Diagnóstico de th >

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
Hemograma
Morfología de los eritrocitos: Marcada
anisocitosis con abundantes micro y
macrocitos. Marcada poiquilocitosis.
Marcada hipocromía. Targets cells,
leptocitos. Policromatofilia. Regular
cantidad de esquistocitos. Punteado
basófilo.
Anemia de Cooley
Diagnóstico molecular
anemia de Cooley
En Rosario y zona de influencia los
pacientes son homocigotas o doble
heterocigotas para alguna de las siguientes
mutaciones:
IVS1-1 GA, IVS1-6 TC, IVS1-110 GA,
IVS2-l GA , CD 39 CT, IVS2-745 CG,
que son las más frecuentes en la zona del
Mediterráneo.
Dosaje de Hb F
Aumentada o disminuída

MÉTODO DE DESNATURALIZACIÓN ALCALINA
Singer y Chernoff
Betke
V.N: menor de 2%
Ligeramente aumentada: menor de 5%(HPFH
heterocelular),Th menor, embarazo
Muy aumentada: 20-50-90% heterocelular (Anemia
de Cooley, βδ Th, RN, neonato.
Muy aumentada pancelular: HPFH
Test de Kleihauer y Betke
adulto normal
Test de kleihauer y Betke
adulto normal
HPFH heterocelular
Indices Hematimétricos en Beta-Talasemia
Indices en
Normal
COOLEY
PORTADOR
sangre
periférica
VCM fl
HCM pg
Hb g/dl
Hombre
Mujer
ß-Tal Mayor
ß-Tal Minor
89.1±5.01
87.6±5.5
50-70
<79
30.9±1.9
30.2±2.1
12-20
<27
15.9±1.0
14.0±0.9
<7
: 11.5-15.3
: 9.1-14
Talasemia intermedia
Se sospecha en individuos que presentan
anemia moderada a una edad mas tardía
y que raramente requieren
transfusiones.
Los individuos con Talasemia Intermedia
tienen riesgo de sobrecarga de hierro
secundaria a absorción intestinal
aumentada como consecuencia de la
eritropoyesis inefectiva.
Talasemia intermedia
Hb entre 7 y 10 g/dl
Talasemia intermedia
Hb: 7-10g /dl
VCM disminuído
HCM disminuída
Hb A2 aumentada (5%), para las doble
heterocigosis u homocigosis de formas
leves de beta+ Th, Hb F aumentada: 3070%
Si se trata de  talasemias aumenta la
Hb F pero no la Hb A2.
Talasemia intermedia
El genotipo puede ser variable:
Beta+/beta+ (negros)
Betaº/(  Lepore)
Otros
-Talasemia
menor.
Se caracteriza por eritrocitosis
microcítica con anemia leve, rara
vez se aprecia esplenomegalia, su
diagnóstico suele ser casual y
facilitado por el empleo de
analizadores hematológicos que
suministran de forma sistemática
los valores de VCM y HCM.
-talasemia
menor
-talasemia menor.
diagnóstico
º Th:
Hb: 8-10 g/dl
GR: eritrocitosis
VCM y HCM disminuídos
Hb A2: 4,5-5,5%
Hb F: 0,5-4%
Hb A: 90-95%
Genetica molecular
·
Análisis de mutaciones conocidas: las ßtalasemias pueden ser causadas por mas de
200 mutaciones en el gen beta. Comúnmente
las
mutaciones
son
detectadas
por
procedimientos basados en PCR. Los métodos
mas usados son reverse dot blot o
amplificación primer-específica con un set
de primers complementarios a las mutaciones
mas frecuentes en la población de la cual el
individuo afectado es originario
Beta-Talasemia
Genética Molecular: Métodos Clínicos
PCR-ARMS
Mutación 0 IVS-II-nt 1 (634 bp)
861 pb
634 pb
Calle 1: blanco de H2O (control de contaminación).
Calles 2 y 3: individuo normal (A/ A) con primers normal y mutado respectivamente.
Calle 4: marcador de peso molecular (100 bp ladder). La banda más brillante corresponde
a 500 pb.
Calles 5 y 6: individuo heterocigoto ( A/ T) con primers normal y mutado
respectivamente.
δβ Talasemias

