Documento descargado de http://www.revclinesp.es el 20/11/2016. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato. 3M REVI STA CLINICA ESPAÑOLA ORIG I NAL ES LU ODIAGNOSTICO POR LA REACCION DE F IJACION DEL COMPLEMENTO CON SUSPENSION DE TREPONEMAS DE REITER (") ) F . MORENO DE VEGA. Instituto Lloren te. Director: Dr. J. Ma:i.ls. Madrid. Si bien los progresos del suerodiagnóstico de la sífilis han sido muy considerables a partir de los trabajos de WASSERMANN en 1906, culminando en las aportaciones de PANGBORN con la ol:tención del fosfolípido denominado cardiolipín, todo lo conseguido ha estado comprendido dentro de la investigación de las reaginas; es decir, f uera del mecanismo inmunológico genuino. No obstante, el intento de lograr pruebas específicas no ha sido nunca abandonado, habiéndose trabaj ado much o tratando de descubrir ant icuerpos como las aglutininas, por ejemplo, sin haber obtenido resultados aprovechabies. SACHS1 KLoPSTOCK y WEIL1 en 1927, sostuvieron lo que modernamente va adquiriendo consistencia: que los treponemas disgregados en el organismo del enfermo liberan sustancias generadoras de anticuerpos genuinos compuest as de un hapteno, asemejable a los ext ractos lipoideos al uso, y de u na prot eína proveniente del suero. EAGLE y HoELTZER señalan, como generador del a nticuerpo específico, un partígeno lipoideo del treponema, el cual existe, indudablemente, en el treponema pálido-, comprobándose, por los autores citados y por la escuela italiana, en la estirpe treponémica de Reiter. En el hallazgo de aglutininas puso gran empeño TOURAINE1 sin resultados positivos. Mas TURNER (1931), si no logró triunfar en esto, sí consiguió sistematizar las condiciones óptimas para atenuar l.os t reponemas virulentos de la estirpe Nich ols, demost rando que la mezcla de éstos con el suero problema y el complemento, inoculada intradérmicamente a l conejo, producía o no chancro, según que el suero examina do no contuviera anticuerpos o f uera porta dor de ellos, y abrió, con ello, un camino a sus discípulos NELSON y MAYER1 que han puesto a punto una prueba llena de interés científico y que permite, por la mezcla de los tres factores que intervenían en la pr ueba propugnada por su maestro, demostrar la existencia de anticuerpos inmovilizantes. La prueba de Nelson-Mayer pare ce ser la más específica que se conoce. Existe una prueba biologica de gran interés, セオケ@ ・ セ ー・」■ヲゥ。@ y sensible y que está muy poco difundida. Consiste en la reacción de fijación ( • ) Comunicación presen t a da a la Sociedad de Mlcrobió· Jogos E epatloles. . del complemento ut ilizando como antígeno suspensión de treponemas de la llamada eセ。@ r;e de Reiter, germen que está privado de patógeno, pero que conlleva partígenos ゥュセ@ er lógicamente superponibles a los de la ・ウセッᆳ patógena. Este suerodiagnóstico fué ーイッオセQ@ por GAEIITGENS en 1929. La estirpe de Re¡·tsc ' MUSTER , f ue' a1s · lada en 1922 por w er· segun . , As. SERMANN y F ICKER denommandose enton . ' d e Fi, e k er, y cua1_1do se r;osesionó . est 1rpe de 」・セ@eUa reitセ Q @ paso a ser prop1edad del Instituto Sue. roterap1co de Saxe. tiene, se. , La estirpe treponémica en 」オセエゥョL@ gun EAGLE y HocAN, y, tamb1cn, según no;. otros, diferencias morfológicas con la ・ウエセ@ genuiha obtenida del chancro, aparte la difert:· cia de patogenicidad señalada anteriormente. Tambén se diferenciarían en que el t. pálido: destruye la diastasa y el t. Rcitcr, no. GAEHTGEXS admitió que en el suero sifilítir había una reagina no específica que fijaba e complemento en presencia de los extractos