128,00
U/mL y marcados como >Norm.
Aunque una reacción positiva al utilizar este ensayo pueda indicar la presencia de anticuerpos
asociados a la heparina, la detección de anticuerpos, sin embargo, NO CONFIRMA el diagnóstico de
trombocitopenia inducida por heparina (TIH). Algunos pacientes pueden tener anticuerpos FP4 de origen
natural.
HIT-Ab(PF4-H) - 0009802032
Utilisation
Le réactif HemosIL HIT- Ab(PF4-H) est un dosage immunologique automatisé en chimiluminescence pour
la détection des anticorps IgG, IgA et IgM réagissant avec le Facteur Plaquettaire 4 (PF4) complexé
à l’héparine dans le plasma humain citraté et le sérum sur l’analyseur ACL AcuStar™. Les anticorps
associés à l’héparine se rencontrent le plus souvent chez les patients développant une thrombocytopénie
ou une thrombose induite par l’héparine (TIH).
Principe
La thrombocytopénie induite par l’héparine (TIH) est un syndrome induit par la formation de complexes
immuns qui peuvent entraîner morbidité et mortalité chez les patients traités par l’héparine1. La TIH
est un syndrome que l’on peut considérer comme paradoxal dans le cadre duquel un anticoagulant
est administré afin de prévenir la survenue de thrombose, mais pour lequel l’événement majeur est un
accroissement du risque de thrombose veineuse et/ou artérielle2. Une TIH est suspectée chez un patient
traité par une héparine non fractionnée (HNF) ou de bas poids moléculaire (HBPM), lorsque chez celui-ci
l’on constate une baisse de 50% du nombre de plaquettes par rapport au taux basal, et ce, typiquement
5 et 10 jours après le début du traitement anticoagulant3. Des cas de TIH plus précoces ou plus tardifs
ont été également rapportés2. Un diagnostic rapide est important car le traitement à l’héparine doit être
suspendu et une anticoagulation alternative doit être mise en place en cas de TIH confirmée.
La TIH de type II, type immunoallergique, est liée au développement d’anticorps activant les plaquettes,
majoritairement dirigés contre le Facteur Plaquettaire 4 complexé à l’héparine (PF4/H)4. Ces anticorps
sont la première cause induisant des thromboses veineuses et artérielles. L’hypothèse de travail
actuelle repose sur une exposition précoce à des complexes PF4, peut-être induits par des facteurs
endogènes non hépariniques, entraînant la formation d’amas de PF4 et une réponse immune cellules T
dépendante puis cellules B dépendante. Au cours de la vie, ces cellules B peuvent être activées lors de
la formation d’amas de PF4 induite par un traitement à l’héparine2. Le développement d’une pathologie
est le plus souvent associée à des anticorps héparine dépendants de type IgG1. Cependant, la présence
d’anticorps seulement de type IgM et/ou IgA a été également observée chez des patients, associée à
des complications thrombotiques5.
Il a été montré que la détermination des anticorps anti-PF4/H associée à une évaluation clinique
appropriée est particulièrement utile comme aide à la conduite thérapeutique chez des patients
suspectés de TIH. En particulier, une réponse négative au test de détermination des anticorps anti-PF4/H
vient à l’appui d’une décision clinique d’exclusion de la présence d’une TIH et de poursuite du traitement
à l’héparine2. Une réponse positive faible pour la présence d’anticorps anti-PF4/H peut indiquer que ces
anticorps n’activent pas les plaquettes, par contre une réponse positive forte peut être l’indicateur d’un
risque élevé de TIH. Dans chaque cas, la confirmation par un test fonctionnel est recommandée. Une
réévaluation clinique associée aux données du laboratoire pourrait être réalisée avant un diagnostic de
confirmation ou d’exclusion de TIH2.
Le réactif HemosIL AcuStar HemosIL HIT- Ab(PF4-H) est un test immunlogique en 2 étapes utilisant une
détection en chimiluminescence. Dans un premier temps, le PF4 complexé au polyvinyl sulfonate (PVS)
adsorbé sur les particules magnétiques peut capturer, s’ils sont présents, les anticorps Anti- PF4/
Héparine de l’échantillon. Après incubation puis séparation des particules magnétiques et lavage, un
traceur consistant en des anticorps monoclonaux (anti-IgG, anti-IgA et anti-IgM humaines) marqué
à l’Isoluminol est ajouté, pouvant se fixer sur les Anti- PF4/Héparine IgG, IgA et IgM capturés sur les
particules. Après une seconde incubation, séparation des particules magnétiques et lavage, 2 révélateurs
sont ajoutés à ces particules. La réaction de chimiluminescence résultante est mesurée par le système
optique d’ACL AcuStar et le résultat exprimé en unités de lumière relative (ULRs). Les ULRs sont
directement proportionnelles à la concentration d’anticorps Anti- PF4/Héparine de l’échantillon.
Le test ACL AcuStar HIT- Ab(PF4-H) utilise une courbe de calibration usine logarithmique 4 paramètres
(4PLC) correspondant à un algorithme mathématique générant une courbe usine. Cette courbe de
calibration usine est prédéfinie et spécifique du lot. Elle est mémorisée dans l’analyseur via le code
barres de la cartouche. Après analyse des calibrateurs, la courbe usine prédéfinie est transformée en
courbe de travail 4PLC spécifique de l’instrument. Les concentrations des calibrateurs sont indiquées
dans les codes barres des tubes pour calibration.
Composition
La trousse AcuStar HIT Ab(PF4-H) contient:
R
Cartouche HIT Ab(PF4-H) pour 25 déterminations (Réf. 0009802033): 1 cartouche contient 1
flacon d’une suspension de particules magnétiques adsorbées avec du complexe PF4/PVS, 1
flacon de tampon, 1 flacon de traceur consistant en des anticorps anti-IgG, anti-IgA et anti-IgM
humaines marqué à l’Isoluminol et un flacon de diluant utilisé pour la pré-dilution ou la dilution
de l’échantillon lors des réanalyses. Les réactifs sont en tampon phosphate ou Tris contenant
également de l’albumine bovine sérique, du sérum de veau fœtal, du complexe PF4/PVS, des IgG
monoclonales de souris, des stabilisants et un conservateur.
C1 HIT Ab(PF4-H) Calibrator 1 (Réf. 9802034): 1 tube code barré de 1 ml d’une solution d’Anticorps
monoclonal humain anti-PF4-Heparin en tampon Tris, contenant également de l’albumine bovine
sérique, des stabilisants et un conservateur.
C2 HIT Ab(PF4-H) Calibrator 2 (Réf. 9802035): 1 tube code barré de 1 ml d’une solution d’Anticorps
monoclonal humain anti-PF4-Heparin en tampon Tris, contenant également de l’albumine bovine
sérique, des stabilisants et un conservateur.
Les calibrateurs sont spécifiques du lot et ne peuvent pas être utilisés avec d’autres lots de réactifs.
PRECAUTIONS:
Ces réactifs contiennent des produits d’origine humaine. Ils ont été trouvés négatifs pour les anticorps
anti VIH 1/2, anti VHC et l’antigène de surface de l’hépatite B (AgHBs), en utilisant des méthodes
approuvées par la FDA. Ces réactifs sont à manipuler comme s’ils étaient potentiellement infectieux.6
Tous les réactifs du coffret contiennent moins de 0,1% d’azide de sodium comme conservateur.
L’azide de sodium peut former des azides de plomb ou de cuivre avec les canalisations du laboratoire,
susceptibles d’exploser par percussion. Pour cette raison, il est conseillé d’éliminer les réactifs suivant les
procédures en vigueur localement.
Classification risque: Aucune
Phrases risque: Aucune
Phrases sécurité: Aucune
Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Préparation
Cartouche HIT Ab(PF4-H) : Les microparticules se déposent durant le transport et le stockage et
nécessitent d’être remises en suspension.