δβ deleción

δβ Lepore-fusión

δβ HPFH
δβ Talasemias



Las delta-beta talasemias heterocigotas presentan
un cuadro hematológico y clínico similar a las beta
Th heterocigotas.
Presentan Hb F aumentada 5-15% (heterocelular),
la Hb A2 está normalLas delta-beta talasemias homocigotas o doble
heterocigotas beta-delta/ beta Th presentan un
cuadro clínico y hematológico de Th intermedia o
mayor con Hb F muy aumentada y Hb A2
disminuída.
Persistencia hereditaria de Hb
fetal- HPFH


Es más frecuente en la etnia nergra, sólo el
homocigota presenta Hb F de 100%
pancelular y VCM disminuído.
El heterocigota puede no presentar anemia
pero presenta HB F de alrededor del 30%
siempre de distribución pancelular.
δβ talasemias-Lepore
La Hb Lepore corre como la Hb S


En el heterocigota la morfología yel
hemograma son similares a la beta Th
menor, pero presentan entre 8-15 % de Hb
Lepore, Hb F algo aumentada 5-7%, Hb A2
disminuída.
El homocigota clínica y hematológicamente
es una Th mayor, con Hb Lepore de 2530%, el resto es Hb F.
Alfa talasemias.
La patología molecular de las alfa
talasemias está determinada por una serie
heterogenea de deleciones de diversa
extensión:

º elimina todo el complejo de genes alfa
de uno o de los dos cromososmas

+ elimina uno de los genes alfa , parte
de los mismos o puede ser una mutación
puntual.

Deleciones causantes de  -Talasemia
- 70 kpb
5’HVR HS-40
0 kpb
2 inter HVR
10 kpb
1  
1
20 kpb
2
1
1
30 kpb
3’HVR
5’
3’
3.7
-
-3.7
4.2
-
-4.2
5.2
-
-5.2
MED
---MED
SEA
---SEA
THI
---THI
BO
---BO
60 kpb
230 kpb
DUCH
---DUCH
35 kpb
30 kpb
Mutaciones Puntuales causantes de  -Talasemia
- 70 kpb
5’HVR HS-40
0 kpb
10 kpb
2 inter HVR 1
1 2
20 kpb
2
1
30 kpb
3’HVR
1
1) Procesamiento del ARNm
Mutaciones en el sitio de Splicing
CAP
Señal POLI A
1 31
32 99
100
Señal de Poliadenilación
141
5'
3'
CAT ATA
box
box
2) Traducción del ARNm
Mutaciones en el codon de iniciación
Mutaciones en el codon de terminació
Nco
Hph


T Saudí

CS
Cambio del marco de lectura
Mutación sin sentido
3) Inestabilidad Postranscripcional
Secuenciación:
nueva mutación IVS2-142
GEN 22
Patient:
cctgggccgcactgaccctcttctctgcacaactc
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
Normal sequence: cctgggccgcactgaccctcttctctgcacagctc
Alfa talasemias.
Genotipo 
Hg
g/dl
Hties
X1012/l
VCM
fl
HCM
pg
Hb H
%

15.5 / 14.0
5.20 / 4.60
90
30
0


14.3 / 12.6
5.42 / 4.88
81.2
26.2
0

14.5 / 12.5
5.76 / 5.21
75.5
24.8
0

 

