Determinación de hidroximetilfurfural en mieles

Emisión:
19.08.2011
Versión: 1
DETERMINACION DE
HIDROXIMETILFURFURAL EN MIELES.
Método por HPLC con detección UV
Sección Química de
Alimentos y Nutrición
1.
Actualización:
23-06-2014
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ME-711.02-207
OBJETIVO
Determinación del contenido de Hidroximetilfurfural (HMF) en miel de abejas.
2.
CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
El método permite determinar HMF, el cual es un producto de deshidratación de
monosacáridos presentes en la miel, que sirve como indicador de la longevidad de la miel o
bien para juzgar las condiciones de procesado y almacenamiento de este producto. Este
método permite cuantificar HMF en mieles de diverso origen (mieladas, mono o multiflorales).
3.
FUNDAMENTO
La presente metodología tiene como principio realizar un cribado de la muestra, donde la
muestra es sometida a una extracción de fase sólida, para obtener la fracción limpia. La
muestra es determinada por HPLC, utilizando fase estacionaria reversa y detectada a 284 nm.
4.
4.1
DOCUMENTOS DE REFERENCIAS
Drieffield M., Chan D., Macarthur R., Macdonald S., and Bereton P., Single laboratory
validation of a Mthod for the determination of Hydroxymethylfurfural in honey by using
solid-phase extraction cleanup and liquid chromatography. Journal of AOAC
International, vol 88, 1 p. 121-127. 2005.
5.
TERMINOLOGÍA
5.1
DAD: Detector de arreglo de diodos.
5.2
HMF: Hidroximetilfurfural
5.3
HPLC: Cromatografía liquida de alta resolución.
5.4
SPE: Extracción en fase sólida.
5.5
UV: Espectro ultra violeta
6.
REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS
6.1
REACTIVOS
6.1.1
Agua destilada
6.1.2
Acetonitrilo (ACN) grado HPLC.
6.1.3
Agua grado HPLC
DUEÑO DE PROCESO:
Encargado de Laboratorio de
Nutrientes, Aditivos y
Contaminantes.
ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA
INTRANET O IMPRESO SIN TIMBRE DE
“DOCUMENTO CONTROLADO” SE
CONSIDERA COPIA NO CONTROLADA
APROBADO:
Jefe Subdepartamento
Alimentos y Nutrición
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6.1.4
Metanol grado HPLC
6.1.5
Estándar de Hidroximetilfurfural
6.2
INSUMOS
6.2.1
Espátulas
6.2.2
Papel absorbente
6.2.3
Plumón permanente
6.2.4
Gradillas
6.2.5
Micropipetas de 200, 1000 y 5000 uL.
6.2.6
Piseta
6.2.7
Tubos con tapa de 15 y 50 mL
6.2.8
Viales para automuestreador del cromatografo.
6.2.9
Cartuchos de extracción en fase solida con resina C18 de 500 mg.
6.2.10
Columna para HPLC: RP-18 250 x 4.6 x 5 um o equivalente.
6.3
EQUIPOS
6.3.1
Balanza de precisión, con resolución de 0,001 g.
6.3.2
Cromatografo líquido con detector UV ó DAD.
6.3.3
Agitador orbital.
6.3.4
Sistema de extracción en fase solida con manifold.
6.3.5
Bomba de vacío de 1HP.
7.
7.1
7.2
7.2.1
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DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES
Muestreo/Muestra
El ingreso de la muestra para su análisis debe cumplir con el instructivo de aceptación o
rechazo de muestras según IT-711.00-103.
Preparación de Reactivos
Estándares
 Solución madre de HMF 500 ug/mL. Pesar 12,5 mg de HMF y llevar a 25 mL
con una mezcla ACN/agua 1:9, considere la pureza del estándar para
determinar la concentración final de la solución.
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
7.2.2
7.3
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Solución de HMF de 100 ug/mL: tomar 2 mL de solución de 500 ug/mL y
llevar a 10 mL con ACN/agua 1:9.
Soluciones

Solución de elusión: para 100 mL, mezclar 10 mL de acetonitrilo HPLC con
90 mL agua HPLC, desgasificar antes de usar.