- Lors de la première utilisation, agiter doucement la cartouche en effectuant une trentaine d’inversions
et en évitant la formation de mousse.
- S’assurer de la complète remise en suspension des microparticules. Si tel n’est pas le cas, poursuivre
l’agitation jusqu’à complète remise en suspension.
Limitaciones/sustancias interferentes
Los resultados de HIT-Ab(PF4-H) no son afectados por la hemoglobina hasta 500 mg/dL, por la bilirrubina
hasta 18 mg/dL, por los triglicéridos hasta 1250 mg/dL, por la heparina (de bajo peso molecular y no
fraccionada) hasta 1 UI/mL y por el factor reumatoide hasta 800 UI/mL.
El ensayo no muestra efecto prozona. El protocolo de ensayo tiene un paso de lavado después de la
incubación de la muestra que evita el efecto prozona.
Atención: Muestras positivas de factor reumatoide pueden incrementar el valor de un resultado ya
positivo de TIH.
Se probaron con el ensayo HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) veinte y seis muestras de pacientes
diagnosticados con Síndrome Antifosfolípidos (SAF). Todas las 26 muestras reportaron negativo con
HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H), lo que demuestra que el ensayo no es afectado por los anticuerpos SAF.
En un estudio de reacciones cruzadas, se probaron 46 muestras de las siguientes condiciones con el
ensayo AcuStar HIT-Ab(PF4-H): muestras con paraproteínas IgG o IgM, con altos niveles de IgG o IgM,
positivas de factor reumatoide (RF) y de mujeres embarazadas (al menos 10% multíparas).
Grupo de muestras
Factor reumatoide
IgG e IgM elevadas
Paraproteinas IgG e IgM Embarazadas
N
10
20
6
10
N (Positivas) % Positivas de HIT-Ab (PF4-H)
0
0%
0
0%
0
0%
0
0%
Valores esperados
En una población normal la presencia de anticuerpos FP4/H no es esperada. Se llevó a cabo una serie
de estudios para comprobar el valor de corte óptimo de HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) en el sistema ACL
AcuStar como se describe abajo.
Se probaron 150 muestras de plasma de individuos aparentemente sanos (donantes de sangre). El
intervalo de referencia 95% fue de 0,07 - 1,01 U/mL. Además, se probó una población de 91 muestras
(61 plasmas citratados y 30 sueros) de pacientes expuestos a la heparina (HNF y HBPM) sin sospecha
clínica de TIH. El intervalo de referencia 95% fue de 0,04 - 2,27 U/mL.
Finalmente, una comparación de métodos con el ensayo de Liberación de Serotonina (SRA) utilizando
201 muestras de plasma de pacientes con sospecha de TIH (14 de ellos SRA positivos y 187
SRA negativos) indicó que el valor de corte óptimo determinado por análisis ROC era 1,00 U/mL.
(Concordancia de 83,1%, 95% IC= 77,2% - 88,0%).
En base a estos estudios se ha determinado que en muestras de pacientes tratados con heparina,
los resultados de HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) iguales o superiores a 1,00 pueden indicar la
presencia de anticuerpos TIH. Los resultados del ensayo se deben utilizar juntamente con otras
informaciones, incluso el contexto clínico, para realizar un diagnóstico.
Características técnicas
Precisión:
Se evaluó la precisión intraserie y la total (serie a serie y día a día) en múltiples series.
ACL AcuStar
Media (U/mL)
CV% (Intraserie)
CV% (Total)
Control bajo HIT-Ab(PF4-H)
0,53
4,2
6,4
Control alto HIT-Ab(PF4-H)
2,72
3,0
6,0
Muestra de plasma HIT-Ab(PF4-H)
1,70
5,7
6,2
Comparación de métodos:
Se realizó una comparación de métodos internamente, con muestras de plasma y suero, utilizando 2
ensayos de ELISA aprobados por la FDA disponibles comercialmente.
Los resultados que se resumen a continuación están basados en un valor de corte de 1,00 U/mL para el
AcuStar. La concordancia global para plasma y suero fue:
ELISA 1 Muestras ELISA 2 Muestras
de plasma
de suero
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) resultados + 81 18
+ 45 1
- 11 156
- 4 75
Referencia
N
% Co-Positividad (95% IC) % Co-Negatividad (95% IC) % Concordancia (95% IC)
ELISA 1 Plasma
266
88,0% (79,6% - 93,9%)
89,7% (84,1% - 93,8%)
89,1% (84,7% - 92,6%)
ELISA 2 Suero
125
91,8% (80,4% - 97,7%)
98,7% (92,9% - 100,0%)
96,0% (90,9% - 98,7%)
Comportamiento clínico:
Se realizó un estudio multicéntrico en 3 hospitales con 610 muestras (409 plasmas citratados y 201
sueros) usando 2 ensayos de ELISA aprobados por la FDA disponibles comercialmente. Un hospital
utilizó sólo muestras de suero mientras que los otros dos hospitales utilizaron sólo plasmas y los
resultados se combinaron.
Las muestras eran de pacientes expuestos a la heparina que presentaron síntomas relacionados a la
TIH y, por tanto, con sospecha de TIH.
Los resultados que se resumen a continuación están basados en un valor de corte de 1,00 U/mL para
el AcuStar.
ELISA 1 Muestras ELISA 2 Muestras
de plasma
de suero
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) resultados + 16 23
+ 37 9
- 11 359
- 14 141
Referencia
N
% Co-Positividad (95% IC) % Co-Negatividad (95% IC) % Concordancia (95% IC)
ELISA 1 Plasma
409
59,3% (38,8% - 77,6%)
94,0% (91,1% - 96,1%)
91,7% (88,6% - 94,2%)
ELISA 2 Suero
201
72,5% (58,3% - 84,1%)
94,0% (88,9% - 97,2%)
88,6% (83,3% - 92,6%)
Los resultados de precisión, comparación de métodos y comportamiento clínico se obtuvieron utilizando
lotes concretos de reactivos y controles.
FRANÇAIS - Révision de la notice 08/2013
- Si les microparticules n’arrivent pas être remises en suspension, NE PAS UTILISER LA CARTOUCHE.
- Une fois les microparticules remises en suspension, placer la cartouche sur une surface stable, retirer
doucement la patte de sécurité rouge de la cartouche.
- La cartouche en place sur une surface stable, presser sur les deux pattes situées latéralement par
rapport à la fermeture (partie grise) et appliquer une pression au sommet de la cartouche afin que
celle-ci se mette en position de verrouillage. Une fois en position de verrouillage les pattes ne sont plus
visibles. Ne pas inverser la cartouche après ouverture.
- Une fois la cartouche mise en place dans l’instrument, des agitations périodiques sont réalisées à
bord.
HIT Ab(PF4-H) calibrator 1 & 2: les calibrateurs sont sous forme liquide prête à l’emploi et doivent être
mélangés doucement par plusieurs inversions afin de s’assurer de leur homogénéité avant utilisation.
Eviter la formation de mousse.
Note: Ne pas utiliser les réactifs si vous constatez un changement dans l’apparence des composants
contenus dans le coffret ou si l’emballage des matériels est endommagé.
Conservation et stabilité des réactifs
Conservés à 2-8°C, les réactifs et calibrateurs non ouverts sont stables jusqu’à la date de péremption
indiquée sur les étiquettes de la cartouche et des tubes.
Cartouche HIT Ab(PF4-H) - La stabilité sur l’analyseur ACL AcuStar après ouverture est de 12 semaines
HIT Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2 - La stabilité sur l’analyseur ACL AcuStar après ouverture est de 4 heures.
Pour une stabilité optimale, retirer les calibrateurs du système et les conserver hors de l’analyseur à
2-8°C dans le flacon d’origine bouché.
Procédures de test/Instrument
Se référer au mode d’emploi de ACL AcuStar pour des informations complètes sur les procédures de
dosage.
