Diapositiva 1

CROMOSOMAS CONDENSADOS
PREMATURAMENTE PARA LA DOSIMETRÍA
BIOLÓGICA EN CUBA
Ivonne Romero
Ana Ilsa Lamadrid
Jorge Ernesto González
Tania Mandina
Omar García
Centro de Protección e Higiene de las Radiaciones (CPHR)
Para proteger tu mundo
INTRODUCCIÓN
El ensayo Anillos en
Cromosomas Condensados
Prematuramente (PCC-R)
Aumenta las posibilidades de
la dosimetría citogenética
 Elimina las desventajas del ensayo del Dicéntrico
 Aumenta el intervalo de estimación de dosis hasta 20Gy
Para proteger tu mundo
OBJETIVO
Presentar el estado de la implementación en el Servicio de
Dosimetría Biológica de Cuba de los ensayos PCC-R mediante
sustancias químicas (PCC-R-ch) y por fusión (PCC-R-f).
 Curvas dosis – respuesta con radiación gamma y
neutrones;
PCC-R-ch
 La modelación de irradiaciones parciales in vitro en
proporciones desde 10 a 90%, asociada al cálculo de una
D0;
 Curvas dosis – respuestas con 40 y 42 horas hasta 10Gy;
PCC-R-f
Curvas dosis – respuesta con radiación gamma (linfocitos
aislados y sangre total 8 y 24h).
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Curvas dosis – respuesta (gamma y neutrones)
0 Gy
IRRADIACIÓN
reparación
[1, 2]
 γ 60Co (5 – 25 Gy)
 neutrones (0.49 MeV) 1 – 26.1 Gy
2h 37ºC
Cultivo linfocitos (48h)
24h Colcemid
47h 50 nM Calyculina A
Tratamiento Hipotónico y Fijación
Extensión y Tinción
Cuantificación de PCC-Rch al microscopio
[1] Lamadrid, A.I et al J. Radiat. Res. 57,
pp.1-6 (2007).
[2] Lamadrid, A.I., et al J. Radiat. Res. 52,
pp.531–535 (2011).
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Curvas dosis – respuesta (gamma y neutrones)
[1, 2]
Frecuencia PCC-R-ch / cél
Ajuste lineal de la curvas dosis - respuesta
0,6
0,5
Y=α•D
α =0.059 ± 0.003
0,4
0,3
Y=c+α•D
c = 0.0005 ± 0.0005
α = 0.021 ± 0.0007
0,2
0,1
0
0
5
10
15
Dosis (Gy)
20
25
neutrones
gamma
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Disminución tiempo de cultivo [3]
0 Gy
IRRADIACIÓN
reparación
 γ 60Co (1 – 10 Gy)
2h 37ºC
Cultivo linfocitos (40, 42 horas)
24h Colcemid
39, 41 h 50 nM Calyculina A
Tratamiento Hipotónico y Fijación
Extensión y Tinción
Cuantificación de PCC-Rch al microscopio
[3] Romero, I. et al. Radiat. Prot.
Dosimetry 163 [4] pp. 424–429 (2015),
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Disminución tiempo de cultivo [3]
Frecuencia PCC-R-ch / cél
Ajuste lineal – cuadrático de la curva dosis - respuesta
0,30
Y  c    D    D2
0,25
c = 0.0006 ± 0.0007
α = 0.0104 ± 0.0017
β = 0.0017 ± 0.0003
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0
1
2
3
4
5
6
Dosis (Gy)
7
8
9
40 + 42 horas
10
48 horas
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Irradiación Parcial [4]
Irradiación-γ 60Co
5 – 25 Gy
0 Gy
reparación
2h 37ºC
Simulación de la Irradiación Parcial (SIP)
Sangre
no
irradiada
Sangre irradiada
1, 5, 7.5, 10, 15, 20 Gy
10
25
50 % Sangre irradiada / dosis
75
90
100
[4] Romero, I. et al. J. Radiat. Res. 54, pp.863-871 (2013)
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Irradiación Parcial [3]
Cultivo linfocitos (48h)
24h Colcemid
47h 50 nM Calyculina A
Tratamiento Hipotónico y Fijación
Extensión y Tinción
Cuantificación de PCC-Rch al microscopio
Análisis estadístico
[4] Romero, I. et al. J. Radiat. Res. 54, pp.863-871 (2013).
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Irradiación Parcial [3]
Análisis estadístico
Identificación de SIP
Sobredispersión si u > 1.96
 88% de las identificaciones de SIP fueron correctas.
 Es posible distinguir, mediante el ensayo PCC-R, entre la
irradiación total y parcial simuladas utilizando el valor u.
[4] Romero, I. et al. J. Radiat. Res. 54, pp.863-871 (2013).
Para proteger tu mundo
PCC-R-ch → Irradiación Parcial [3]
Análisis estadístico
Metodología de Matsubara
Valor D0
0 – 20 Gy
10 – 100 %
1
ln (S)
0.37
0,1
D0 = 10.9 Gy
0,01
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
Dosis (Gy)
[4] Romero, I. et al. J. Radiat. Res. 54, pp.863-871 (2013).
Para proteger tu mundo
PCC-R-f → Curvas dosis – respuesta [5]
0 Gy
γ 60Co
5 – 20 Gy
Linfocitos aislados
reparación 37ºC
8h
24h
Sangre total
γ 60Co
5 – 20 Gy
reparación 37ºC
8h
24h
Linfocitos aislados
Fusión (células CHO + PEG, 37ºC, 50-60 min)
[5] Lamadrid, A. I. et al. Mutat. Res, 757, pp.45-51 (2013).
Para proteger tu mundo
PCC-R-f → Curvas dosis – respuesta [5]
Cuantificación de PCC-Rf
[5] Lamadrid, A. I. et al. Mutat. Res, 757, pp.45-51 (2013).
Para proteger tu mundo
PCC-R-f → Curvas dosis – respuesta [5]
Frecuencia PCC-R-f / cél
2,00
1,60
1,20
0,80
0,40
0,00
0
5
10
15
20
Dosis (Gy)
Irradiación de sangre total
8h reparación
24h reparación
Irradiación de linfocitos
8h reparación
24h reparación
[5] Lamadrid, A. I. et al. Mutat. Res, 757, pp.45-51 (2013).
Para proteger tu mundo
CONCLUSIONES
Se obtuvieron las curvas dosis – efecto los ensayos PCC-R-ch y
PCC-R-f .
En el ensayo PCC-R-ch es posible reducir del tiempo de cultivo
hasta 40 horas.
Con el ensayo PCC-R-ch es posible identificar la irradiación parcial,
y estimar la fracción inicial de células irradiadas, y la dosis que recibió
dicha fracción.
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Preguntas?
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Gracias por su atención !
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