EXPANSIÓN CLONAL DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA

EXPANSIÓN CLONAL DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA DEL GEN
blaKPC, EN EL ECUADOR
R. Tamayo 1 , C. Satán 1, D. Córdova 1, F. Villavicencio 2 , A. Zabala 1, J. Reyes 2, J. E. Villacís 1 ,2
1.Laboratorio de Investigación Escuela de Bioanálisis de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador.
2.Laboratorio de Resistencias a Antimicrobianos Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública.
Resumen
La presencia de cepas de K. pneumoniae productoras de carbapenemasas tipo KPC se ha ido incrementando a nivel mundial durante los últimos años, especialmente en las infecciones
asociadas a la atención en salud. Teniendo en cuenta este antecedente, el objetivo de nuestro estudio fue determinar la epidemiología molecular, de Klebsiella pneumoniae aisladas de
distintas casas de salud del Ecuador. Se realizaron técnicas manuales y automatizadas para identificación, perfiles de susceptibilidad por Kirby Bauer y MIC. La identificación de producción
de carbapenemasa se ensayo por el Método de Inhibición al Carbapenémico (CIM) para posterior confirmación molecular por reacción de cadena en la polimerasa y PFGE (Pulse Field Gel
Electrophoresis) para ver relación genética entre aislamientos. Se analizaron 60 cepas de K. pneumoniae obtenidas de muestras invasivas procedentes de varias casas de salud del
Ecuador durante el periodo 2013-2015. Los perfiles de susceptibilidad de estas cepas reflejan cepas XDR y posibles PDR. Los patrones de PFGE evidencian diversidad clonal en las cepas
K. pneumoniae que se encuentran involucrados en brotes intrahospitalarios de distintos servicios y casas de salud. Este estudio evidencia la presencia de brotes intrahospitalarios y la
necesidad de mejorar las medidas de control en los hospitales del país
Introducción
Klebsiella pneumoniae se ha convertido en los últimos años en uno de los
microorganismos con mayor resistencia a nivel hospitalario. Debido a su capacidad
de adaptación a condiciones extremas y a sus mecanismo de resistencia asociados
a elementos genéticos móviles, que reducen opciones terapéuticas.
Dichas características han puesto en alarma a las autoridades sanitarias mismas que
han determinado una alta prevalencia de casos con resistencia asociada a otros
antimicrobianos y una alta tasa de diseminación, incitando al uso de métodos
alternativos tanto para su detección como para su tratamiento.
El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de carbapenemasas por el
Método de Inhibición al Carbapenémico (CIM), y la caracterización genética de las
cepas por PFGE (Pulse Field Gel Electrophoresis).
Materiales y Métodos
En el estudio analizó 60 cepas de Klebsiella pneumoniae durante el periodo 20132015 de diversas casas de salud del país, para lo cual se realizaron técnicas de
Kirby Bauer y Concentración Mínima Inhibitoria Vitek 2 AST 67 identificando los
perfiles de susceptibilidad, y analizados con el software WHONET 5.6. La
identificación de la producción de carbapenemasas se obtuvo por el Método de
Inhibición al Carbapenémico (CIM), por la hidrólisis enzimática del disco de
ertapenem. La identificación del gen blaKPC, blaVIM, blaOXA-18, blaNDM, blaIMP se realizó
mediante la técnica de PCR Multiplex y se analizó los patrones clonales de PFGE,
BioRad® CHEF-DRIII, con el sistema Bionumerics 7.
