ORIG I NAL ES - Revista Clínica Española

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3M
REVI STA CLINICA ESPAÑOLA
ORIG I NAL ES
LU ODIAGNOSTICO POR LA REACCION DE
F IJACION DEL COMPLEMENTO CON SUSPENSION DE TREPONEMAS DE REITER (") )
F . MORENO DE VEGA.
Instituto Lloren te. Director: Dr. J. Ma:i.ls. Madrid.
Si bien los progresos del suerodiagnóstico de
la sífilis han sido muy considerables a partir
de los trabajos de WASSERMANN en 1906, culminando en las aportaciones de PANGBORN con
la ol:tención del fosfolípido denominado cardiolipín, todo lo conseguido ha estado comprendido dentro de la investigación de las reaginas;
es decir, f uera del mecanismo inmunológico genuino. No obstante, el intento de lograr pruebas específicas no ha sido nunca abandonado,
habiéndose trabaj ado much o tratando de descubrir ant icuerpos como las aglutininas, por
ejemplo, sin haber obtenido resultados aprovechabies.
SACHS1 KLoPSTOCK y WEIL1 en 1927, sostuvieron lo que modernamente va adquiriendo
consistencia: que los treponemas disgregados
en el organismo del enfermo liberan sustancias
generadoras de anticuerpos genuinos compuest as de un hapteno, asemejable a los ext ractos
lipoideos al uso, y de u na prot eína proveniente
del suero. EAGLE y HoELTZER señalan, como generador del a nticuerpo específico, un partígeno
lipoideo del treponema, el cual existe, indudablemente, en el treponema pálido-, comprobándose, por los autores citados y por la escuela
italiana, en la estirpe treponémica de Reiter.
En el hallazgo de aglutininas puso gran empeño TOURAINE1 sin resultados positivos. Mas
TURNER (1931), si no logró triunfar en esto, sí
consiguió sistematizar las condiciones óptimas
para atenuar l.os t reponemas virulentos de la
estirpe Nich ols, demost rando que la mezcla de
éstos con el suero problema y el complemento,
inoculada intradérmicamente a l conejo, producía o no chancro, según que el suero examina do
no contuviera anticuerpos o f uera porta dor de
ellos, y abrió, con ello, un camino a sus discípulos NELSON y MAYER1 que han puesto a punto
una prueba llena de interés científico y que permite, por la mezcla de los tres factores que intervenían en la pr ueba propugnada por su maestro, demostrar la existencia de anticuerpos inmovilizantes. La prueba de Nelson-Mayer pare ce ser la más específica que se conoce.
Existe una prueba biologica de gran interés,
セオケ@
・ セ ー・」■ヲゥ。@
y sensible y que está muy poco
difundida. Consiste en la reacción de fijación
( • ) Comunicación presen t a da a la Sociedad de Mlcrobió·
Jogos E epatloles.
.
del complemento ut ilizando como antígeno
suspensión de treponemas de la llamada eセ。@
r;e de Reiter, germen que está privado de
patógeno, pero que conlleva partígenos ゥュセ@
er
lógicamente superponibles a los de la ・ウセッᆳ
patógena. Este suerodiagnóstico fué ーイッオセQ@
por GAEIITGENS en 1929. La estirpe de Re¡·tsc
' MUSTER , f ue' a1s
· lada en 1922 por w
er·
segun
. ,
As.
SERMANN y F ICKER denommandose enton .
'
d e Fi, e k er, y cua1_1do se r;osesionó
.
est 1rpe
de 」・セ@eUa
reitセ
Q @ paso a ser prop1edad del Instituto Sue.
roterap1co de Saxe.
tiene, se.
, La estirpe treponémica en 」オセエゥ￳ョL@
gun EAGLE y HocAN, y, tamb1cn, según no;.
otros, diferencias morfológicas con la ・ウエセ@
genuiha obtenida del chancro, aparte la difert:·
cia de patogenicidad señalada anteriormente.
Tambén se diferenciarían en que el t. pálido:
destruye la diastasa y el t. Rcitcr, no.