Fase móvil: para 1 litro, mezclar 80 mL de acetonitrilo HPLC con 920 mL de
agua HPLC. Desgasificar antes de usar.
Preparación de curva de calibración
Realizar curva de calibración a 5 niveles según la tabla y llevar a volumen con
ACN/agua (1:9).
Concentración
ug/mL
0.05
0.15
0.30
0.50
1.00
Alícuota
uL
250
300
600
1000
100
Volumen final
mL
5
2
2
2
10
Concentración inicial
ug/mL
1
1
1
1
100
7.4
Preparación de controles
Para material control proceder como muestra normal.
7.5
Preparación de la Muestra o etapas previas a realizar la medición.
7.5.1
Si la muestra presenta partículas, retírelas con una espátula, y de ser posible,
homogeneizar la muestra antes de su obtención. Bajo ninguna circunstancia
calentar la miel durante el procedimiento, ya que invalidaría el método.
Pesar 5 + 0,3 g de muestra, en duplicado y con precisión de 0,01 g, en tubos con
tapa de 50 mL.
Añadir agua desionizada llevando a 25 mL cada tubo.
Tomar una alícuota de 1 mL de la disolución y diluirla con 9 mL de agua desionizada.
Montar el sistema de SPE y acondicionar los cartuchos con 1 mL de metanol,
seguido de 3 mL de agua desionizada.
Cargar 2 mL de la disolución de la muestra al cartucho.
Lavar el cartucho con 2 mL de agua desionizada.
Secar el cartucho con un volumen aproximado de 25 mL de aire.
Eluir la muestra con 4 mL de la solución de elusión y luego pasar un volumen de aire
por el cartucho, para asegurar que la extracción total de la muestra. Tapar el vial y
agitar en vortex por 10 segundos.
Diluir 1,5 mL del eluato con 0,5 mL de agua desionizada. Tapar el vial y agitar en
vortex por 10 segundos. Transferir a un vial de autosampler ámbar para su análisis.
7.5.2
7.5.3
7.5.4
7.5.5
7.5.6
7.5.7
7.5.8
7.5.9
7.5.10
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Análisis de la muestra o realización de la medición. Condiciones instrumentales.
Cromatografo líquido con detector UV ó DAD,
Columna: RP-18 250 x 4,6 x 5 m
Fase móvil: Acetonitrilo/Agua 8:92
Flujo: 1 mL/min
Temperatura: 20 °C
Tiempo de retención de HMF 5,8 min aprox.
Volumen de inyección: 50 L
Longitud de onda: 284 nm
7.7
Cálculo de Resultados:
Cx5
HMF (mg/Kg) = --------------------------m x 0,0075
Donde:
C = Concentración obtenida de la curva de calibrado en ug/mL.
0,0075 = factor de dilución
5 = porción de ensayo nominal.
m = masa pesada en gramos
7.8
Aseguramiento de la calidad del ensayo.
Se realizarán los siguientes ensayos según disponibilidad:
7.8.1
7.8.2
7.8.3
7.8.4
7.8.5
7.9
Ensayos de intercomparación o utilización de materiales de referencia certificados o
patrones de referencia certificados.
Durante la serie de trabajo incluir:
Control de blanco al inicio de las lecturas (para estándar de referencia).
Control de estándar de concentración conocida.
Lectura del estándar como control por cada 10 muestras leídas.
Expresión de los Resultados.
Debe informarse la concentración de HMF en la muestra como mg/kg de producto.
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CONTROL DE REGISTROS
IDENTIFICACION
RESPONSABLE
RG-711.00-132
“Registro para
análisis químico
en alimentos
Encargado de
laboratorio de
Nutrientes,
5 años
Aditivos y
Contaminantes
9.
ALMACENAMIENTO
LUGAR
MEDIO
RESPONSABLE/
SOPORTE
RECUPERACION
TIEMPO
Laboratorio de
Nutrientes, Aditivos
y Contaminantes /
Libro anillado con
páginas foliadas
papel
DISPOSICION
Eliminación a
basura
común
posterior a 5
años
CONTROL DE CAMBIOS
VERSION
FECHA
PRINCIPALES
PUNTOS
MODIFICADOS
0
23-06-2014
7.1
0
23-06-2014
Todos
0
0
23-06-2014
23-06-2014
7.7
8
10.
RESUMEN DE MODIFICACIONES
Se modifica el número del IT, actualmente es IT711.00-103
Cambio de formato. El documento para de PRT711.02-207 a ME-711.02-207
Se corrige formula de calculo
Se incluye código de registro.
CUADRO DE RESPONSABILIDADES
Ejecuta el método
Elabora el informe de
resultados
Aprueba el informe de
resultados
Técnico de Laboratorio
Encargado de Laboratorio
Nutrientes Aditivos y
Contaminantes
Profesional encargado del
Laboratorio
Jefatura de Sub
departamento Alimentos y
Nutrición
11.
ANEXOS
No Aplica.