de órganos y un anticuerpo específico que lo haría En presencia del treponema de Reitez. Como tes. timonio de tal aserto, adujo los siguientes hechos: a) Los sueros sifilítico::. calentados a 63 tt: accionan positivamente con e l antígeno trep& némico de Reiter, pero no con los extractos di órganos. b) Los animales debidamente inmunizadOi con suspensiones de treponem as de Reiter, os· t en tan en su sangre sustancias que fijan el com· plemento con dichas suspensiones, pero no con extract os de órganos. e) Si se a bsorbe un suero sifilítico con sus· pens ión de t r eponemas de R eiter, deja 。アオセ@ de fi jar el complemento con dicha ウ オ ウー・ョゥセ@ haciéndolo con los extract os. También señale que dich os sueros específicos absorbidos con f ragmentos de órganos, siguen fijando el セッュ ᄋ@ plemento en presen cia del treponema de Re1ter. más no con ext ractos de órganos. E AGLE y H OGAN1 en sus experiencias, no obtuvier on resultados iguales a los expresados. observando que el calentamient o a 63° durante plazos oscilantes entre tres y ciento veinte !111· nutos, privaba a los suer os sifilíticos de su 。セ@ t itud para fij ar el complemento, t anto en presencia de treponema de Reiter como de ・セエイZ@ tos de órganos y que el suero de los 」 ッョ ・ j セ U@ 1 Z@ munizados con treponema de Reiter イ・。」セキョ ba positivamente con treponemas de Reir イセ@ con extractos de órganos. Finalmente, a セ■ ᄋ@ biendo l.os suer os específicos de enfermos .51 ba ticos con treponema de Reiter, se les ーョセ・ゥ ᄋ@ de fija r el complemento con treponema de st 1 Documento descargado de http://www.revclinesp.es el 20/11/2016. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato. ro)IO Lil 5 REACCION DE FIJACJON DEL COMPLEMENTO 307 :'{C!JERO r xtractos de órganos, siendo así que si ter erbían con los extractos, dejaban de reacUセ@ a セッ@1 con éstos, mas continuaban haciéndolo ctonf s suspensiones treponémicas de Reiter. con. a mbargo EAGLE y HOGAN no negaron el , ' . mediante . 1a prueb a de reac. Smésediagnostico セA・イ@ de fijación del complemento con antígeno ctcn émico de Reiter, admitiendo que en los エイ・ーNッセュ。ウ@ de Reiter hay fracciones antigénitrepo apaces de reaccionar específicamente con cas cueros de los sifilíticos y que estarían ausenlos s d , . . tes de Jos extractos e ッイァ。ョセL@ y 1a ウオー・イZッセM dad antigénica de las suspensiOnes treponemias sobre los extractos. ( Los trabajos de EAGLE y HoGAN datan del año 1940. D'ALESSANDRO y sus colaboradores empezaron a publicar セイ。「ェッウ@ atil?-entes a este tema en 1941, evidenciando, ・セ@ pnmer lugar, セオ・@ los sueros sifilíticos 。、ウッセ「ゥ@ por !os anbgenos lipoideos que1:tban privados de fiJar el complemento con el mismo antígeno, pero continuaban fijándole si actuaba como tal una suspensión de trep.onemas de Rei ter y, además, que Ja adsorción por el antígeno de Reiter privaba al suero de ambas esr-ecies de anticuerpos. Aestos trabajos, que pudiéramos llamar preliminares, de D' ALESSANDRO y DE BLASI) siguieron otros de la misma escuela italiana que han sido practicados en los últimos años y que han supuesto una aportación extra.ordinariamente interesante t, セN@ \ ', r., ', ' y P. En resumen, los italianos han llegado a demostrar cuatro partígenos en el treponema de Reiter: a) Antígeno proteínico termolábil) que se destruye a 76-78°. b) Antígeno de naturaleza de polisacárido, tennoestable. e) Antígeno lipoideo ubícuo. d) Antígeno lipoideo diferenciable del ubícuo y similar al antígeno cerebral de Witebsky. Lo más significativo y útil de estos hallazgos estriba en las analogías' inmunológicas que existen entre los partígenos del treponema pálido genuino y los del trep.:mema de Reiter, porque en el suero de los sifilíticos se encuentran anticuerpos para los partígenos citados (además del anticuerpo antilipoideo floculante) (*), a saber: _Un anticuerpo antitreponémico ter m o 1 áb11 TL. 