GAEHTGEXS admitió que en el suero sifilítir
había una reagina no específica que fijaba e
complemento en presencia de los extractos de
órganos y un anticuerpo específico que lo haría
En presencia del treponema de Reitez. Como tes.
timonio de tal aserto, adujo los siguientes hechos:
a) Los sueros sifilítico::. calentados a 63 tt:
accionan positivamente con e l antígeno trep&
némico de Reiter, pero no con los extractos di
órganos.
b) Los animales debidamente inmunizadOi
con suspensiones de treponem as de Reiter, os·
t en tan en su sangre sustancias que fijan el com·
plemento con dichas suspensiones, pero no con
extract os de órganos.
e) Si se a bsorbe un suero sifilítico con sus·
pens ión de t r eponemas de R eiter, deja 。アオセ@
de fi jar el complemento con dicha ウ オ ウー・ョゥ￳セ@
haciéndolo con los extract os. También señale
que dich os sueros específicos absorbidos con
f ragmentos de órganos, siguen fijando el セッュ ᄋ@
plemento en presen cia del treponema de Re1ter.
más no con ext ractos de órganos.
E AGLE y H OGAN1 en sus experiencias, no obtuvier on resultados iguales a los expresados.
observando que el calentamient o a 63° durante
plazos oscilantes entre tres y ciento veinte !111·
nutos, privaba a los suer os sifilíticos de su 。セ@
t itud para fij ar el complemento, t anto en presencia de treponema de Reiter como de ・セエイZ@
tos de órganos y que el suero de los 」 ッョ ・ j セ U@ 1
Z@
munizados con treponema de Reiter イ・。」セキョ
ba positivamente con treponemas de Reir イセ@
con extractos de órganos. Finalmente, a セ■ ᄋ@
biendo l.os suer os específicos de enfermos .51 ba
ticos con treponema de Reiter, se les ーョセ・ゥ
ᄋ@
de fija r el complemento con treponema de
st
1
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ro)IO Lil
5
REACCION DE FIJACJON DEL COMPLEMENTO
307
:'{C!JERO
r
xtractos de órganos, siendo así que si
ter erbían con los extractos, dejaban de reacUセ@ a セッ@1 con éstos, mas continuaban haciéndolo
ctonf s suspensiones treponémicas de Reiter.
con. a mbargo EAGLE y HOGAN no negaron el
, ' . mediante
.
1a prueb a de reac. Smésediagnostico
セA・イ@
de fijación del complemento con antígeno
ctcn émico de Reiter, admitiendo que en los
エイ・ーNッセュ。ウ@
de Reiter hay fracciones antigénitrepo apaces de reaccionar específicamente con
cas cueros de los sifilíticos y que estarían ausenlos s
d ,
. .
tes de Jos extractos e ッイァ。ョセL@
y 1a ウオー・イZッセM
dad antigénica de las suspensiOnes treponemias sobre los extractos.
( Los trabajos de EAGLE y HoGAN datan del
año 1940.
D'ALESSANDRO y sus colaboradores empezaron a publicar セイ。「ェッウ@
atil?-entes a este tema
en 1941, evidenciando, ・セ@ pnmer lugar, セオ・@
los
sueros sifilíticos 。、ウッセ「ゥ@
por !os anbgenos
lipoideos que1:tban privados de fiJar el complemento con el mismo antígeno, pero continuaban fijándole si actuaba como tal una suspensión de trep.onemas de Rei ter y, además, que
Ja adsorción por el antígeno de Reiter privaba
al suero de ambas esr-ecies de anticuerpos.
Aestos trabajos, que pudiéramos llamar preliminares, de D' ALESSANDRO y DE BLASI) siguieron otros de la misma escuela italiana que han
sido practicados en los últimos años y que han
supuesto una aportación extra.ordinariamente
interesante t, セN@ \ ', r., ', ' y P. En resumen, los
italianos han llegado a demostrar cuatro partígenos en el treponema de Reiter:
a) Antígeno proteínico termolábil) que se
destruye a 76-78°.
b) Antígeno de naturaleza de polisacárido,
tennoestable.
e) Antígeno lipoideo ubícuo.
d) Antígeno lipoideo diferenciable del ubícuo y similar al antígeno cerebral de Witebsky.