Recueil des spécimens et préparation
Plasma : 9 parts de sang fraîchement prélevé sont collectées avec 1 part de citrate trisodique. Se référer
au document CLSI H21-A5 ou au document GEHT (STV, numéro spécial, 1-40, 1998 et ses modifications
parues sur le site du GEHT en 2007) pour plus d’informations sur le prélèvement des échantillons, leur
manipulation et leur stockage.7
Les spécimens congelés doivent être décongelés rapidement à 37°C. Après décongélation le dosage doit
être réalisé dans les 2 heures.
Sérum : Après centrifugation, le sérum doit être séparé du caillot. Se référer au document CLSI H18-A3
pour plus d’informations sur le stockage des échantillons.8
Centrifuger les spécimens présentant des particules visibles avant dosage.
Réactifs auxiliaires et plasmas de contrôle
Non fournis avec la trousse, ils doivent faire l’objet d’une commande séparée.
AcuStar HIT Controls
Réf. 0009802122
Contrôle de qualité
Deux niveaux de contrôle sont recommandés pour un programme de contrôle de qualité complet.9
Les contrôles HemosIL AcuStar HIT Controls Bas et Haut sont spécifiques à ce programme. Chaque
laboratoire doit établir sa propre moyenne et déviation standard et son programme de contrôle de qualité
afin de vérifier l’état de fonctionnement de son système analytique. A titre d’exemple, les contrôles
pourraient être analysés une fois toutes les 8 heures en regard des bonnes pratiques de laboratoire. Se
référer au mode d’emploi de l’instrument pour des informations complémentaires. Se reporter à Westgard
et al pour l’identification et la résolution des contrôles hors limites.10
Traçabilité des valeurs des calibrateurs et contrôles
Les valeurs reportées dans les notices sont déterminées à partir d’essais multiples réalisés sur le
système ACL AcuStar, en utilisant des lots spécifiques de réactifs, et ce, par rapport à un Standard
Interne.
Matrice échantillon
41 paires d’échantillons de plasmas citratés / séra ont été analysées avec le réactif HemosIL AcuStar
HIT Ab(PF4-H). Les valeurs obtenues ont été comparées par la méthode de régression Passing et Bablok
en utilisant les valeurs obtenues sur plasma comme référence (axe des abscisses-X), et le coefficient
de corrélation déterminé par la méthode de Pearson. La pente et l’ordonnée à l’origine sont 1,01 et 0,03
respectivement, le coefficient de corrélation (r) est de 0,993.
Note: l’analyseur ACL AcuStar tient compte automatiquement des différences de dilutions entre
échantillons de plasma et de sérum. Aussi, les résultats obtenus pour les échantillons de sérum n’ont pas
besoin d’être corrigés par un facteur.
Se référer au mode d’emploi de l’instrument ACL AcuStar pour des informations complémentaires.
Résultats
Les résultats HemosIL AcuStar HIT Ab(PF4-H) sont reportés en U/ml (HemosIL AcuStar HIT Ab(PF4-H) unités
arbitraires).
Domaine de mesure:
Analyseur
ACL AcuStar
0,00 – 128 000 U/ml
Note : Pour les spécimens > 128 000 U/ml les résultats sont rapportés comme > 128 000 U/ml et
indiqués comme > Norm.
Une réaction positive obtenue avec ce test peut indiquer la présence d’anticorps associés à l’héparine.
Cependant, la détection des anticorps NE CONFIRME PAS le diagnostic de Thrombocytopénie induite
par l’Héparine (TIH). Certains patients peuvent avoir naturellement des anticorps anti- PF4.
Limites de la méthode et substances interférant avec celle-ci
Les résultats HIT Ab(PF4-H) sur l’analyseur ACL AcuStar ne sont pas affectés par l’hémoglobine jusqu’à
500 mg/dl, par la bilirubine jusqu’à 18 mg/dl (180 mg/l), par les triglycérides jusqu’à 1 250 mg/ dl
(12,5 g/l), l’héparine (Bas Poids Moléculaire et Non Fractionnée) jusqu’à 1 UI/ml et par les facteurs
rhumatoïdes jusqu’à 800 UI/ml.
Aucun effet de zone n’a été constaté. Le protocole du test comporte une étape de lavage après
l’incubation ce qui permet de prévenir tout effet de zone.
Note : des échantillons positifs en facteurs rhumatoïdes peuvent avoir une valeur HIT déjà positive,
augmentée.
Vingt six échantillons diagnostiqués comme ayant un Syndrome des Antiphospholipides (SAPL) ont été
testés avec le réactif HemosIL AcuStar HIT Ab(PF4-H). Ces 26 échantillons ont été trouvés négatifs avec le
réactif HemosIL AcuStar HIT Ab(PF4-H) montrant ainsi que le test n’est pas affecté par les anticorps SAPL.
Lors d’une étude de réactivités croisées, 46 échantillons comme indiqué ci-dessous, ont été testés avec
le réactif HIT Ab(PF4-H) : contenant des paraprotéines IgG ou IgM, avec des taux élevés d’IgG ou IgM,
positifs pour les facteurs rhumatoïdes, ou issus de femmes enceintes (au moins 10%) multipares.
Groupes de patients
N
N (Positifs)
% Positifs HIT Ab(PF4-H)
Facteurs rhumatoïdes
10
0
0,0%
IgG et IgM élevées
20
0
0,0%
Paraprotéines IgG et IgM
6
0
0,0%
Femmes enceintes
10
0
0,0%
Valeurs attendues
La présence d’anticorps anti PF4/Héparine n’est pas rencontrée. Une série d’études a été réalisée
afin de déterminer le cut-off optimal pour le réactif HemosIL AcuStar HIT Ab(PF4-H).sur l’analyseur ACL
AcuStar, comme décrit ci-dessous.
150 échantillons de plasma issus de donneurs apparemment sains (donneurs de banques du sang) ont
été testés. L’intervalle de référence 95% était 0,07 – 1,01 U/ml. De plus, une population 91 échantillons
(61 plasmas citratés et 30 sera) provenant de patients exposés à l’héparine (Héparine non fractionnée
et de bas poids moléculaire) sans suspicion clinique de TIH ont été également testés. L’intervalle de
référence 95% était 0,04 – 2,27 U/ml.
Finalement une comparaison de méthodes contre le Serotonin Release Assay (SRA) portant sur 201
échantillons de plasma issus de patients suspectés de TIH (14 SRA positifs et 187 SRA négatifs) indique
que le cut-off optimal déterminé par la méthode ROC, était de 1,00 U/ml (Agrément 83.1%, IC 95% =
77,2% - 88,0%).
En relation avec ces études, il a été déterminé que sur des échantillons de patients traités à l’héparine,
les résultats obtenus avec le réactif HemosIL AcuStar HIT Ab(PF4-H) supérieurs ou égaux à 1,00 U/
ml peuvent indiqués la présence d’anticorps en relation avec une TIH. Les résultats du test peuvent
être utilisés avec d’autres informations, incluant le contexte clinique, pour poser un diagnostic.
Caractéristiques et performances
Fidélité:
La répétabilité (CV% intra séries) et la reproductibilité (CV% inter séries et de jour à jour) ont été
évaluées au cours d’essais multiples.
ACL AcuStar
Moyenne (U/mL) CV%(intra séries)
CV%(Total)
Low HIT-Ab(PF4-H) Control
0,53
4.2
6,4
High HIT-Ab(PF4-H) Control
2,72
3.0
6,0
HIT-Ab(PF4-H) plasma
1,70
5.7
6,2
Comparaison de méthodes:
Une comparaison de méthodes interne a été réalisée avec des échantillons de plasma et de sérum en
utilisant des trousses commerciales ELISA agréées par la FDA.
