BIOSCOT® Anti-A Línea celular: BIRMA-1 Código

BIOSCOT®
Anti-A Línea celular: BIRMA-1
Código de producto: TL
Anti-B Línea celular: LB-2
Código de producto: TN
Anti-A,B Líneas celulares: ES-4/ES-15
Código de producto: TM
IgM monoclonal murino
Reactivos para determinación de grupos sanguíneos
Para técnicas en portaobjetos, tubo y microplaca
C
IVD
0123
USO PREVISTO
Los reactivos para determinación de grupos sanguíneos IgM monoclonal
murino BIOSCOT detectarán los siguientes antígenos:
El Anti-A (línea celular BIRMA-1) detectará el antígeno A.
El Anti-B (línea celular LB-2) detectará el antígeno B.
Los Anti-A,B (líneas celulares ES-4/ES-15) detectarán los antígenos A, Ax o B.
Estos reactivos son adecuados para su uso mediante las técnicas de
portaobjetos, tubo y microplaca y están diseñados para ser utilizados por
operarios entrenados en técnicas serológicas.
INTRODUCCIÓN
El sistema ABO de grupos sanguíneos
En 1900, Landsteiner descubrió que el suero de algunos individuos
aglutinaría los eritrocitos de otras personas y que este fenómeno podría
utilizarse para clasificar a las personas en diferentes fenotipos sanguíneos.
Se reconocen cuatro fenotipos habituales: O, A, B y AB. Desde entonces se
han identificado subgrupos de los antígenos A y B.
El fenotipo ABO de una persona se determina habitualmente mediante las
reacciones de aglutinación de los eritrocitos de la persona con antisueros
Anti-A, Anti-B y Anti-A,B (determinación directa). En el análisis de muestras
de sangre de adultos, puede confirmarse el grupo sanguíneo ABO mediante
las reacciones del suero de la persona con suspensiones de eritrocitos A y B
estándar (determinación inversa).
PRINCIPIO DEL REACTIVO
Cuando se utilizan según las técnicas recomendadas, estos reactivos
provocarán la aglutinación (amontonamiento) de eritrocitos portadores
del antígeno específico (prueba positiva). La falta de aglutinación de los
eritrocitos demuestra la ausencia del antígeno específico (prueba negativa).
Estos reactivos se han optimizado para que puedan utilizarse mediante las
técnicas recomendadas sin ulterior dilución ni añadidos.
Estos productos se suministran filtrados a través de 0,22 μm.
MATERIALES
El Anti-A de código de producto TL contiene anticuerpos procedentes de
la línea celular BIRMA-1. El Anti-B de código de producto TN contiene
anticuerpos procedentes de la línea celular LB-2. El Anti-A,B de código
de producto TM contiene anticuerpos procedentes de las líneas celulares
ES-15 y ES-4 Los reactivos consisten en anticuerpos monoclonales IgM
murinos en una disolución tampón que contiene protenciadores químicos
macromoleculares. Estos reactivos contienen azida sódica al 0,1% (p/v),
material bovino y material porcino. Cada vial (10 ml) contiene material
suficiente para aproximadamente 250 análisis.
Estos reactivos contienen los colorantes:
Azul patentado V
Anti-A Azul
Amarillo de quinoleína C.I 47005
Anti-B Amarillo
Anti-A,B
Ninguno
PRECAUCIONES
1. Las líneas celulares utilizadas para producir estos reactivos son de origen
murino; se han analizado y se ha demostrado que son negativas para
virus mediante el ensayo MAP (Mouse Antibody Production). Debe tenerse
cuidado en el uso y la eliminación de cada recipiente y su contenido.
2. Estos reactivos contienen azida sódica al 0,1% (p/v). La azida sódica
puede ser tóxica si se ingiere y puede reaccionar con el plomo o el cobre
de las tuberías para formar sales muy explosivas. Al desecharla, debe
aclararse con abundante cantidad de agua.
3. Estos productos deben ser transparentes. La turbidez puede indicar
contaminación bacteriana. Estos reactivos no deben utilizarse si se
observan un precipitado, un gel de fibrina o partículas.
4. Estos reactivos son solo para diagnóstico in vitrorealizado por
profesionales.
5. El material bovino y porcino se obtiene de fuentes aprobadas por la
USDA o de fuentes de las que se dispone de información sobre los
animales de origen. Los animales donantes del material bovino han sido
inspeccionados y se ha certificado que están sanos; se considera además
que tienen bajo riesgo de EET (encefalopatía espongiforme transmisible).