「ャセョエゥ」オ・イーッ@ antitreponémico termoestaUn anticuerpo antilipoideo L. De todos ellos el más importante es el antígeno termolábil, porque las experiencias clíniセウ@ acreditan que la presencia del anticuerpo カ・イZセーッョゥエ@ _es el testimonio アオセ@ mejor reor セ@ existencia del treponema palid.o en el siJ:n1sll_lo (PuccrNELLI), adquisición que ha セ「ャ・@ mediante la obtención por D'ALES· (') Paree el08ser que los an ti cuerpos que fiian el com que intervienen en la fiocula"ción H。 ュ「ッセ@ son diferentes. Plelllento 。ョエャj\、・セウI@ SANDRO y DARDONI del antígeno proteínico termolábil en gran estado de pureza 3 , partiendo del treponema de Reiter, con el cual las reacciones con los sueros sifilíticos podrían diputarse como las reacciones de grupo de análoga significación biológica a las reacciones cruzadas en el terreno de las rickettsiosis y de las salmonelosis, por ejemplo. No todas las estirpes del treponema de Reíter están provistas de la misma proporción del partígeno lipoideo, conviniendo las que contengan menos, como acontece con la estirpe de que disponemos que está prácticamente desprovista de él y que redunda en beneficio de la especificidad de las pruebas serológicas pertinentes. P UCCI:\'ELLI, sintetiza así las observaciones en el terreno clínico: El anticuerpo contra el partígeno termolábil es el primero en aparecer en la sífilis primaria (tercero al quinto día del chancro); luego surge el t ermoestable, haciéndolo en último lugar los antilipoidcos revelables por los extractos de órganos normales. En la sífilis secundaria reciente t odos los anticuerpos se hacen bien patentes. En la s·filis secundaria tardía, en la terciaria y en la neurosífilis, se encuentra siempre el antitermolábil. En la sifilis latente (enfermos tratados) se observa frecuentemente el anticuerpo termolábil, y cuando aparece coincidiendo con ausencia de todo signo clínico (15 por 100), podría interpretarse, según PUCGI:>ELLI, como el "eco serológico" de una fun ción genética residual del anticuerpo, aun después de desaparecer el espiroqueta; casos que deben juzgarse con circunspección considerando a los pacientes como portadores del germen. En la sífilis congénita predominan los anticuerpos lipoideos. Como resultado del tratamiento, el anticuerpo termoestable es el primero en desaparecer. La desaparición de los otros anticuerpos está ligada al período de contagio y a la gravedad de la sintomatología. Así en la sífilis recientemente adquirida, con signos de actividad, desaparece primero, por lo común, el antilipoideo; en la sífilis reciente (chancro) algunas veces desaparece primero el antitermolábil y en la sífilis antigua con pequefios o nulos signos clínicos, el antitermolábil es el primero en desaparecer. Son ex cepcionales las falsas reacciones con el antígeno treponémico. El antígeno tre.ponémico cornpleta) pues, el diagnóstico serológico. Todos los conocimientos contemporáneos inclinan a aceptar que la presencia exclusiva del anticuerpo lipoideo no permite afirmar la existencia de sífilis activa, dando a entender, la revelación del anticuerpo antitreponémico, la persistencia del espiroqueta de Schaudinn. El profesor LEYADITI • mostró aversión al estudio de estos partfgenos de la estirpe de Reiter alegando que no se trataba de un germen patógeno. Fué un criterio