Les résultats sont résumés ci-dessous, considérant un cut-off de 1,00 U/ml pour AcuStar. L’agrément
global (%) pour plasma et sérum était :
Test ELISA 1
Test ELISA 2
Echantillons de plasma
Echantillons de sérum
+
- +
Résultats AcuStar HIT-Ab(PF4-H)
+ 81 18
+ 45 1
- 11 156
- 4 75
Méthode N
% Co-Positivité
Co-Négativité
% Agrément
(95% CI)
(95% CI)
(95% CI)
Test ELISA 1 Plasma
266
88.0% (79.6% - 93.9%)
89.7% (84.1% - 93.8%)
89.1% (84.7% - 92.6%)
Test ELISA 2 Sérum
125
91.8% (80.4% - 97.7%)
98.7% (92.9% - 100.0%)
96.0% (90.9% - 98.7%)
Performances Cliniques :
Une étude multicentrique a été réalisée dans 3 hôpitaux et a porté sur 610 échantillons (409 plasmas
citratés et 201 sera) en utilisant 2 trousses commerciales ELISA agréées par la FDA. Un hôpital n’a
utilisé que des sera, les deux autres ont uniquement utilisés des échantillons de plasma et les résultats
ont été combinés.
Les échantillons provenaient de 3 groupes différents de patients exposés à l’héparine, montrant des
symptômes en relation avec la TIH et suspectés de TIH.
Les résultats sont résumés ci-dessous et sont basés sur un cut-off de 1,00 U/ml pour AcuStar.
Test ELISA 1
Test ELISA 2
Echantillons de plasma
Echantillons de sérum
+
- +
Résultats AcuStar HIT-Ab(PF4-H)
+ 16 23
+ 37 9
- 11 359
- 14 141
Méthode
N
% Co-Positivité
Co-Négativité
% Agrément
de comparaison
(95% CI)
(95% CI)
(95% CI)
Test ELISA 1 Plasma
409
59.3% (38.8% - 77.6%)
94.0% (91.1% - 96.1%)
91.7% (88.6% - 94.2%)
Test ELISA 2 Sérum
201
72.5% (58.3% - 84.1%)
94.0% (88.9% - 97.2%)
88.6% (83.3% - 92.6%)
Les résultats de la fidélité, la comparaison de méthodes et l’étude clinique ont été obtenus en utilisant
des lots spécifiques de réactifs et de contrôles.
T3800-4117 R1 08/2013
HemosIL® AcuStar
HIT-Ab(PF4-H) - 0009802032
ITALIANO - Revisione dell'inserto 08/2013
Utilizzo
Test immunologico in chemiluminescenza completamente automatico per la determinazione quantitativa
degli anticorpi IgG, IgA e IgM anti-PF4/Eparina sull’analizzatore ACL AcuStar™. Anticorpi associati
all’eparina si possono riscontrare in pazienti con Trombocitopenia Indotta da Eparina (HIT) o con
Trombosi.
Principio del metodo
La Trombocitopenia Indotta da Eparina (HIT) è una malattia autoimmune che può portare alla
morte pazienti in terapia eparinica1. La HIT viene considerata una “malattia paradosso” in quanto un
anticoagulante somministrato per prevenire un evento trombotico in realtà provoca una trombosi. La HIT
comporta un incremento del rischio di trombosi venosa e/o arteriosa2. La HIT si manifesta in pazienti
trattati con eparine non frazionate (ENF) o con eparine a basso peso molecolare (EBPM) con una
riduzione della conta piastrinica superiore al 50 % rispetto ai valori basali, tipicamente fra il 5° e il 10°
giorno dall’inizio del trattamento3. Casi di insorgenza precoce o ritardata di HIT sono stati comunque
evidenziati2. Diagnosticare la HIT è molto importante poiché in casi di pazienti positivi alla HIT deve
essere sospeso il trattamento in corso ed avviato un trattamento con un anticoagulante differente.
La HIT di tipo 1 è una trombocitopenia precoce, transitoria, che si risolve spontaneamente senza che sia
necessario sospendere il farmaco. Questa è la forma più comune e si riscontra nel 10-20% dei pazienti
trattati con eparina. Non ha una base immunologica e raramente si associa a trombosi periferica.
La HIT di tipo 2 è una forma di trombocitopenia su base immunologica il cui meccanismo è mediato da
anticorpi IgG eparina-dipendenti diretti contro il complesso PF4/eparina (PF4/E)4. Questi anticorpi sono
la causa primaria dell’insorgenza di una trombosi venosa o arteriosa. L’ipotesi attuale è che una precoce
esposizione ai complessi con PF4, forse indotta da fattori endogeni e non da eparina, porti ad un
clustering del PF4 e ad una modifica delle cellule B a cellule T. In seguito, le cellule B tornano ad essere
transitoriamente attivate quando i cluster di PF4 sono dovuti a trattamento con Eparina2. Lo sviluppo
della patologia è legata soprattutto ad anticorpi IgG eparina-dipendenti1. Tuttavia anche la sola presenza
di anticorpi IgM e/o IgA, osservata in alcuni pazienti, può essere associata a complicazioni trombotiche5.
Il test per la rilevazione di anticorpi anti-PF4/E associato ad una adeguata valutazione clinica, ha
dimostrato di essere molto utile come aiuto nella gestione dei pazienti con sospetta HIT. In particolare,
un risultato negativo può essere d’aiuto alla decisione clinica di escludere la presenza di HIT e quindi
continuare con la terapia eparinica2. Una debole positività del test può indicare che gli anticorpi non
sono in grado di attivare le piastrine, mentre una forte positività può indicare un elevato rischio di HIT.
In entrambi i casi si raccomanda la conferma della positività con un test funzionale. La conferma o
meno della diagnosi dovrebbe essere supportata da una valutazione clinica accompagnata da dati di
laboratorio2.
Il kit HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) è un test immunologico a due fasi in chemiluminescenza totalmente
automatizzato che utilizza delle particelle magnetiche adese con PF4 legato al polivinil-sulfonato
(PVS) per la ricerca di anticorpi diretti contro l’eparina in pazienti con sospetta HIT. Dopo una fase di
incubazione, separazione magnetica e di lavaggio, viene aggiunto un tracciante costituito da una miscela
di tre anticorpi (umano anti-IgG, umano anti-IgM e umano anti-IgA) che cattura, se presenti, gli anticorpi
anti-PF4/E isotipo IgG, IgA e/o IgM del campione. Dopo una seconda fase di incubazione, separazione
magnetica e lavaggio, sono aggiunti i reagenti (trigger) che danno l’avvio alla reazione di luminescenza
e la luce emessa è misurata come unità relative luminose (RLUs) dal sistema ottico dell’ACL AcuStar. Le
RLUs sono direttamente proporzionali alla concentrazione di anticorpi anti-PF4/E nel campione.
Il metodo ACL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) utilizza, per l’elaborazione dei dati, una curva di calibrazione a 4
Parametri (4PLC) per generare la Curva di Riferimento. La Curva di Riferimento è lotto dipendente
ed è memorizzata nello strumento attraverso il codice a barre della cartuccia. Con la determinazione
dei calibratori, la Curva di Riferimento predefinita è trasformata in una nuova Curva di Lavoro 4PLC,
specifica per lo strumento. I valori di concentrazione dei calibratori sono presenti nei codici a barre posti
sulle provette di plastica dei calibratori.
Composizione
Il kit AcuStar HIT-Ab(PF4-H) è composto da:
R
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge per 25 determinazioni (Cat. No. 0009802033): 1 cartuccia contiene 1
flacone di una sospensione di particelle magnetiche adese con il complesso PF4/PVS, 1 flacone
di tampone, 1 flacone di tracciante costituito da una miscela di anticorpi umani anti- IgG, IgA e
IgM marcati con isoluminolo, e 1 flacone di diluente campione per la prediluizione del campione. I
reagenti sono in tampone fosfato o borato e contengono una soluzione di albumina bovina serica,
siero fetale bovino, complesso PF4/PVS, IgG monoclonale di topo, stabilizzanti e conservanti.