Lo más significativo y útil de estos hallazgos
estriba en las analogías' inmunológicas que existen entre los partígenos del treponema pálido
genuino y los del trep.:mema de Reiter, porque
en el suero de los sifilíticos se encuentran anticuerpos para los partígenos citados (además
del anticuerpo antilipoideo floculante) (*), a
saber:
_Un anticuerpo antitreponémico ter m o 1 áb11 TL.
「ャセョエゥ」オ・イーッ@
antitreponémico termoestaUn anticuerpo antilipoideo L.
De todos ellos el más importante es el antígeno termolábil, porque las experiencias clíniセウ@ acreditan que la presencia del anticuerpo
カ・イZセーッョゥエ@
_es el testimonio アオセ@
mejor reor セ@ existencia del treponema palid.o en el
siJ:n1sll_lo (PuccrNELLI), adquisición que ha
セ「ャ・@
mediante la obtención por D'ALES·
(') Paree
el08ser que los an ti cuerpos que fiian el com
que intervienen en la fiocula"ción H。 ュ「ッセ@
son diferentes.
Plelllento
。ョエャj\、・セウI@
SANDRO y DARDONI del antígeno proteínico termolábil en gran estado de pureza 3 , partiendo
del treponema de Reiter, con el cual las reacciones con los sueros sifilíticos podrían diputarse
como las reacciones de grupo de análoga significación biológica a las reacciones cruzadas
en el terreno de las rickettsiosis y de las salmonelosis, por ejemplo.
No todas las estirpes del treponema de Reíter están provistas de la misma proporción del
partígeno lipoideo, conviniendo las que contengan menos, como acontece con la estirpe de que
disponemos que está prácticamente desprovista
de él y que redunda en beneficio de la especificidad de las pruebas serológicas pertinentes.
P UCCI:\'ELLI, sintetiza así las observaciones en el terreno clínico:
El anticuerpo contra el partígeno termolábil es el
primero en aparecer en la sífilis primaria (tercero al
quinto día del chancro); luego surge el t ermoestable,
haciéndolo en último lugar los antilipoidcos revelables
por los extractos de órganos normales.
En la sífilis secundaria reciente t odos los anticuerpos se hacen bien patentes.
En la s·filis secundaria tardía, en la terciaria y en
la neurosífilis, se encuentra siempre el antitermolábil.
En la sifilis latente (enfermos tratados) se observa
frecuentemente el anticuerpo termolábil, y cuando aparece coincidiendo con ausencia de todo signo clínico (15
por 100), podría interpretarse, según PUCGI:>ELLI, como
el "eco serológico" de una fun ción genética residual del
anticuerpo, aun después de desaparecer el espiroqueta;
casos que deben juzgarse con circunspección considerando a los pacientes como portadores del germen.
En la sífilis congénita predominan los anticuerpos lipoideos.
Como resultado del tratamiento, el anticuerpo termoestable es el primero en desaparecer. La desaparición de los otros anticuerpos está ligada al período de
contagio y a la gravedad de la sintomatología. Así en
la sífilis recientemente adquirida, con signos de actividad, desaparece primero, por lo común, el antilipoideo; en la sífilis reciente (chancro) algunas veces desaparece primero el antitermolábil y en la sífilis antigua
con pequefios o nulos signos clínicos, el antitermolábil
es el primero en desaparecer.
Son ex cepcionales las falsas reacciones con el antígeno treponémico.
El antígeno tre.ponémico cornpleta) pues, el
diagnóstico serológico.
Todos los conocimientos contemporáneos inclinan a aceptar que la presencia exclusiva del
anticuerpo lipoideo no permite afirmar la existencia de sífilis activa, dando a entender, la revelación del anticuerpo antitreponémico, la persistencia del espiroqueta de Schaudinn.