equivocado porque en el asunto sólo se persigue un fin dia!móstico en el que el h echo bien manifiesto de existir <>part!genos comunes a las estirpes patógenes y no patógenas presta utilidad. sobre todo por lo qu e se re· fiere a la fracción termolábil, para la práctica clíniea de 1a reacción de fijación del complemento. No qUlerr decir esto, naturalmente, que el trepon ema de R eiter y el treponema pálido tengan idéntica constitución. P orque esto no es as!, el treponema de Reiter no conviene a la pruC'ba de Nelson. Pero lo que sí puede afirmarso es que hay partígenos comunes que prestan un ser. vicio de incalculable valor diagnóstico y, como aducen Documento descargado de http://www.revclinesp.es el 20/11/2016. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato. REVISTA CLINICA ESPAZVOLA 308 D'ALESSAXDRO y DARDAXONI, ante la compl<'jidad cons· titucional del treponema pálido patógeno, el organismo reacciona con anticuerpos C'ntre los qu<' dC'scucllan con nitidez el antilipoidco, el antiprotcico y <'1 inmovilizantc. Es verdaderamente curioso que una reacción como la que nos ocupa, que en 1929 propugnó GAEHTGENS y que en 1942, IRENE MUSTER, de la Clínica Dermatológica Universitaria de Ginebra, la consideró como la de mayor especificidad (70 por 100), que con más frecuencia se comportaba como positiva aisladamente en la sífilis (7,6 por 100), y que acusaba una exigua positividad no específica (0,88-0,60 por 100), y, finalmente, que ha sido estudiada con detalle _por la escuela italiana, no haya tenido mayor difusión. De este criterio participan CHARPY y RA..'\"ZE, de :.\1arsella, quienes dicen que sería de desear que dicha reacción estuviera más difundida en su patria. 1-fuy recientemente se han emp1endido estudios conducentes a una sistematización diagnóstica basada en la presencia o predominio de alguno o algunos de los anticuerpos que conlleva 9 , cuya realizael suero de los sifilíticos 6 , ' , セケ@ ción práctica en el laborat(}rio hará algo más compleja la lator del serólogo. Hoy por hoy el empleo del antígeno total de Reiter, por su gran contenido en TL, constituye una prueba inmunoquímica que informa mejor que ninguna otra, aparte la de Nelson, de la presencia en el organismo del treponema pálido. En cambio, la presencia solamente de anticuerpos antilipoideos, debe valorarse prudentemente, en ausencia de los otros anticuerpos, antes de afirmar la existencia de lesiones específicas. TJ!:CNICA. Es sencilla. Como antígeno se emplea una su de cspiroqu<'ta tirpe de Rciter, cuyaS!Jens:t: logia y aptitudt ..1s difieren algo de la lllOtf> patógena dl' Schaud nn y en cuya parte liquid ・ウエセヲ@ una buena proporción de materia activa, ・ウー」ゥセャイエLN@ una vez transcurrido algún tiempo d<' la obten Nセ・エ@ antígeno. Ci nG;¡ Nosotros operamos con una <'Stirpe dotada de . cantidad de partígeno lipoid<'o y, por 」ッョウゥァオ・セxjL。@ resultados positivos que obt<'n<'mos son debidos ;• · m odo <'XClusivo, prácticament<', a la presencia de eGセ@ cuerpos TL y TE, obtcnirndo por nosotros mism 。エセ@ cultivos y las suspension<'s antigénicas que com;s; mos con las preparaciones patrones italianas. ro · Proced<'m os simultan<'ando una r<'acción de fi ' . del complemento con antígeno treponémico con ャセ@ la que int<"rviene un antígeno lipoidro, practicandora·c otra partr, la.s. reacciones d<' Kahn, M. K. R. 1!, _fG veces, la del Citocol. l. 1 Hacemos la titulación del compl<'mcnto en funeq del antígeno. y ele un Slll'I'O negativo, utilizando para fase de fijac1ón el método m1xto, o sea, media hcra セ@ la cámara frigorífica y nwclia h ora l'n t•l t-año de 3r Sol!lción Hrlill'l. Sl' prepara diso'\'il'ndo 5 gr. cloruro sódico puro <'n 1.000 c. c. de agua destilad!. se esteriliza a 110 '. Dt'IJ<'ll \GューAエ。