MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Anuncio
MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Simbolos: ε coeficiente de extinción (cm2/µmol) A absorbancia ∆A cambo de absorbancia V volumen de ensayo (ml) [volumen total] v volumen de muestra empleada en el ensayo (ml) t tiempo ∆t intervalo de tiempo entre medidas (min) C concentración (µmol/ml) MW peso molecular de un µmo (µg) METABOLITOS De la Ley de Lambert-Beer: A =ε d C (µmol/ml) Para una reacción química el sustrato se consume y ∆C= C1 – C2 = ∆E (E1 – E2)/ ε d (µmol/ml) Si hay una conversión completa (se acaba el sustrato): C2= 0 y ∆E C= (µmol/ml) εd Para determinar la concentración de la muestra, la proporcion V ensayo/Vmuestra (V/v) debe considerarse: ∆E . V C= (µmol/ml) εd .v ∆E . V . MW C= (µg/ml) εd .v ACTIVIDADES ENZIMATICAS En general se utiliza medir la velocidad de conversion de sustrato o acumulación de producto, esto es, el cambio de concentración por unidad de tiempo (min) La actividad enzimatica/ml es : ∆E/ε d Volumen actividad= ∆C/∆t = (µmol/ml x min) o ∆t ∆E 1000 Volumen actividad= x εd (U/L) en la mezcla de ensayo ∆t ∆E 1000 . V Volumen actividad= (U/L) x εd.v ∆t Y la actividad especifica ∆E V Actividad especifica = x ε d . v .Cproteina (U/mg) ∆t