C1 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 (Cat. No.0009802034): 1 provetta di plastica con barcode da 1 mL di una
soluzione con di anticorpi anti-PF4/E di origine umana in soluzione salina con siero fetale bovino,
stabilizzanti e conservanti.
C2 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 2 (Cat. No. 0009802035): 1 provetta di plastica con barcode da 1 mL di
una soluzione con di anticorpi anti-PF4/E di origine umana in soluzione salina con siero fetale
bovino, stabilizzanti e conservanti.
I calibratori sono lotto dipendenti e non possono essere utilizzati con altri lotti di reagenti.
ATTENZIONE:
Il materiale di origine umana contenuto nel kit è stato verificato all’origine, con metodi raccomandati dalla
FDA, l’assenza dell’antigene di superficie dell’epatite B (HBsAg) e degli anticorpi anti-HCV e anti-HIV 1/2.
Trattare come potenzialmente infetto6.
Tutti i reagenti contengono meno dello 0,1% di sodio azide che potrebbe formare azidi esplosive a
contatto con tubature metalliche. Prendere le dovute precauzioni per lo smaltimento.
Simbolo di pericolo: nessuno
Frasi di rischio: nessuno
Consigli di prudenza: nessuno
Per uso diagnostico in vitro.
Preparazione
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge: Le microparticelle contenute nel kit devono essere risospese, in quanto durante
la spedizione e lo stoccaggio, possono essersi depositate sul fondo della confezione.
• Prendere la cartuccia da utilizzare e capovolgere gentilmente per 30 volte, evitando la formazione di
schiuma.
• Assicurarsi della completa risospensione delle microparticelle. Se le microparticelle non sono
completamente risospese, continuare a capovolgere nuovamente la cartuccia per inversione fino a
verificare la totale risospensione delle particelle.
• Se le microparticelle non si risospendono, NON USARE LA CARTUCCIA.
• Una volta che le microparticelle sono state risospese, posizionare la cartuccia su una superficie solida
e rimuovere delicatamente la linguetta rossa di sicurezza.
• Mantenere la cartuccia su una superficie solida, premere le due scanalature sui lati del tappo foratore
(parte grigia) e spingere sulla parte superiore della cartuccia fino al blocco. Una volta in posizione, le
due scanalature non devono essere visibili. Non invertire la cartuccia aperta.
• Quando la cartuccia è collocata sullo strumento, viene eseguita periodicamente una miscelazione.
Antifosfolipidi confermata e nessuno di essi è risultato positivo, dimostrando così che il kit HemosIL
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) non è influenzato da questa patologia.
In uno studio di cross-reattività sono stati analizzati 46 campioni con il test AcuStar HIT-Ab(PF4-H):
contenenti paraproteine IgG o IgM, con elevati valori di IgG o IgM, positivi al Fattore Reumatoide (FR) e
da donne in gravidanza (almeno il 10% di esse hanno avuto più di una gravidanza).
Gruppo N
N (Positivi) % Positivi con HIT-Ab (PF4-H)
Fattore Reumatoide
10
0
0%
IgG e IgM elevati
20
0
0%
Paraproteine IgG e IgM 6
0
0%
Donne in gravidanza
10
0
0%
Valori attesi
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2: I calibratori sono in forma liquida e devono essere miscelati per inversione
alcune volte, assicurandosi della omogeneità prima dell’uso. Evitare la formazione di schiuma.
Nota: Non utilizzare il reagente se si osserva una differenza rispetto agli atri reagenti o se la cartuccia
risulta danneggiata.
Conservazione e stabilità dei reagenti
I reagenti e i calibratori sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta.
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge - Stabilità a bordo dei sistemi ACL AcuStar dopo l’apertura 12 settimane.
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2 - Stabilità a bordo dei sistemi ACL AcuStar dopo l’apertura 4 ore.
Rimuove i calibratori dal sistema e conservarle a 2-8°C nelle provette di plastica chiuse con il tappo per
una migliore stabilità.
Metodo
Per le metodiche e le procedure di lavoro consultare il Manuale dell’Operatore ACL AcuStar.
Preparazione dei campioni
Plasma: Aggiungere a nove parti di sangue fresco venoso una parte di trisodio citrato. Per informazioni
aggiuntive sulla preparazione, il trattamento e la conservazione dei campioni, fare riferimento al
documento CLSI H21-A57.
Scongelare rapidamente a 37°C i campioni congelati. Analizzare i campioni entro 2 ore dallo
scongelamento.
Siero: Dopo la raccolta, il siero deve essere separato dalla parte coagulata. Seguire le raccomandazioni
del documento CLSI H18-A3 sulle condizioni di conservazione dei campioni8.
I campioni che mostrano visibilmente la presenza di particelle, devono essere centrifugati prima di essere
analizzati.
Reagenti ausiliari e plasmi di controllo
I seguenti reattivi non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati separatamente.
AcuStar HIT Controls
Cat. No. 0009802122
Controllo di qualità
Per un completo programma di controllo di qualità si raccomanda l’uso di due livelli di controllo9. I controlli
AcuStar HIT Low e High sono indicati per questo programma. Ogni laboratorio deve definire i valori medi
e le deviazioni standard per i controlli utilizzati nel proprio programma di controllo di qualità. I controlli
dovrebbero essere analizzati almeno una volta ogni 8 ore nel corso delle sedute di analisi, secondo la
consueta attività di laboratorio. Riferirsi al Manuale dell’Operatore per ulteriori informazioni. Per i casi
particolari consultare all’articolo di Westgard et al10.
Calibratori e materiale di controllo
I valori indicati sono stati assegnati eseguendo repliche successive sui sistemi ACL AcuStar con
l’impiego di un lotto specifico di reagente rispetto a uno Standard Interno.
Tipo di campioni
41 coppie di campioni plasma-citrato/siero sono stati analizzati con il kit AcuStar HIT-Ab(PF4-H). I valori di
concentrazione sono stati confrontati con la regressione di Passing e Bablock, disponendo i valori dei
campioni di plasma sull’asse di riferimento (asse-X), e calcolando il coefficiente di correlazione con il
metodo Pearson. La pendenza e l’intercetta ottenute sono state rispettivamente di 1,01 e 0,03 con una
correlazione(r) di 0,993.
Nota: L’analizzatore ACL AcuStar gestisce automaticamente le differenze di diluizione fra i campioni di
plasma e siero. I risultati derivanti dall’analisi di campioni di siero non devono essere corretti da un fattore.
Riferirsi al Manuale dell’Operatore ACL AcuStar per ulteriori informazioni.
Risultati
I risultati del test AcuStar HIT-Ab(PF4-H) sono espressi in U/mL (HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) Unità
Arbitrarie).
Linearità:
Sistema
ACL AcuStar
0.00 – 128.00 U/mL NOTA: Per campioni >128.00 U/mL i risultati verranno riportati come >128.00 U/mL ed indicati con
>Norm.
Nonostante un risultato positivo di questo test indichi la presenza di anticorpi anti-PF4/E, un risultato
positivo NON CONFERMA la diagnosi di HIT. Alcuni pazienti possono avere questi anticorpi senza avere
HIT.
Non è prevista la presenza di anticorpi anti-PF4/E nella popolazione normale. Sono stati eseguiti una
serie di studi per determinare il valore di cut-off da utilizzare su ACL AcuStar.
Sono stati analizzati 150 campioni di plasma da donatori sani. Il 95% dei risultati rientra nell’intervallo
compreso fra 0.07 e 1.01 U/mL. Sono stati analizzati inoltre 91 campioni (61 plamsa citrato e 30 siero) di
pazienti sottoposti a trattamento eparinico (ENF e EBPM) non sospetti di HIT. Il 95% dei risultati rientra
nell’intervallo compreso fra 0.04 e 2.27 U/mL.