13.9 / 12.0
5.98 / 5.30
71.6
22.9
0
  
13.7 / 12.1
6.28 / 5.65
69.1
21.7
0
 
 
12.3 / 10.6
5.78 / 5.10
66.1
21.0
0

11.2 / 9.9
5.82 / 5.21
60.5
18.9
10.5
 

11.1 / 9.4
6.10 / 5.14
64.8
19.1
7.0
10.5 / 8.5
5.10 / 4.68
68.0
18.7
22.3


 
Alfa talasemias.
Deleción alfa 3,7 ó 4,2
Talasemia alfa
Sìndrome
Genotipo
Clínica
RN
Despues del
1° año
Hidrops
Fetal
- - / - -
Muerte fetal
Anemia grave
HbBart>80%
HbH
HbPortland
Enfermedad
por Hb H
- - / -a
Anemia
Hemolitica
crònica
Hb Bart 20 a HbH 5-20%
40%
Trazas de
Bart
Talasemia
Menor
--
/aa
-a / -a
Anemia leve
O inexistente
HbBart 220%
Portador
silente
-a /aa
Sin alteraciones
Clínicas ni
hematologicas
Ninguna
Enfermedad de la Hb H
Enfermedad de la Hb H
Alfa Talasemias
- -/- - Alfa talasemia mayor
Alfa Talasemias
- -/- - Alfa talasemia mayor
Alfa Talasemias
Diagnóstico
Hemograma: cursan sin anemia pero el VCM está
siempre disminuído, aún en la deleción  3,7
heterocigota.
La morfología es variable y característica para
algunas formas de  Th.
Sólo las formas -/ - y las - -/   presenten
morfología más notoria, sin PB, y a veces es
posible detectar un cuerpo de inclusión cada varios
campos.
En los casos leves es imprescindible efectuar la
biología molecular, ya que el estudio de Hb
generalmente es normal
Deleción -3.7
ASO-PCR
1,76 kpb
0,5 kpb
1,76 kpb
0,5 kpb
1
3
4
6
y
y
y
y
2
8
5
7
control Heterocigosis -
marcador 100 bp ladder
Cordón homocigota - 3.7
Padre - 9 y 10 Madre.
3.7
Alfa Talasemias.
-/- homocigota +
- -/ heterocigota º
Enfermedad Por Hb H
Enfermedad Por Hb H: --/-
PARÁMETROS HEMATIMÉTRICOS
Hb
Hb H
g/dl
%
G.R.
Hb F
mm3
%
Hcto
%
(fl)
(pg)
6,6
3.68x106
23
62
17,9
16
VCM
HCM
MORFOLOGÍA ERITROCITARIA
1,8 %
CHCM
(g/dl)
28.9
Hb A2
%
0,8
ENFERMEDAD POR Hb H
Beta-Talasemia
ASOCIACIÓN
DELECIÓN -3.7
DE
-TALASEMIA
HETEROCIGOTA
GR
Hb
Hto
VCM
HCM
CHCM
(1012/l)
(g/dl)
(%)
(fl)
(pg)
(g/dl)
4.9
11,2
37
75
22,8
30,3

039 / -3,7
1
2
3
4
5
6
1,76 KB
CON
Muñoz Rojas et. al.
Protocolo diagnóstico anemias microcíticas
Medicine 2008; 10(20):1363-5
ABORDAJE MÉDICO (Unidades de
Atención a pacientes con Talasemia)
Laboratorio
Convencional Investigació
Investigación
Banco de Sangre
HEMATÓLOGO
Diagnóstico
Tratamiento y Prevención
Transfusió
Transfusión
Tratamiento con Desferal
u
otros medicamentos
Vacunas
Apoyo Médico
Enfermeras Especializadas
Dietista
Dentista
MEDICOS ESPECIALISTAS
(Tratamiento y prevenció
prevención)
Endocrinó
Endocrinólogo
Cardió
Cardiólogo
Oftalmó
Oftalmólogo
Psicó
Psicólogo
Genetista
(Asesoramiento Gené
Genético)
CIBO-GENETICA
2004

MUCHAS GRACIAS