BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood BD Wilkins

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-255524.02
Rev.: Junio de 2003
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood
BD Wilkins-Chalgren Agar
USO PREVISTO
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood (agar BD Wilkins-Chalgren con sangre de
caballo al 5%) se utiliza para el aislamiento, el cultivo y las pruebas de sensibilidad de las
bacterias anaerobias estrictas. BD Wilkins-Chalgren Agar se utiliza para pruebas de
sensibilidad de bacterias anaerobias estrictas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
El medio Wilkins-Chalgren se ha descrito para las pruebas de sensibilidad de las bacterias
anaerobias1-3. Mientras que la sensibilidad de las bacterias anaerobias no debe determinarse
con el método de difusión en agar (disco), se demostró que el agar Wilkins-Chalgren y el agar
Wilkins-Chalgren suplementado con sangre eran medios adecuados para la determinación de la
sensibilidad de anaerobios mediante el método de E test4-8. Asimismo, se ha descrito una
modificación de la prueba de difusión en disco para los anaerobios de crecimiento rápido6.
Dado que el medio Wilkins-Chalgren es semisintético y contiene suplementos tales como
arginina, piruvato, hemina y vitamina K1, es adecuado para el crecimiento de numerosos
anaerobios estrictos pertenecientes a diversos tipos metabólicos, incluidos Bacteroides,
Prevotella, Eubacterium, Clostridium, Veillonella y otros. Por tanto, se recomienda para el
aislamiento y cultivo de anaerobios estrictos11-13.
Se ha observado que este medio, al utilizarse sin sangre, no favorece mucho el crecimiento de
Porphyromonas y Peptostreptococcus. Por consiguiente, no se recomienda utilizar BD WilkinsChalgren Agar para el aislamiento primario de anaerobios estrictos a partir de muestras
clínicas. BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood es un medio general para el
crecimiento y aislamiento de bacterias anaerobias estrictas involucradas en infecciones
humanas12,13.
Las peptonas y otros compuestos contenidos en el medio base proporcionan los nutrientes y las
vitaminas necesarios para los anaerobios estrictos. La sangre de caballo de BD WilkinsChalgren Agar with 5% Horse Blood suministra nutrientes adicionales para favorecer el
crecimiento de anaerobios exigentes tales como Porphyromonas y Peptostreptococcus.
REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
BD Wilkins-Chalgren Agar
Digerido pancreático de caseína 10,0 g
Digerido pancreático de gelatina 10,0
Extracto de levadura
5,0
Glucosa
1,0
Cloruro sódico
5,0
L-Arginina
1,0
Piruvato sódico
1,0
Hemina
0,005
Agar
15,0
Vitamina K1
0,5 mg
pH 7,1 ± 0,2
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood, además de los elementos enumerados
anteriormente, contiene sangre de caballo al 5% desfibrinada.
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PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la
etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se
almacenan en un área limpia a una temperatura de 2 – 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante 48 – 72 h en una
atmósfera anaerobia (por ejemplo, con el sistema anaerobio BD GasPak) a 35 – 37 °C.
Cepas
BD Wilkins-Chalgren
BD Wilkins-Chalgren Agar
Agar
with 5% Horse Blood
Crecimiento de débil a
Crecimiento de bueno a
Porphyromonas levii
ATCC 29147
bueno
excelente
Crecimiento de bueno a
Crecimiento de bueno a
Bacteroides fragilis
ATCC 25285
excelente
excelente
Crecimiento de bueno a
Crecimiento de bueno a
Clostridium perfringens
ATCC 13124
excelente
excelente
Crecimiento de bueno a
Fusobacterium nucleatum Crecimiento de bueno a
ATCC 25586
excelente
excelente
Crecimiento de regular a Crecimiento de bueno a
Peptostreptococcus
anaerobius ATCC 27337
bueno
excelente
Sin inocular
Ambar
Rojo (de color sangre)
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Wilkins-Chalgren Agar o BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood, ambos
suministrados en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood es un medio general para el aislamiento y
cultivo de anaerobios estrictos a partir de todo tipo de muestras. Emplear las técnicas
aprobadas para la recogida y el transporte de muestras anaerobias13. Se deben utilizar medios
de transporte adecuados, por ejemplo, BD Port-A-Cul.
BD Wilkins-Chalgren Agar fue utilizado principalmente para las pruebas de sensibilidad de
anaerobios estrictos mediante el sistema E test. Este medio no se recomienda para el
aislamiento primario de anaerobios estrictos a partir de muestras clínicas (véase también
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
Es necesario tener en cuenta que las pruebas de sensibilidad se deben realizar sólo con
cultivos puros. Para las pruebas de sensibilidad, estos medios no deben inocularse
directamente con la muestra clínica.
Procedimiento de análisis
Extender la muestra inmediatamente después de recibirla, utilizando una técnica de extensión
aprobada, en BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood. Inmediatamente después de
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extender la muestra, colocar las placas en jarras anaerobias provistas de atmósfera anaerobia.
Se recomienda utilizar jarras BD GasPak y sobres de H2/CO2 BD GasPak junto con el
catalizador. Incubar durante 2 – 3 días o más, en caso necesario, a 35 – 37 °C.
Independientemente del sistema anaerobio utilizado, es importante incluir un indicador de
anaerobiosis tal como el indicador anaerobio desechable BD GasPak.