È stato poi effettuato uno studio comparativo con il metodo SRA (Serotonin Release Assay) su 201
plasmi di pazienti con sospetta HIT (14 positivi al test SRA e 187 negativi al test SRA). Da questo studio
risulta che il cut-off ottimale è pari a 1.0 U/mL. Tale cut-off è stato determinato tramite un analisi ROC
(83.1% Agreement, 95% CI = 77.2% - 88.0%).
Basandosi su questi studi è stato definito che risultati del test maggiori o uguali a 1 U/mL indicano
la presenza di anticorpi associabili alla HIT. Il risultato del test dovrebbe essere utilizzato insieme ad
altre informazioni di carattere clinico per formulare la diagnosi.
Prestazioni
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia
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2. Greinacher A. Heparin-Induced Thrombocytopenia. J Thromb Haemost. 2009;7 (suppl. 1):9-12
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4. Greinacher A et al. Heparin-associated thrombocytopenia: isolation of the antibody and
characterization of a molecular PF4-heparin complex as the major antigen. Thromb Haemost.
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heparin-induced thrombocytopenia. Br J Haematol. 1996;92(4):954-959
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Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis Assays; Approved
Guideline - Fifth Edition, CLSI Document H21-A5; Vol. 28 No. 5
8. Clinical and Laboratory Standards Institute/CLSI. Procedures for the Handling and Processing of
Blood Specimens: Third Edition, CLSI Document H18-A3; Vol. 24 No. 38
9. Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of Quality Control Specimens for Coagulation. Am. J. Clin.
Pathol. 1970;53:924-927
10. Westgard JO and Barry PL. Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity of
Analytical Process. AACC Press;1986
ACL and AcuStar are trademarks of Instrumentation Laboratory.
© 2011 Instrumentation Laboratory.
Precisione:
La precisione, nella serie e totale (tra ciclo e ciclo e tra giorno e giorno), è stata verificata eseguendo
numerosi test.
ACL AcuStar
Media (U/mL)
%CV (nella serie)
%CV (Totale)
Low HIT-Ab(PF4-H) Control
0.53
4.2
6.4
High HIT-Ab(PF4-H) Control
2.72
3.0
6.0
Campioni di plasma HIT-Ab(PF4-H)
1.70
5.7
6.2
Metodo di Confronto:
I campioni sono stati analizzati in uno studio di correlazione con due metodi ELISA disponibili in
commercio riconosciuti dalla FDA.
Per il test HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) è stato utilizzato un cut-off pari a 1.0 U/mL. I risultati sono
riportati qui di seguito.
Test ELISA 1 su Test ELISA 2 su
campioni di plasma
campioni di siero
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H)
+ 81 18
+ 45 1
- 11 156
- 4 75
Metodo di riferimento
N % Co-Positivity (95% CI)
Co-Negativity (95% CI) % Agreement (95% CI)
Test ELISA 1 Plasma
266
88.0% (79.6% - 93.9%)
89.7% (84.1% - 93.8%)
89.1% (84.7% - 92.6%)
Test ELISA 2 Siero
125
91.8% (80.4% - 97.7%)
98.7% (92.9% - 100.0%)
96.0% (90.9% - 98.7%)
Studi clinici:
É stato effettuato uno studio clinico multicentrico (tre differenti ospedali) nel corso del quale sono stati
analizzati 610 pazienti (409 campioni di plasma citrato e 201 campioni di siero) usando 2 metodi ELISA
riconosciuti dalla FDA disponibili in commercio. Un ospedale ha analizzato solo campioni di siero mentre
gli altri due ospedali hanno analizzato solo plasma.
Sono stati raccolti campioni di pazienti sottoposti a terapia eparinica che hanno mostrato sintomi di HIT.
Per il test HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) è stato utilizzato un cut-off pari a 1.0 U/mL. I risultati sono
riportati qui di seguito.
Test ELISA 1 su Test ELISA 2 su
campioni di plasma
campioni di siero
+
- +
AcuStar HIT-Ab(PF4-H)
+ 16 23
+ 37 9
- 11 359
- 14 141
Calibrator
Reference Value
ACL
AcuStar
C1
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1
U/mL
C2
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 2
U/mL
Metodo di riferimento
N % Co-Positivity (95% CI)
Co-Negativity (95% CI) % Agreement (95% CI)
Test ELISA 1 Plasma
409
59.3% (38.8% - 77.6%)
94.0% (91.1% - 96.1%)
91.7% (88.6% - 94.2%)
Test ELISA 2 Siero
201
72.5% (58.3% - 84.1%)
94.0% (88.9% - 97.2%)
88.6% (83.3% - 92.6%)
I risultati di precisione, correlazione e studio clinico sono stati ottenuti utilizzando lotti specifici di reagenti
e controlli.
Limitazioni/Sostanze interferenti
I risultati del test HIT-Ab(PF4-H) su ACL AcuStar non sono influenzati in presenza di livelli di emoglobina fino
a 500 mg/dL, bilirubina fino a 18 mg/dL, trigliceridi fino a 1250 mg/dL, eparina (ENF o EBPM) fino a 1 IU/
mL e fattore reumatoide fino a 800 IU/mL.
Il test non presenta l’effetto prozona. Il metodo prevede una fase di lavaggio dopo l’incubazione del
campione che impedisce l’effetto prozona.
Nota: La presenza di Fattore Reumatoide potrebbe alzare il titolo di campioni già positive alla HIT.
Sono stati analizzati con il kit HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) ventisei campioni con Sindrome da Anticorpi
HIT-Ab(PF4-H) - 0009802032
PORTUGUÊS - Revisão do folheto 08/2013
Utilização prevista
Imunoensaio quimioluminescente completamente automatizado para a detecção de anticorpos
IgG, IgA e IgM em plasma humano citratado e em soro que reage com o Factor plaquetário 4 (PF4)
quando complexado com a heparina no ACL AcuStar™. Os anticorpos associados à heparina estão
normalmente presentes em doentes com trombocitopenia induzida pela heparina ou com trombose
(HIT).
• Com o cartucho ainda numa superfície sólida, pressione as 2 abas colocadas lateralmente na tampa
de perfuração (parte cinzenta) e aplique pressão na parte de cima do cartucho até ficar na posição de
trancado. Nessa posição as abas não devem ser visíveis. Não inverta o cartucho aberto.
• Depois do cartucho estar colocado no instrumento, realiza-se uma mistura periódica adicional.
Resumo e príncipio
A trombocitopenia induzida por heparina (HIT) é uma doença mediada por imunomplexos, causadora de
morbilidade e mortalidade em doentes com terapêutica por heparina1. A HIT é considerada uma doença
paradoxal, na qual o anticoagulante é administrado para prevenir trombose; contudo o acontecimento
clínico mais importante na HIT é um risco aumentado para trombose venosa e/ou arterial2. Suspeitase da HIT quando os doentes tratados com heparina não fraccionada (HNF) ou heparina de baixo
peso molecular (HBPM) mostra um decréscimo das contagens de plaquetas superior a 50% da linha
de base, tipicamente entre o dia 5 e 10 a partir do início do tratamento com anticoagulante3. Também
foram notificados casos de HIT precoce e retardada2. O diagnóstico rápido é muito importante, porque o
tratamento com heparina tem de ser suspenso e têm de ser utilizados anticoagulantes alternativos, no
caso de uma HIT confirmada.
A HIT tipo II, o tipo imunoalérgico, é causado pelo desenvolvimento de anticorpos activadores de
plaquetas, na sua maioria dirigidos contra o factor plaquetário 4 quando complexados com heparina
(PF4/H)4. Estes anticorpos são a causa primária de indução de tromboses, tanto venosa como arterial.