イセ」@ soluclonr0 d•rcicntc preparación. Suero pro/J/1 ma. Se c<'ntrifuga para que quede hu paren te y se inactiva clmantc media hora a 56 en ta!. de agua. Aut f!l' 110. Sl' ( mph'a puro, Slll t/1/uzr, ag1tando e:: gicamcntc <'1 ヲイ。セ」ッ@ 。ョエ・セ@ dt• n•rogt•r lns dosis que b yan de utilizarse. Ccnnplt 111' nto. セャG@ d1l11yc en In proporctón de 1 t de セオ・イッ@ por cada 9 c. c. de solución salina. Sru ro h• molltfcn. -f'P l'mpleu una dilución que tcn,..,n e¡ m h. rnr· "'- (' GlolAtlu:> ru¡u8. セャN[@ ut .• u:a una セオウーャZョ[@ al.'i J:N·. Precisa titular el complemento en función del sir., m a hemolítico y en función del antígeno y de un S:' ro humano negativo calentado a 56° durante 30'. Titulación previa del complemento. 2 1 Solución de complemento al 1/10 ..... _........................ Mezcla de suspensión de glóbulos rojos al 5 por 100 y de s. hem. con 8 m. h . por c. c. ......... ............. .... . Solución salina .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. . .. .. . .. . .. .. .. .. .. .. .. . .. .. .. .. .. .. 3 4 5 6 7 0,25 0,30 0,35 0,05 0,10 0,15 0,20 1 1 0,90 1 0,85 0,80 0,95 1 1 0,75 1 o,7o 1 o,65 1 o.w Se sumergen los tubos durante media hora en un baño de agua a 37• . La dosis m1mma que produzca hemolisis total, o la dosis inmediata superior, se elige como punto de partida para la titulación del complemento en función del antigeno y de un suero negativo. Suponiendo que dictl dosis sea 0,10, se procederá así: Titu.lación del complemento en función clel antígeno y 1 Suero negativo (inactivado a 56•) .......... -............... . Antigeno treponémico puro agitado ... ... .... -............... . Complemento 1/ 10 ................................................ .. . Solución salina ... . .. ..... ... ..... ... .... ......... -......... .... ... .. . de un s¡¿cro negativo. 3 2 4 0,1 0,25 0,10 0,55 0,1 0,25 0,15 0,50 0,1 0,25 0,20 0 ,45 0,1 0,25 0,25 0,40 1 1 1 1 Se llevan los tubos a la refiigeradora durante 30' y a continuación se mantienen durante otros 30' en un bafio de agua a 37•. M Mezcla de suspensión de glóbulos rojos al 5 por 100 y de suero hemolltico con 8 m. h . por c. c. _............. .. Se sumerg-en los tubos durante media hora en un baño de agua a 37•. M ᄋM M M M M Mセ@ - 0,1 0,25 0,30 0,35 Documento descargado de http://www.revclinesp.es el 20/11/2016. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato. REAGGION DE FIJAGION DEL COMPLEMENTO La dosis de complemento mínima que permite una Ji.SiS total, o la inmediatamente superior a ésta, ィセッャ。@ elegida para la prueba propiamente dicha. Así, ウセ イィ。Ny@ hemolisis total en el tubo número 3, se puede s1 ·r como dosis complementaria 0,20 ó 0,25 de la clegl · d e comp1ement o. solución al déc1mo Prueba proz;i(uncntc dicha. 1 2 suero problema (inactivado a 56"). 0,1 0,2 Antígeno treponémico puro agitado. 0,25 0,00 complemento 1/10 . . . . . . . . . •. . . . . . . 0,20 0,20 Solución salina 0,45 0,60 Mezcla de suspensión de glóbulos rojos al 5 por 100 y de suero hemolitico con 8 m. h. por c. c. .. . . .. .. . Se sumergen ャッセ@ la _・ョエゥャセ@ de facilitarnos la fracción proteica termolábil en umón de muy valiosas orientaciones bibliográficas. RESUMEN. La reacción de fijación del complemento con antígeno treponémico de la estirpe cultivable 、セ@ Reiter, constituye una prueba complementana, no en el sentido de las fioculantes o de las reacciones de fijación con antígeno lipoideo sino en el de la especificidad, por las analogías'exisエ・セ@ tes entre los partígenos del treponema de Relter y del treponema de Schaudinn. BIBLIOGRAFIA l. Se llevan los tubos a la refrigerador& durantr 30' y a continuación se mantienen durante otros 30' en un baño de agua a 37·. 