El profesor LEYADITI • mostró aversión al estudio de
estos partfgenos de la estirpe de Reiter alegando que no
se trataba de un germen patógeno. Fué un criterio
equivocado porque en el asunto sólo se persigue un fin
dia!móstico en el que el h echo bien manifiesto de existir <>part!genos comunes a las estirpes patógenes y no
patógenas presta utilidad. sobre todo por lo qu e se re·
fiere a la fracción termolábil, para la práctica clíniea
de 1a reacción de fijación del complemento. No qUlerr
decir esto, naturalmente, que el trepon ema de R eiter
y el treponema pálido tengan idéntica constitución. P orque esto no es as!, el treponema de Reiter no conviene
a la pruC'ba de Nelson. Pero lo que sí puede afirmarso
es que hay partígenos comunes que prestan un ser.
vicio de incalculable valor diagnóstico y, como aducen
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REVISTA CLINICA ESPAZVOLA
308
D'ALESSAXDRO y DARDAXONI, ante la compl<'jidad cons·
titucional del treponema pálido patógeno, el organismo
reacciona con anticuerpos C'ntre los qu<' dC'scucllan con
nitidez el antilipoidco, el antiprotcico y <'1 inmovilizantc.
Es verdaderamente curioso que una reacción
como la que nos ocupa, que en 1929 propugnó
GAEHTGENS y que en 1942, IRENE MUSTER, de la
Clínica Dermatológica Universitaria de Ginebra, la consideró como la de mayor especificidad (70 por 100), que con más frecuencia se
comportaba como positiva aisladamente en la
sífilis (7,6 por 100), y que acusaba una exigua
positividad no específica (0,88-0,60 por 100), y,
finalmente, que ha sido estudiada con detalle
_por la escuela italiana, no haya tenido mayor
difusión. De este criterio participan CHARPY y
RA..'\"ZE, de :.\1arsella, quienes dicen que sería de
desear que dicha reacción estuviera más difundida en su patria.
1-fuy recientemente se han emp1endido estudios conducentes a una sistematización diagnóstica basada en la presencia o predominio de alguno o algunos de los anticuerpos que conlleva
9
, cuya realizael suero de los sifilíticos 6 , ' , セケ@
ción práctica en el laborat(}rio hará algo más
compleja la lator del serólogo.
Hoy por hoy el empleo del antígeno total de
Reiter, por su gran contenido en TL, constituye una prueba inmunoquímica que informa mejor que ninguna otra, aparte la de Nelson, de la
presencia en el organismo del treponema pálido.
En cambio, la presencia solamente de anticuerpos antilipoideos, debe valorarse prudentemente, en ausencia de los otros anticuerpos, antes
de afirmar la existencia de lesiones específicas.
TJ!:CNICA.
Es sencilla. Como antígeno se emplea una su
de cspiroqu<'ta
tirpe de Rciter, cuyaS!Jens:t:
logia y aptitudt
..1s difieren algo de la lllOtf>
patógena dl' Schaud nn y en cuya parte liquid ・ウエセヲ@
una buena proporción de materia activa, ・ウー」ゥセャイエLN@
una vez transcurrido algún tiempo d<' la obten Nセ・エ@
antígeno.
Ci nG;¡
Nosotros operamos con una <'Stirpe dotada de .
cantidad de partígeno lipoid<'o y, por 」ッョウゥァオ・セxjL。@
resultados positivos que obt<'n<'mos son debidos ;• ·
m odo <'XClusivo, prácticament<', a la presencia de eGセ@
cuerpos TL y TE, obtcnirndo por nosotros mism 。エセ@
cultivos y las suspension<'s antigénicas que com;s;
mos con las preparaciones patrones italianas. ro ·
Proced<'m os simultan<'ando una r<'acción de fi ' .
del complemento con antígeno treponémico con ャセ@
la que int<"rviene un antígeno lipoidro, practicandora·c
otra partr, la.s. reacciones d<' Kahn, M. K. R. 1!, _fG
veces, la del Citocol.
l. 1
Hacemos la titulación del compl<'mcnto en funeq
del antígeno. y ele un Slll'I'O negativo, utilizando para
fase de fijac1ón el método m1xto, o sea, media hcra セ@
la cámara frigorífica y nwclia h ora l'n t•l t-año de 3r
Sol!lción Hrlill'l. Sl' prepara diso'\'il'ndo 5 gr.
cloruro sódico puro <'n 1.000 c. c. de agua destilad!.
se esteriliza a 110 '. Dt'IJ<'ll \GューAエ。イセ」@
soluclonr0 d•rcicntc preparación.