A hipótese actual, é de que a exposição precoce aos complexos PF4, talvez induzido pelos factores
endógenos não-heparínicos, leva à formação de clusters de PF4 e a um switch da classe de anticorpos
das células B, dependente das células T. Num período posterior da vida, estas células B ficam nova
e transitoriamente activadas quando os clusters PF4 são induzidos pelo tratamento com heparina2. O
desenvolvimento da patologia está maioritariamente associado aos anticorpos dependentes da heparina
do isotipo IgG1. Contudo, a presença de apenas IgM e/ou IgA foi observado em alguns doentes, incluindo
casos com complicações trombóticas5.
Os testes aos anticorpos PF4/H combinados com uma avaliação clínica adequada, demonstrou ser
muito útil como auxiliar na gestão de doentes com suspeita de HIT.
Em particular, um resultado negativo no teste do anticorpo PF4/H pode suportar a decisão clínica de
exclusão da presença de HIT, e portanto continuar com o tratamento com heparina2. A positividade fraca
para os anticorpos PF4/H pode indicar que os anticorpos são activadores não-plaquetários, enquanto
uma positividade forte pode indicar um risco mais elevado de HIT. Em ambos os casos, é recomendada
a confirmação com um teste funcional. Uma reavaliação clínica suportada por dados de laboratório, deve
ser realizada antes da confirmação ou exclusão do diagnóstico2.
O ensaio HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) é um ensaio quimioluminescente em 2 passos consistindo
em partículas revestidas com PF4 complexado com sulfato de polivinilo (PVS) que captura, se estiver
presente, os anticorpos PF4/Heparin da amostra. Após incubação, separação magnética e um passo
de lavagem, o marcador consistindo numa mistura de 3 anticorpos monoclonais marcados com
isoluminol (IgG anti-humano, IgA anti-humana e IgM anti-humana) é adicionada e pode ligar-se com
os isotipos PF4/Heparina IgG, IgA e/ou IgM capturados nas partículas. Após a segunda incubação,
separação magnética e um passo de lavagem, os reagentes que despoletam a reacção luminescente
são adicionados, e a luz emitida é medida em unidades relativas de luz (URLs) pelo sistema óptico
ACL AcuStar. As URLs são directamente proporcionais à concentração de anticorpos PF4/Heparina na
amostra.
O ensaio ACL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) utiliza o método de redução de dados pelo ajustamento da curva de
4 parâmetros logísticos (4PLC) para gerar a curva padrão. Esta é pré-definida e dependente do lote e é
guardada no instrumento através do código de barras do cartucho com a medição dos calibradores, a
curva padrão pré-definida é transformada numa nova curva de trabalho 4PLC específica do instrumento.
Os valores de concentração dos calibradores estão incluídos nos códigos de barras do tubo.
Composição
O kit AcuStar HIT-Ab(PF4-H) consiste em:
R
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge for 25 determinations (Cat. No. 0009802033): 1 cartucho com 1 frasco
de suspensão de partículas magnéticas revestidas com complexo PF4/PVS, 1 frasco de tampão
de ensaio, 1 frasco de marcador com anticorpo monoclonal anti-humano IgG, anticorpos IgM e
IgA marcados com isoluminol e 1 frasco de diluente da amostra utilizado para a pré-diluição da
amostra. Os reagentes estão num tampão fosfato ou Tris com albumina sérica bovina, soro bovino
fetal, complexo PF4/PVS, anticorpo monoclonal IgG de ratinho, estabilizantes e conservante.
C1 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 (Cat. No.0009802034): 1 tubo com código de barras x 1 mL de solução
com anticorpos monoclonais anti-PF4-Heparina em tampão Tris com albumina sérica bovina,
estabilizantes e conservante.
C2 HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 2 (Cat. No. 0009802035): 1 tubo com código de barras x 1 mL de solução
com anticorpos monoclonais anti-PF4-Heparina em tampão Tris com albumina sérica bovina,
estabilizantes e conservante.
Os calibradores são específicos de lote e não podem ser utilizados com outros lotes de reagente.
PRECAUÇÕES E AVISOS:
O material de origem humana neste produto foi testado com métodos aprovados pela FDA sendo nãoreactivos para o antigénio de superfície da Hepatite B (HBsAg), Anti-HCV e anticorpos HIV 1/2. Manipule
como potencialmente infeccioso6.
Ambos os controlos contêm menos do que 0.1% de azida sódica, com potencial para formação de
azidas explosivas nas canalizações. Utilize os procedimentos de eliminação adequados.
Classe de risco: nenhuma
Frases de risco: nenhuma
Frases de segurança: nenhuma
Este produto destina-se a uso em diagnóstico in vitro.
Preparação
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge: As micropartículas assentam durante o transporte e armazenagem e é
necessário misturar para ressuspender.
• A primeira vez que se utiliza o cartucho, inverta-o suavemente 30 vezes evitando a formação de
espuma.
• Verifique a ressuspensão completa das micropartículas. Se as micropartículas não estão totalmente
ressuspensas continue a inverter o cartucho até as micropartículas terem sido completamente
ressuspensas.
• Se as micropartículas não estão totalmente ressuspensas, NÃO UTILIZE O CARTUCHO.
• Depois das micropartículas estarem ressuspensas, coloque o cartucho numa superfície sólida e retire
suavemente o separador vermelho de segurança de transporte do cartucho.
AcuStar HIT-Ab(PF4-H) demonstrando que o ensaio não é afectado por anticorpos APS.
Num estudo de reactividade cruzada, foram analisadas 46 amostras das seguintes situações, com
o ensaio AcuStar HIT-Ab(PF4-H) : com paraproteínas IgG ou IgM, com níveis elevados de IgG ou IgM,
positivo para o Factor reumatóide (RF), e de mulheres grávidas (pelo menos 10% multíparas).
Grupo de amostras
N
N (Positiva)
% HIT-Ab (PF4-H) Positiva
Factor reumatóide
10
0
0%
IgG e IgM Elevada
20
0
0%
Paraproteína IgG ae IgM 6
0
0%
Grávidas
10
0
0%
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados
CALIBRATOR
REFERENCE VALUE
Calibrator / Kalibrator / Calibrador / Calibrateur / Calibrante / Calibrador
Reference value / Referenzwerte / Valor de referencia / Valeur de référence / Valore di riferimento / Valor de referência
Valores esperados
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2: São líquidos e têm de ser misturados por inversão suave várias vezes
antes de usar, para assegurar homogeneidade do calibrador. Evite a formação de espuma.
Por favor note: Não use o reagente se observar alguma alteração na aparência dos componentes
incluídos no kit ou se observar algum dano nos materiais de embalagem.
Conservação do reagente e estabilidade
Os reagentes e calibradores fechados e selados são estáveis até ao fim do prazo de validade impresso
no cartucho e nos rótulos dos tubos quando conservados entre 2-8°C.
HIT-Ab(PF4-H) Cartridge – Estabilidade pós-abertura colocado no ACL AcuStar System é de 12 semanas.
HIT-Ab(PF4-H) Calibrator 1 & 2 - Estabilidade pós-abertura colocado no ACL AcuStar System é de 4 horas.
Para uma estabilidade óptima retire os calibradores do sistema e conserve-os entre 2-8°C no recipiente
original e com tampa.
Instrumento/Procedimentos do teste
Consulte o manual do operador ACL AcuStar para obter instruções completas acerca dos procedimentos
do ensaio.
Colheita da amostra e preparação
Plasma: nove partes de sangue venoso fresco colhidas numa parte de citrato trissódico. Consulte
o CLSI Document H21-A5 para obter instruções acerca da colheita de amostras, manipulação e
conservação7.
Descongele amostras congeladas rapidamente a 37°C. Depois de descongelar, o ensaio tem de ser
realizado no período de 2 horas.
Sero: A seguir à colheita, o soro deve ser separado do coágulo. Siga as recomendações do CLSI
Document H18-A3 de condições de conservação das amostras8.
Centrifugue as amostras com partículas visíveis, antes de analisar.
Reagentes adicionais e plasmas controlo
Os seguintes não são fornecidos com o kit e têm de ser adquiridos em separado.