2. 3. 4. 5. 6. 1 1 tubos durante media hora en un baflo de agua a 37°. 309 7. 8. 9. dGale^[セNBroL@ Oooo, CO:MES y DARDAXOXI.-Riv. Ist. Sier. Ita!., 24, 3, l!H.9. D'AJ.E:<!;.\:'\"TlRO, Onoo y DARDAXOXJ.-Jour Vencr Dis lnform. Diciembre 1950 · · · D'ALEH 1952. 8.\!'IJRO y DAROA.">;OXI.-Riv . lst. Sier . !tal ., 27 • 153• CHARPY.-Le T. P. l. Test de Nelson-Mayer 1953 Musn:r.. Dermatológica, 86, 351, 1M2. ' · Pucci:-oELLI.-Amer. J. Syph. Gono and Vener D1's 35 340, 1951. . . .• • pエZセャ@ :-:l:t.LL----:Actas del XXXVIII Congreso de la Socl(•dad Italiana de Dermatologla y Sifiliografla vol 11 1951 • . ' Pucci:.-ELLI.- Brit. J. Vener. Dls., 28, 184, 1952. Pucci::->t:LJ..I.-Sem. des Hop. de Paris, 3, 22 sept. 1953. SUMMARY Se hacen dos lecturas: una al sacar los tubos del baño y otra a las doce o veinticuatro horas de permanencia de éstos en la refrigeradora. Precisa que haya hemolisis total en el tubo número 2. De no ser asi, la reacción no tendría valor por tener el suero un alto poder anticomplementario que habría que determinar en su cuantía para realizar de nuevo la prueba final. Nuestra experiencia no alcanza todavía al número de observaciones necesarias para adoptar オセ@ ?:iterio. En la actualidad trabajan algunos s1fihologos con el antígeno de nuestra obtención Y esperamos que en pocos meses dispongamos de los datos requeridos para pronunciarse en un sentido o en otro ; mas, con todo, sí podemos afirmar.que la reacción expuesta constituye una aportaciOn complementaria de gran valor de gran especificidad y basada en un mecani'smo que por ser distinto que el que interviene en las Pruebas serológicas con antígenos lipoideos, detbe セ・イ@ tomada en consideración y estudiada de emdamente. · laAgradec ini . .emos profundamente al profesor n' A:\'TO:\A sum セ。」Qョ@ de los trabajos pertinentes y la nutrida A^oイ」セッョN@ datos prácticos que tan amablemente nos pro- 、ッセEPX@ de citar, también con reconocimiento, a los Sass .8 PuccrNELLI, de la Clinica Dermosifilopática de gien ar¡d, y D'A LESSANDRO, n·1rector del Instituto de Hisus セイ。@ l.a Universidad de Palcrmo, por la entrega de セZ^⦅@ aJos y de aportaciones bibliográficas. •·u¡alrnent . Profeso A e, h emos d e cons1gnar nuestra gratitud al r ·DE BARBIERI, del Instituto Belfanti, que tuvo The complement fixation reaction with treponema from Reiter's cultivable strain constitutes a complementary test not in the sense of flocculation tests or lipofd antigen fixation reactions but in the sense of specificity, owing to the analogieE between Reiter's treponema and S:!haudinn's. ZUSAMMENFASSUNG Die Komplementbindungsreaktion mit tイ・ーッセ@ nema-Antigen von der kultivierbaren Art nach Reiter ist eine weitere, ergaenzende Probe, aber nich in dem Sinn der Truebungsreaktionen oder der Bindungsreaktionen mit Fettantigen, sondern im Sinne der Spezifizitat durch seine Analogien ziwschen den Partigenen des Reiterschen Treponemas und dem Schaudinnschen •rreponema. RÉSUMÉ La réaction de fixation du complé::nent avec antig€me tréponémique de la race cultivable de Reiter, constitue une preuve complémentaire, non dans le sens des floculants ou des réactions du fixation avec antig?me lipoi:déen, mais dans celui de la spécificité par les analogies éxistantes entre les partig(mes du tréponeme de Reiter et du tréponeme de Schaudinn.