6. Estos productos deben desecharse o bien mediante inmersión durante
la noche en desinfectantes a las concentraciones apropiadas o bien
mediante tratamiento en autoclave.
CONSEJO A LOS USUARIOS
Se recomienda el análisis en paralelo de un control positivo y uno negativo
con cada lote de análisis. Los análisis deben considerarse no válidos si los
controles no muestran las reacciones esperadas.
No es necesario utilizar un control del reactivo en paralelo con todos los
análisis cuando se utiliza este reactivo. Solo se recomienda utilizar un
control para el reactivo, como el BIOSCOT Monoclonal Control (código
del producto: TT), cuando se esté determinando el grupo sanguíneo de
eritrocitos procedentes de pacientes con auto-anticuerpos o anomalías
proteicas conocidos. Debe analizarse en paralelo con el reactivo.
Estos reactivos se han caracterizado mediante los procedimientos
recomendados en estas instrucciones de uso; el usuario deberá determinar
si son adecuados para otras técnicas.
En caso de cambios en el rendimiento analítico del dispositivo o de que
el envase esté dañado, póngase en contacto con el departamento de
Aseguramiento de calidad de Millipore (UK) Ltd.
ALMACENAMIENTO
Conserve los productos abiertos o no abiertos a 2-8ºC hasta la fecha de
caducidad detallada en la etiqueta.
Si los productos no se conservan a la temperatura correcta, por ejemplo, si
se guardan a temperaturas más elevadas o si se someten a ciclos repetidos
de congelación y descongelación, puede producirse una pérdida acelerada
de la actividad del reactivo.
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
No se necesita preparación especial del paciente antes de la obtención de
la muestra. La sangre debe obtenerse mediante una técnica de flebotomía
aprobada. Las muestras pueden recogerse en los anticoagulantes EDTA,
citrato, CPDA o como una muestra coagulada. Las muestras deben
analizarse cuanto antes después de su recogida. Si el análisis va a
retrasarse, la muestra debe guardarse a 2-8°C. No deben analizarse con
este reactivo las muestras que exhiban una hemólisis macroscópica o
contaminación microbiana. Si las muestras no se conservan a la temperatura
correcta, pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos.
MATERIALES NECESARIOS, PERO NO SUMINISTRADOS
Técnica en portaobjetos:
• Portaobjetos microscópico
• Disolución salina isotónica o plasma/suero compatibles
• Temporizador
Técnica en tubo:
• Tubo de ensayo
• Disolución salina isotónica
• Temporizador
• Centrífuga (1000 fcr)
Técnica en microplaca:
• Microplaca pocillo U
• Disolución salina isotónica
•Temporizador
• Centrífuga (100 fcr)
• Agitador de microplacas
• Lector de microplacas (opcional)
TÉCNICAS RECOMENDADAS
1. TÉCNICA EN PORTAOBJETOS
1.1 Preparar una suspensión al 35 - 50 % de los eritrocitos que van a
analizarse en plasma autólogo (o compatible), suero o disolución salina
isotónica.
1.2 Añadir 1 gota (40 µl) del reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-A,B a un
portaobjetos de microscopio limpio y etiquetado.
1.3 Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
1.4 Mezclar el antisuero y las células en un área de unos 2 cm de diámetro
balanceando suave y continuamente el portaobjetos. Hacer una lectura
macroscópica después de 2 minutos. No confundir el secado de la
mezcla con la aglutinación.
2. TÉCNICA EN TUBO
2.1 Preparar una suspensión al 3-5 % de los eritrocitos que van a analizarse
en disolución salina isotónica.
2.2 Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-A,B a un tubo de
ensayo adecuadamente etiquetado.
2.3 Añadir 1 gota (40 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
2.4 Mezclar y centrifugar a 1000 fcr durante 20 segundos.
2.5 Agitar suavemente el tubo para soltar los eritrocitos, y realizar un
examen macroscópico para ver si hay aglutinación.
2.6 Incubar las reacciones más débiles de lo esperado durante 1 minuto a
temperatura ambiente y luego volver a centrifugar.
3. TÉCNICA EN MICROPLACA
3.1 Preparar una suspensión al 3-5 % de los eritrocitos que van a analizarse
en disolución salina isotónica.
3.2. Añadir 1 gota (40 μl) de reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-A,B a los pocillos
de ensayo adecuados de una microplaca.