AcuStar HIT Controls
Cat. No. 0009802122
Controlo de qualidade
Recomenda-se a utilização de dois níveis de controlo para um programa de qualidade9. Os HemosIL
AcuStar HIT Controls Low e High foram concebidos para este programa. Cada laboratório deve
estabelecer a sua média e desvio padrão, e deve estabelecer um programa de controlo de qualidade
para monitorizar os testes do laboratório. Os controlos devem ser analisados pelo menos uma vez,
em cada turno de 8 horas quando a análise estiver a decorrer, de acordo com as boas práticas de
laboratório. Consulte o manual do operador para obter informação adicional. Consulte Westgard et al
para identificação e resolução de situações fora de controlo10.
Rastreabilidade dos calibradores e materiais de controlo
Os valores notificados foram determinados ao longo de múltiplas análises no ACL AcuStar System com
lotes específicos de reagentes e contra um controlo interno.
Matriz da amostra
Foram analisadas 41 amostras emparelhadas de plasma citratado/soro com o ensaio AcuStar HITAb(PF4-H). Os valores de concentração foram comparados por regressão de Passing e Bablok utilizando os
valores de amostras de plasma como referência (eixo do X), e o coeficiente de correlação calculado com
a correlação de Pearson. O declive e a intercepção foram respectivamente 1.01 e 0.03 e o coeficiente de
correlação (r) 0.993.
Por favor note: O ACL AcuStar corrije automaticamente as diferenças de diluição entre as amostras
de plasma e soro. Os valores notificados das amostras de soro não precisam de ser corrigidas por um
factor.
Consulte o manual do operador ACL AcuStar para obter mais informação.
Resultados
Os resultados do HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) são notificados em U/mL (HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H)
Unidades arbitrárias).
Intervalo do teste:
Sistema
ACL AcuStar
0.00 – 128.00 U/mL Por favor note: Para amostras com resultados >128.00 U/mL serão notificados como >128.00 U/mL e
sinalizados com >Norm.
Embora a obtenção de uma reacção positiva com este ensaio possa indicar a presença de um
anticorpo associado à heparina, a detecção de anticorpos, contudo, NÃO CONFIRMA o diagnóstico
de trombocitopenia induzida pela heparina (HIT). Alguns doentes podem ter anticorpos anti-PF4 que
ocorrem naturalmente.
A presença de anticorpos PF4/H na população normal não é esperado. Foi realizado um conjunto
de estudos para avaliar o cut-off óptimo do HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) nos sistemas ACL AcuStar
conforme descrito a seguir:
Foram analisadas 150 amostras de plasma de indivíduos aparentemente saudáveis (dadores de banco
de sangue). O intervalo de referência a 95% foi de 0.07 -1.01 U/mL. Adicionalmente, foi analisada uma
população de 91 amostras (61 de plasma citratado e 30 soros) de doentes expostos a heparina (HNF e
HBPM) sem suspeita clínica de HIT. O intervalo de referência a 95% foi de 0.04 – 2.27 U/mL.
Finalmente, uma comparação de método com o ensaio de libertação de serotonina (SRA) em 201
amostras de de doentes com suspeita de HIT (14 SRA positivos e187 SRA negativos) indicou que o
cut-off óptimo determinado por análise ROC foi de 1.00 U/mL (concordância de 83.1% , IC 95% = 77.2%
- 88.0%).
Baseado nestes estudos foi determinado que, nas amostras de doentes tratados com heparina, os
resultados HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H) iguais ou mais elevados do que 1.00 U/mL podem indicar
a presença de anticorpos HIT. Os resultados do ensaio devem ser utilizados com outra informação,
incluindo o contexto clínico, na formação de um diagnóstico.
In vitro diagnostic medical device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de diagnostic
in vitro
Per uso diagnostico in vitro
Dispositivo médico para utilização
em diagnóstico in vitro
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número
de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de utilização
Temperature limitation
Festgelegte Temperatur
Temperatura de
Almacenamiento
Températures limites de
conservation
Limiti di temperatura
Límite de temperatura
Consult instructions for use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções de
utilização
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza autorizzata
Representante autorizado
Características de desempenho
Precisão:
A precisão intra-análise e total (análise a análise e dia a dia) foi avaliada ao longo de múltiplas análises.
ACL AcuStar
Média (U/mL)
%CV (intra-análise)
%CV (Total)
Low HIT-Ab(PF4-H) Control
0.53
4.2
6.4
High HIT-Ab(PF4-H) Control
2.72
3.0
6.0
Amostra de plasmaHIT-Ab(PF4-H) 1.70
5.7
6.2
Comparação do método:
Foi efectuada uma comparação interna do método com amostras de plasma e de soro utilizando 2
ensaios ELISA comercializados e aprovados pela FDA.
Os resultados resumidos a seguir baseiam-se num cut-off de 1.00 U/mL para o AcuStar. A concordância
total em % para o plasma e soro foram:
Amostras de plasma Amostras de soro
ensaio ELISA 1
ensaio ELISA 2
+
- +
Resultados AcuStar HIT-Ab(PF4-H) + 81 18
+ 45 1
- 11 156
- 4 75
Dispositivo Predicado N %Co-Positividade(95% IC) Co-Negatividade (95% IC) % Concordância (95% IC%)
Plasma ensaio ELISA 1 266 88.0% (79.6% - 93.9%)
89.7% (84.1% - 93.8%)
89.1% (84.7% - 92.6%)
Soro ensaio ELISA 2
125 91.8% (80.4% - 97.7%)
98.7% (92.9% - 100.0%)
96.0% (90.9% - 98.7%)
Desempenho clínico:
Realizou-se um estudo multicêntrico em 3 hospitais com 610 amostras (409 plasmas citratados e
201 soros) com 2 ensaios ELISA comercializados e aprovados pela FDA. Um hospital utilizou apenas
amostras de soro, os outros 2 hospitais utilizaram apenas amostras de plasma e estes resultados foram
combinados.
As amostras foram de doentes expostos à heparina que apresentaram sintomas relacionados com HIT e
por isso com suspeita de HIT.
Os resultados resumidos a seguir basearam-se num cut-off de 1.00 U/mL para o AcuStar:
Amostras de plasma Amostras de soro
ensaio ELISA 1
ensaio ELISA 2
+
- +
Resultados AcuStar HIT-Ab(PF4-H) + 16 23
+ 37 9
- 11 359
- 14 141
Dispositivo Predicado
N %Co-Positividade(95% IC) Co-Negatividade (95% IC) % Concordância (95% IC%)
Plasma do ensaio ELISA 1409 59.3% (38.8% - 77.6%)
94.0% (91.1% - 96.1%)
91.7% (88.6% - 94.2%)
Soro do ensaio ELISA 2 201 72.5% (58.3% - 84.1%)
94.0% (88.9% - 97.2%)
88.6% (83.3% - 92.6%)
A precisão, comparação de métodos e resultados dos estudos clínicos foram obtidos utilizando lotes
específicos de reagentes e controlos.
Limitações/Substâncias interferentes
Os resultados HIT-Ab(PF4-H) no ACL AcuStar não são afectados pela hemoglobina até 500 mg/dL,
bilirrubina até 18 mg/dL, trigliceridos até 1250 mg/dL, heparina (HNF e HBPM) até 1 IU/mL, e Factor
reumatóide até 800 IU/mL.
O ensaio não é afectado pelo efeito de prozona. O protocolo do ensaio tem um passo de lavagem depois
da incubação que evita o efeito prozona.
Por favor note: As amostras com Factor reumatóide positivo podem aumentar o valor da amostra já
positiva para HIT.
Vinte e seis amostras diagnosticadas com o Síndrome Antifosfolípidico (APS) foram testadas com o
HemosIL AcuStar HIT-Ab(PF4-H). Todas as 26 amostras foram notificadas como negativas com o HemosIL
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
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HIT-Ab((PF4-H))
Printed Insert Sheet:
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R1
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