Suero pro/J/1 ma. Se c<'ntrifuga para que quede hu
paren te y se inactiva clmantc media hora a 56 en ta!.
de agua.
Aut f!l' 110. Sl' ( mph'a puro, Slll t/1/uzr, ag1tando e::
gicamcntc <'1 ヲイ。セ」ッ@
。ョエ・セ@
dt• n•rogt•r lns dosis que b
yan de utilizarse.
Ccnnplt 111' nto. セャG@
d1l11yc en In proporctón de 1 t
de セオ・イッ@
por cada 9 c. c. de solución salina.
Sru ro h• molltfcn. -f'P l'mpleu una dilución que
tcn,..,n e¡ m h. rnr· "'- ('
GlolAtlu:> ru¡u8. セャN[@
ut .• u:a una セオウーャZョ[￳@
al.'i J:N·.
Precisa titular el complemento en función del sir.,
m a hemolítico y en función del antígeno y de un S:'
ro humano negativo calentado a 56° durante 30'.
Titulación previa del complemento.
2
1
Solución de complemento al 1/10 ..... _........................
Mezcla de suspensión de glóbulos rojos al 5 por 100
y de s. hem. con 8 m. h . por c. c. ......... ............. .... .
Solución salina .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. . .. .. . .. . .. .. .. .. .. .. .. . .. .. .. .. .. ..
3
4
5
6
7
0,25
0,30
0,35
0,05
0,10
0,15
0,20
1
1
0,90
1
0,85
0,80
0,95
1
1
0,75
1
o,7o
1
o,65
1
o.w
Se sumergen los tubos durante media hora en un baño de agua a 37• .
La dosis m1mma que produzca hemolisis total, o la
dosis inmediata superior, se elige como punto de partida para la titulación del complemento en función del
antigeno y de un suero negativo. Suponiendo que dictl
dosis sea 0,10, se procederá así:
Titu.lación del complemento en función clel antígeno y
1
Suero negativo (inactivado a 56•) .......... -............... .
Antigeno treponémico puro agitado ... ... .... -............... .
Complemento 1/ 10 ................................................ .. .
Solución salina ... . .. ..... ... ..... ... .... ......... -......... .... ... .. .
de un s¡¿cro negativo.
3
2
4
0,1
0,25
0,10
0,55
0,1
0,25
0,15
0,50
0,1
0,25
0,20
0 ,45
0,1
0,25
0,25
0,40
1
1
1
1
Se llevan los tubos a la refiigeradora durante 30' y
a continuación se mantienen durante otros 30' en un
bafio de agua a 37•.
M
Mezcla de suspensión de glóbulos rojos al 5 por 100 y
de suero hemolltico con 8 m. h . por c. c. _............. ..
Se sumerg-en los tubos durante media hora en un baño de agua a 37•.
M
ᄋM M
M M
M Mセ@
-
0,1
0,25
0,30
0,35
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REAGGION DE FIJAGION DEL COMPLEMENTO
La dosis de complemento mínima que permite una
Ji.SiS total, o la inmediatamente superior a ésta,
ィセッャ。@
elegida para la prueba propiamente dicha. Así,
ウセ イィ。Ny@
hemolisis total en el tubo número 3, se puede
s1 ·r como dosis complementaria 0,20 ó 0,25 de la
clegl
·
d e comp1ement o.
solución
al déc1mo
Prueba proz;i(uncntc dicha.
1
2
suero problema (inactivado a 56").
0,1
0,2
Antígeno treponémico puro agitado.
0,25
0,00
complemento 1/10 . . . . . . . . . •. . . . . . .
0,20
0,20
Solución salina
0,45
0,60
Mezcla de suspensión de glóbulos rojos al 5 por 100 y de suero hemolitico con 8 m. h. por c. c. .. . . .. .. .
Se sumergen
ャッセ@
la _・ョエゥャセ@
de facilitarnos la fracción proteica termolábil en umón de muy valiosas orientaciones bibliográficas.
RESUMEN.
