LABORATORIO DE QUIMICA FARMACÉUTICA

LABORATORIO DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
Inhibición plaquetaria:
1. Preparar disoluciones de los derivados del ácido salicílico en el vehículo considerando las
siguientes concentraciones:
M: 6, 60, 180, 600
Vehículo: DMSO al 0.05% en agua destilada
2. Centrifugar el plasma (PRP) en tubos de plástico durante 10 min a 4500 rpm. Obtener el
sobrenadante que será el plasma pobre en plaquetas (PPP).
3. Preparar las muestras considerando el volumen de la celda para espectrofotómetro que se utilice
en la práctica. Por ejemplo, para una celda de 1 ml de capacidad se consideran los siguientes
volúmenes,
0.8 ml PRP + 0.1 ml de disolución problema
4. Agregar 0.15 mL del agente agregante* (Acido araquidónico en el vehículo (150g/ml))
5. Incubar por 15 min a 37°C, bajo agitación constante
6. Colocar la mezcla en una celda espectrofotométrica. Leer %T a 697 nm
Utilizar el PPP para ajustar a 100%T=0 Absorbancia
Blanco: 0.75 mL PRP + 0.1 mL de vehículo + 0.15 mL del agente agregante
Consideraciones: bC= log (1/T)
Bibliografía:
D.M. BUITRAGO, G. RAMOS, J. RINCÓN y M. GUERRERO, ACTIVIDAD ANTIAGREGANTE DEL EXTRACTO
ETANÓLICO DE Solanum tuberosum EN PLAQUETAS HUMANAS. VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE
QUÍMICA FARMACÉUTICA , 14 (1), págs. 49-54 (2007).
LABORATORIO DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
RETRACCIÓN DEL COÁGULO
Principio Básico
La retracción del coágulo en sangre totalmente coagulada puede dar información sobre el número y la
función plaquetaria. Cuando el coágulo se retrae, el suero es liberado y se puede medir el grado de
retracción del coágulo.
Equipo
Tubos de ensayo de vidrio
Varillas de madera
Baño
Método
1. Preparar disoluciones de los derivados del ácido salicílico en el vehículo considerando las
siguientes concentraciones:
M: 6, 60, 180, 600
Vehículo: DMSO al 0.05% en agua destilada
2. Obtener 8-9 mL de sangre fresca (combinado)
3. Colocar en tubos de ensayo:
a) 1 mL de sangre + 0.1 mL de disolución problema
b) 1 mL de sangre + 0.1 mL de DMSO al 0.05% (blanco)
4. Incubar por 1:10 horas a 37ºC. Observe la formación de un coágulo firme.
5. Medir la distancia desde la base del tubo al menisco de la muestra (D1). Retirar cuidadosamente el
coágulo con una varilla de madera dejando el suero liberado del coágulo en el tubo.
Coágulo
Varilla de madera
6. Medir la distancia entre la base del tubo y el menisco del suero (D2).
7. Determinar el porcentaje de retracción del coágulo: %Retracción del coágulo=(D2/D1)X100
Bibliografía:
1. DIAGNÓSTICO DE LA HEMOFILIA Y OTROS TRASTORNOS DE LA COAGULACIÓN MANUAL DE
LABORATORIO. Steve Kitchen y Angus McCraw. Preparado por EL COMITÉ DE CIENCIAS DEL
LABORATORIO DE LA FEDERACIÓN MUNDIAL DE HEMOFILIA. 20002. LABORATORY HAEMATOLOGY: AN ACCOUNT OF LABORATORY TECHNIQUES. Chanarin I (Ed.).
Churchill Livingstone, Edinburgh, 1989.
LABORATORIO DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
RETRACCIÓN DEL COÁGULO UTILIZANDO PLASMA RICO EN PLAQUETAS.
Equipo
Tubos de ensayo de vidrio
Varillas de madera
Baño
Método
1. Preparar las siguientes disoluciones:
1a) Solución salina isotónica (SSI) 0.9%: 0.9 g de NaCl en 100 mL de agua
1b) Solución 0.28M de cloruro de calcio en SSI: 0.78025g de CaCl2 y aforar con 25mL de solución
salina isotónica al 0.9%.
2. Preparar disoluciones de los derivados del ácido salicílico en el vehículo considerando las
siguientes concentraciones:
M: 60, 120, 180, 240 y 300
Vehículo: DMSO al 0.05% en agua destilada
3. Colocar en tubos de ensayo:
3a) 0.75 mL de plasma rico en plaquetas (PRP) + 0.1 mL de disolución problema
3b) Blanco: 0.75 mL de PRP + 0.1 mL de DMSO al 0.05% (blanco)
4. Agregar a cada tubo, incluido el blanco, 0.15 mL de la solución de CaCl2 0.28M en SSI al 0.9%
5. Incubar por 20 minutos a 37ºC. Observe la formación de un coágulo.
6. Medir la distancia desde la base del tubo al menisco de la muestra (D1). Retirar cuidadosamente el
coágulo con una varilla de madera dejando el suero liberado del coágulo en el tubo.
Plasma solidificado
Varilla de madera
7. Medir la distancia entre la base del tubo y el menisco del suero (D2).
8. Determinar el porcentaje de retracción del coagulo: %Retracción del coagulo=(D2/D1)X100
Bibliografía:
1. DIAGNÓSTICO DE LA HEMOFILIA Y OTROS TRASTORNOS DE LA COAGULACIÓN MANUAL DE
LABORATORIO. Steve Kitchen y Angus McCraw. Preparado por EL COMITÉ DE CIENCIAS DEL
LABORATORIO DE LA FEDERACIÓN MUNDIAL DE HEMOFILIA. 20002. LABORATORY HAEMATOLOGY: AN ACCOUNT OF LABORATORY TECHNIQUES. Chanarin I (Ed.).
Churchill Livingstone, Edinburgh, 1989.