% Resistencia Klebsiella pneumoniae Ecuador 2014
2095 2258 795 2523 2348 1140 2285 2436 2423 2641 120* 1318 2650 1437 2643 2623 274 1908 293
Organismo
Klebsiella
pneumoniae
K. pneumoniae
BLEE
K. pneumoniae
resistente a
carbapenémicos
K. pneumoniae no
BLEE y sensible a
carbapenémicos
No
Aislamientos AMP CFZ AMC CRO CAZ CTX FOX FEP
TPZ
IMI
ETP MEM
CN
AK
SXT
CIP NA
N
P
2806
97
71
61
73
68
70
62
67
47
25
5
33
55
21
66
57
59
75
37
1771
100
99
87
100
100
100
89
97,6
64
36
13
46
80
30
87
79
80
84
50
716
100
98
99
99
97
100
92
96
98
98
_
98
88
50
93
92
86
84
70
693
89
10
16
5
5
22
12
5
12
0
_
0
8
1
24
15
34
62
25
Abreviaciones: %S, porcentaje de Resistencia; AM, ampicilina; CF, cefazolina; AMC, amoxicilina - ácido clavulánico; CRO, ceftriaxona; CAZ, ceftazidima; CTX, cefotaxima; FOX, cefoxitina; FEP,
cefepime; TPZ, piperacilina tazobactam; IMI, imipenem; ETP, ertapenem; MEM, meropenem; CN, gentamicina; AK, amikacina; SXT, trimethoprim-sulfamethoxazole; CIP, ciprofloxacina; NA, ácido
nalidíxico; N, nitrofurantoína; P, fosfomicina
Figura3. Dendrograma de PFGE de Klebsiella pneumoniae digerido con XbaI
Aislamientos por Casas de Salud
30
25
Conclusiones
20
15
10
5
0
HBO
HDA
HEE
HEG
HIA
HMI
HPA
HSF
HVC
ING
ISD
Figura1. Aislamientos obtenidos de distintas casas de salud
SLC
Figura2. Método de inhibición al carbapenémico
Resultados
Dentro del análisis del perfil de susceptibilidad, el 100% de las cepas fueron MDR
con un 70 % de XDR y 30 % de posibles PDR. En la identificación fenotípica de la
producción de carbapenemasas, el Método de inhibición al carbapenémicos (CIM)
demostró ser un buen indicador de este tipo de resistencia , ya que todas las cepas
estudiadas con resultado molecular positivo para el gen blaKPC, dieron también un
resultado positivo con este método, por lo que se podría utilizar como tamizaje de
producción de serín-carbapenemasas. Mediante el ensayo de subtipificación por
PFGE se observan varios grupos clonales analizados con índice de Dice como
indicador de similitud, evidenciando la presencia de brotes intrahospitalarios en
diferentes servicios de varias casas de salud del Ecuador.
•Todas las cepas analizadas en este estudio amplificaron para el gen blaKPC sin ninguna
cepa que presente co-resistencia con el resto de genes estudiados.
•Los perfiles de resistencia obtenidos, nos indican la presencia de k. pneumoniae XDR y
posibles PDR.
•El Método de Inhibición a Carbapenémicos (CIM) se presenta como un buen indicador
de detección de serín carbapenemasas clase A en k. pneumoniae.
•El estudio de subtipificación por PFGE revela la presencia de varios grupos clonales
distribuidos en las diferentes servicios y casas de salud.
•Se puede apreciar una estrecha relación clonal de k. pneumoniae KPC entre varios
hospitales de la capital y hospitales de otras regiones del Ecuador.
•Se observa la presencia de brotes intrahospitalarios identificándose un clon
predomínate en cada casa de salud.
•Se evidencia la necesidad de tomar las medidas adecuadas para el control de
infecciones asociadas a la atención en salud, por medio de controles más exigentes al
momento de manejar un paciente infectado con microorganismos multiresistentes.
Referencias :
•
•
Agradecimientos
:
Red
WhonetEcuador
•
•
Van der Zwaluw, K., de Haan, A., Pluister, G. N., Bootsma, H. J., de Neeling, A. J., & Schouls, L. M. (2015). The
Carbapenem Inactivation Method (CIM), a Simple and Low-Cost Alternative for the Carba NP Test to Assess Phenotypic
Carbapenemase
Activity
in
Gram-Negative
Rods.
PLoS
ONE,
10(3),
e0123690.
http://doi.org/10.1371/journal.pone.0123690
López, J., & Echeverri, L. (2010). K. pneumoniae: ¿la nueva “superbacteria”? Patogenicidad, epidemiología y mecanismos
de resistencia. Revista médica de la Universidad de Antioquia , 23 (2), 157-165.
Nicola, F., Nievas, J., & Smay, J. (2012). Evaluación de diversos métodos fenotípicos para la detección de
carbapenemasas KPC en Klebsiella pneumoniae. Revista Argentina de Microbiología , 44 (4), 290-302.
Muñoz, S., Poirel, L., Bonomo, R., Schwab, M., Cornaglia, G., Garau, J., y otros. (2013). Clinical epidemiology of the
global expansion ok Klebsiella pneumoniae carbapenemases. The Lancet Infectious Diseases , 13 (9), 785-796.