La reacción de fijación del complemento con
antígeno treponémico de la estirpe cultivable
、セ@
Reiter, constituye una prueba complementana, no en el sentido de las fioculantes o de las
reacciones de fijación con antígeno lipoideo sino
en el de la especificidad, por las analogías'exisエ・セ@
tes entre los partígenos del treponema de
Relter y del treponema de Schaudinn.
BIBLIOGRAFIA
l.
Se llevan los tubos a la refrigerador& durantr 30' y a continuación se mantienen durante otros 30'
en un baño de agua a 37·.
2.
3.
4.
5.
6.
1
1
tubos durante media hora en un baflo
de agua a 37°.
309
7.
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dGale^[セNBroL@
Oooo, CO:MES y DARDAXOXI.-Riv. Ist. Sier.
Ita!., 24, 3, l!H.9.
D'AJ.E:<!;.\:'\"TlRO, Onoo y DARDAXOXJ.-Jour Vencr Dis lnform. Diciembre 1950
·
·
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D'ALEH
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Musn:r.. Dermatológica, 86, 351, 1M2.
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Pucci:.-ELLI.- Brit. J. Vener. Dls., 28, 184, 1952.
Pucci::->t:LJ..I.-Sem. des Hop. de Paris, 3, 22 sept. 1953.
SUMMARY
Se hacen dos lecturas: una al sacar los tubos del
baño y otra a las doce o veinticuatro horas de permanencia de éstos en la refrigeradora.
Precisa que haya hemolisis total en el tubo número 2. De no ser asi, la reacción no tendría valor por
tener el suero un alto poder anticomplementario que
habría que determinar en su cuantía para realizar de
nuevo la prueba final.
Nuestra experiencia no alcanza todavía al número de observaciones necesarias para adoptar
オセ@ ?:iterio. En la actualidad trabajan algunos
s1fihologos con el antígeno de nuestra obtención
Y esperamos que en pocos meses dispongamos
de los datos requeridos para pronunciarse en
un sentido o en otro ; mas, con todo, sí podemos
afirmar.que la reacción expuesta constituye una
aportaciOn complementaria de gran valor de
gran especificidad y basada en un mecani'smo
que por ser distinto que el que interviene en las
Pruebas serológicas con antígenos lipoideos,
detbe セ・イ@
tomada en consideración y estudiada
de emdamente.
·
laAgradec
ini . .emos profundamente
al profesor n' A:\'TO:\A
sum セ。」Q￳ョ@
de los trabajos pertinentes y la nutrida
A^oイ」セッョN@
datos prácticos que tan amablemente nos pro-
、ッセEPX@
de citar, también con reconocimiento, a los
Sass .8 PuccrNELLI, de la Clinica Dermosifilopática de
gien ar¡d, y D'A LESSANDRO, n·1rector del Instituto de Hisus セイ。@
l.a Universidad de Palcrmo, por la entrega de
セZ^⦅@
aJos y de aportaciones bibliográficas.
•·u¡alrnent
.
Profeso
A e, h emos d e cons1gnar
nuestra gratitud al
r ·DE BARBIERI, del Instituto Belfanti, que tuvo
The complement fixation reaction with treponema from Reiter's cultivable strain constitutes a complementary test not in the sense
of flocculation tests or lipofd antigen fixation
reactions but in the sense of specificity, owing
to the analogieE between Reiter's treponema
and S:!haudinn's.
ZUSAMMENFASSUNG
Die Komplementbindungsreaktion mit tイ・ーッセ@
nema-Antigen von der kultivierbaren Art nach
Reiter ist eine weitere, ergaenzende Probe, aber
nich in dem Sinn der Truebungsreaktionen
oder der Bindungsreaktionen mit Fettantigen,
sondern im Sinne der Spezifizitat durch seine
Analogien ziwschen den Partigenen des Reiterschen Treponemas und dem Schaudinnschen
•rreponema.
RÉSUMÉ
La réaction de fixation du complé::nent avec
antig€me tréponémique de la race cultivable de
Reiter, constitue une preuve complémentaire,
non dans le sens des floculants ou des réactions
du fixation avec antig?me lipoi:déen, mais dans
celui de la spécificité par les analogies éxistantes entre les partig(mes du tréponeme de Reiter
et du tréponeme de Schaudinn.
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