Análisis de la viabilidad celular ... criopreservación El rendimiento de un protocolo de criopreservación de células mononucleares... periférica (CMSP) es crítico cuando interesa conservar en N

Análisis de la
criopreservación
viabilidad
celular
tras
aplicar
distintas
condiciones
de
Paternain R., Villar, V., Jauregui L., Armendáriz J., Fortuño M.A.
Biobanco Universidad de Navarra. Pamplona
El rendimiento de un protocolo de criopreservación de células mononucleares de sangre
periférica (CMSP) es crítico cuando interesa conservar en N2-líquido subpoblaciones poco
abundantes. Nuestro objetivo fue comparar distintas condiciones de criopreservación para
optimizar el protocolo según la disponibilidad de células. Utilizando CMSP excedentes de
experimentos de separación celular probamos dos concentraciones de DMSO (5% y 10%)
para congelar las siguientes cantidades de células (millones): 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 y 10. La
velocidad de congelación se investigó aplicando tres métodos: a) congelación escalonada
(Mr Frosty®), b) congelación a -80ºC y traspaso a N2-líquido y c) inmersión directa en N2 líquido. La viabilidad de las CMSP se midió mediante citometría de flujo previa incubación
de las células con el marcador de DNA To-Pro 3, y se expresó como % de células viables.
Como muestra la tabla, la congelación escalonada es el mejor método para crioconservar
CMSP. Su buen rendimiento es independiente del número de células, y no se ve
afectado por la concentración de DMSO. Si no se dispone de esta posibilidad, el paso por
-80ºC antes de la inmersión en N2 -líquido resulta menos perjudicial, y en este caso una
concentración de DMSO del 10% duplica la supervivencia celular, efecto que no se
observa en la inmersión directa en N2. El pico de viabilidad detectado congelando 10
millones de CMSP en N2-líquido puede interpretarse como un umbral mínimo de células
necesarias para la criopreservación o como un artefacto inherente a la metodología.
DMSO
5%
10%
Millones de
células
Mr. Frosty
-80º
N2 líquido
0,5
73,3
8,2
2,3
1,0
75,1
9,3
1,8
2,5
65,3
11,0
6,3
5,0
72,4
14,5
3,5
10,0
75,6
12,8
28,0
0,5
67,2
22,7
2,2
1,0
68,6
20,9
1,4
2,5
69,6
24,5
2,4
5,0
67,7
25,5
2,5
10,0
74,8
30,5
13,6