Si se extienden en el medio muestras con flora mixta, se recomienda incluir además medios
selectivos tales como BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin Agar with 5% Sheep Blood y/o
BD Wilkins-Chalgren Agar with Amikacin and 7% Sheep Blood. Asimismo, en la muestra
podrían estar presentes anaerobios facultativos. Por consiguiente, se recomienda incluir
siempre un medio aerobio (tal como BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood) cuando se
realizan cultivos primarios. Esta placa se incuba en atmósfera aerobia enriquecida con dióxido
de carbono junto con los cultivos anaerobios13. Permite la detección de los organismos
facultativos en la muestra.
Para utilizar BD Wilkins-Chalgren Agar y BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood
para realizar pruebas de sensibilidad anaerobias con el E test, consultar las referencias o las
instrucciones del fabricante4-8,14.
Resultados
Después de la incubación, se examinan las placas para determinar el crecimiento. Se
consideran presuntivamente de anaerobios estrictos las colonias que aparecen en este medio si
dichos organismos no crecen en placas de agar sangre incubadas en atmósfera aerobia. Se
requiere un examen adicional bioquímico o al microscopio para lograr la identificación de los
géneros y las especies de los anaerobios estrictos.
Para leer los resultados del sistema E test obtenidos en este medio, consultar las referencias o
las instrucciones del fabricante4-8,14.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood se utiliza para el aislamiento no selectivo
de anaerobios estrictos a partir de muestras clínicas11-13. Este medio y BD Wilkins-Chalgren
Agar también se utilizaron para pruebas de sensibilidad de anaerobios estrictos con el E test4-8,14.
Resultados de rendimiento15
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood se evaluó internamente con aislados
clínicos y cepas recogidas de las siguientes especies anaerobias estrictas (mencionadas en la
tabla siguiente) y se compararon con BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep
Blood como medio de referencia: Bacteroides fragilis, B. distasonis, Prevotella bivia,
Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas levii, Porphyromonas gingivalis, Campylobacter
(Bacteroides) gracilis, Peptostreptococcus anaerobius, Clostridium perfringens, Mobiluncus
mulieris, Eggerthella lenta (Eubacterium lentum). Ambos medios se inocularon con 103 a 104
UFC por placa y se incubaron en atmósfera anaerobia durante 3,5 días. El número de colonias
en el medio de prueba fue igual o superior que el registrado en el medio de referencia de la
prueba para todas las cepas analizadas.
Limitaciones del procedimiento
Dado que BD Wilkins-Chalgren Agar y BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood
no son selectivos para anaerobios estrictos, también crecerán organismos facultativos. Por
consiguiente, es importante comparar el resultado de los cultivos anaerobios con el de una
placa incubada en atmósfera aerobia.
Aunque numerosos anaerobios estrictos tales como los clostridios y el grupo Bacteroides fragilis
crecen bien en BD Wilkins-Chalgren Agar, este medio no debe utilizarse para su aislamiento
primario a partir de muestras clínicas.
La prueba de sensibilidad con difusión en disco no debe aplicarse para las pruebas de
sensibilidad de bacterias anaerobias. Consultar las excepciones en las referencias10.
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REFERENCIAS
1. Wilkins, T.D., and S. Chalgren. 1976. Medium for use in antibiotic susceptibility testing of
anaerobic bacteria. Antimicrob. Agents Chemother. 10: 926-928.
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susceptibility testing of anaerobic bacteria - 3rd edition. Approved standard M11-A3. National
Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA.
3. DIN 58944. 1991: Methoden zur Empfindlichkeitsprüfung anaerober bakterieller
Krankheitserreger gegen Chemotherapeutika - Agar-Dilutionsmethode und Mikro-BouillonDilutionsmethode, Deutsches Institut für Normung (DIN), Berlin.
4. Appelbaum, P.C., et al. 1994. Comparison of the E test and conventional agar dilution
methods for susceptibility testing of Gram-negative anaerobic rods. Diagn. Microbiol. Infect.
Dis. 18: 25-30.
5. Pierard, D., et al. 1996. Use of the E test for determining antimicrobial susceptibility of
anaerobic bacteria. Pathol. Biol. 44: 358-362.
6. Wüst, J., and U. Hardegger. 1992. Comparison of the E test and a reference agar dilution
method for susceptibility testing of anaerobic bacteria. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 11:
1169-1173.
7. Barbut, F., et al. 1999. Antimicrobial susceptibilities and serogroups of clinical strains of
Clostridium difficile isolated in France in 1991 and 1997. J. Clin. Microbiol. 43: 2607-2611.
8. Citron, D.M., et al. 1991. Evaluation of the E test for susceptibility testing of anaerobic
bacteria. J. Clin. Microbiol. 29: 2197-2203.
9. Spangler, S.K., et al. 1994. E test for susceptibility testing of anaerobes to ß-lactams and ßlactamase inhibitors. Proceedings from the 18th Int. Congr. of Chemother., Recent Advances
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10. Barry, A.L., et al. 1990. Multilaboratory evaluation of an agar diffusion disk susceptibility test
for rapidly growing anaerobic bacteria. Rev. Infect. Dis. 2: S210-S217.
11. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation – cultivation – maintenance of medical bacteria.
Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London
12. Atlas, R.M. 1993. Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Boca Raton, FL. USA.
13. Engelkirk, P.G. et al.: Principles and Practice of Clinical Anaerobic Bacteriology; Star
Publishing Comp., Belmont, 1992
14. Wexler, H.M., and G.V. Doern. 1995. Susceptibility testing of anaerobic bacteria. In: Murray,
P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
15. Data on File. BD Diagnostic Systems Europe. Heidelberg, Germany.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood
Nº de cat. 255524
Medios en placa listos para usar, 20 placas
BD Wilkins-Chalgren Agar
Nº de cat. 256507
Medios en placa listos para usar, 20 placas
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