3.3. Añadir un volumen igual (40 μl) de la suspensión celular a los pocillos
de ensayo adecuados.
3.4. Mezclar el contenido de cada pocillo usando medios manuales o un
agitador de microplacas.
3.5.Incubar las microplacas a temperatura ambiente durante 15 - 20
minutos.
3.6. Centrifugar las microplacas a 100 fcr durante 40 segundos.
3.7. Resuspender los eritrocitos utilizando un agitador de microplacas.
3.8. Hacer una lectura macroscópica o con un lector automático. El uso de
un lector de placas automático debe ser validado por el usuario.
LIMITACIONES
Los resultados de la determinación de eritrocitos deben confirmarse mediante
determinación inversa del grupo del suero de personas con eritrocitos A1 y B
conocidos. Ningún receptor debe recibir sangre AB salvo que la células del
receptor sean claramente positivas con Anti-A y Anti-B, y se haya demostrado
que el suero del receptor dé reacciones negativas con células A1 y B (salvo
que se haya demostrado que el receptor pertenezca a un subgrupo de AB
que tenga Anti-A1 en el suero).
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Se han ensayado el reactivo TL para determinación del grupo sanguíneo
consistente en Anti-A monoclonales (línea celular BIRMA-1), el reactivo TN
para determinación del grupo sanguíneo consistente en Anti-B monoclonales
(línea celular LB-2) y el reactivo TM para determinación del grupo sanguíneo
consistente en Anti-A,B monoclonales (líneas celulares ES-4/ES-15)
utilizando cada una de las técnicas recomendadas con muestras de donante,
clínicas y neonatales recogidas en EDTA, citrato, CPDA o como una muestra
coagulada. La población de las muestras representaba todos los fenotipos
ABO principales. Para cada técnica, se muestran a continuación el número
total de pruebas (n), así como la sensibilidad y la especificidad calculadas:
Anti-A Código de producto TL
TÉCNICA
Sensibilidad
Especificidad
n
%
n
%
Tubo
634
99,8
731
100
Microplaca
4204
99,9
5845
100
Portaobjetos
623
99,2
636
100
Anti-B Código de producto TN
TÉCNICA
Sensibilidad
Especificidad
n
%
n
%
Tubo
239
100
1121
100
Microplaca
1209
100
8838
100
Portaobjetos
405
100
855
100
Anti-A,B Código del producto TM
TÉCNICA
Sensibilidad
Especificidad
n
%
n
%
Tubo
783
100
577
100
Microplaca
5112
100
4935
100
Portaobjetos
865
99,9
392
100
Definiciones procedentes de las Common Technical Specifications
(CTS):
Sensibilidad diagnóstica:
La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado positivo en presencia del marcador objetivo.
Especificidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado negativo en ausencia del marcador objetivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Moore, S. et al. Vox Sang 47: 427-434 (1984). A Mouse Monoclonal
Antibody with Anti-A,(B) Specificity which Agglutinates Ax Cells.
2. McDonald, D.F. and Thompson, J.M. Vox Sang 1991;61:53-58. A New
Monoclonal Anti-A Antibody BIRMA-1.
3. Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology, 4th Edition,
Montgomery Scientific Publications, 1998.
4. Race, R.R. and Sanger, R. Blood Groups in Man 6th Edition, Oxford:
Blackwell Scientific Publications, 1975.
5. Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United Kingdom.
5th Edition. The Stationary Office, 2001.
El reactivo Anti-A para determinación de grupos sanguíneos con código de
producto TL no detectará todos los casos de células Ax. Para la detección de
casos más débiles de Ax, se requiere lectura microscópica o un periodo de
incubación más prolongado, de 15 minutos.
Las microplacas de poliestireno rígido son en general más adecuadas que las
fabricadas en PVC. Debe evaluarse cada lote de microplacas en el sistema
del usuario antes de su aceptación como adecuado para el uso sistemático.
Los eritrocitos que sean positivos en la prueba de antiglobulina (DAT) pueden
producir resultados falsos positivos. Se recomienda utilizar el reactivo
BIOSCOT Monoclonal Control (código de producto: TT) para detectar estos
resultados positivos.
Pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos si hay
contaminación de los materiales de análisis o alguna modificación de las
técnicas recomendadas.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Reino Unido
Tfno.: +44 (0)1506 404000 Fax: +44 (0)1506 404001
PI232
2015-03