Puntos a tener en cuenta en cada informe.

Introducción a la biología celular y molecular
IBCM: turno tarde
Guía particular para incluir en cada informe
Atención!!! Esta guía incluye los tópicos que no pueden faltar en cada informe.
INFORME TP 1 y TP 2:
“Extracción de ADN y electroforesis en gel de agarosa”
INTRODUCCION
1- ¿Para analizar la calidad y la cantidad de plásmido obtenido qué tipo de mediciones
se realizarán? ¿Por qué es importante tener estos parámetros?
2- ¿Qué características hacen que un plásmido sea una herramienta tan útil en biología
molecular? Nombre al menos 4 de las modificaciones que se le han introducido para
hacerlos mas eficientes.
3- ¿Cuál es el fundamento de la técnica de purificación por lisis alcalina? ¿Cuáles son
las limitaciones de esta técnica?
(a) Explique la función de cada uno de los reactivos utilizados durante la purificación
(b) ¿Por qué se utiliza el tratamiento con RNAsas?
(c) Nombre otras técnicas que se utilizan para el aislamiento de plásmidos.
4- ¿Por qué se utiliza la relación A260/A280 como índice de pureza? ¿Qué otros
componentes pueden interferir en esta medición?
5- ¿Qué información me aporta el uso de los geles de agarosa para el análisis de DNA?
RESULTADOS
En esta sección ustedes deben:
A- Armar una tabla donde se muestren los valores obtenidos en la cuantificación y
correlacionarlo con los valores obtenidos en la relación A260/A280. DE TODOS LOS
GRUPOS. Realizar los cálculos de la masa de ADN (en g) que sembró cada grupo
teniendo en cuenta los volúmenes que fueron sembrados. Relacionarlo con lo observado en
el gel.
B- En la foto del gel de agarosa indicar:
(a) ¿A qué corresponde cada calle e indicar el grupo?
(b) Tamaños de las bandas obtenidas en la corrida del ladder. ¿Estas bandas indican
el tamaño del fragmento ó el peso molecular? Relación entre ambos parámetros.
(c) ¿A qué corresponden las bandas observadas en las muestras? ¿Qué diferencia
encuentra en las muestras tratadas con RNAsa?
(d) ¿Por qué solo puedo asegurar que el plásmido obtenido es el deseado cuando esta
en su conformación lineal?
DISCUSION
En este inciso deben discutir los resultados obtenidos haciendo una relación entre la
cuantificación, el grado de pureza y lo observado en el gel. ESTO PARA LOS DATOS DE
TODOS LOS GRUPOS.
Además decir que dificultades encontraron o errores se cometieron y como ellos pudieron
influir en los resultados observados (esto únicamente para sus resultados).
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Introducción a la biología celular y molecular
INFORME TP 3, TP 4 y TP 5:
“Extracción, cuantificación de proteínas. Geles SDS-PAGE y Western blot”
INTRODUCCION
1- ¿Por qué se deben utilizar distintos protocolos de extracción según el material u
organismo de partida?
2- ¿Cuál es la importancia de cuantificar las muestras? ¿Esta medición da noción del
grado de pureza de una determinada proteína?
3- ¿A qué se debe que se utilicen distintos tipos de matrices y de geles dependiendo del
tipo de biomolécula a separar o la finalidad del experimento? (ADN, proteínas o complejos)
4- Fundamento de las técnicas de extracción y criterios de selección. ¿Cuál es la
función de los inhibidores de proteasas?
5- ¿Para qué se utiliza la curva de calibración? ¿Qué consideraciones hay que tener en
cuenta en la confección de la misma?
6- Las técnicas de espectroscopia se utilizan para cuantificar tanto proteínas como
ADN, ¿cuál es el fundamento de esta técnica, cuáles son las limitantes en la cuantificación
de proteínas a 280 nm? ¿qué beneficios y limitaciones tienen las técnicas calorimétricas?
7- El hecho que los geles SDS-PAGE me permitan obtener el perfil proteico de un
material determinado , ¿me permite también evaluar que ocurre a nivel de la expresión de
una determinada proteína, si, no y por qué? ¿Qué sucede con el Western blot?
8- ¿Qué diferencias existen entre un gel nativo y uno desnaturalizante? ¿Ustedes
consideran que hay diferencias en el buffer de siembra que van a utilizar en cada caso?
Enumeren la composición del buffer de siembra utilizado en el TP y la función de cada
reactivo.
RESULTADOS
En esta sección ustedes deben:
A- Confeccionar una tabla con los valores obtenidos en la curva de calibración (utilizar
los datos de todos los grupos).
B- Realizar un gráfico con la curva de calibración: indicar la ecuación de la recta y el R2.
En caso de ser necesario descartar puntos de la gráfica indicar el criterio de exclusión
de dichos datos.
C- Realizar una tabla en donde conste, el cálculo de la concentración de cada muestra a
partir de la curva de calibración detallando el factor de dilución utilizado para cada
muestra, el cálculo para poder sembrar la masa determinada por los instructores en el
gel y si es necesario realizar diluciones de acuerdo a la concentración de la misma.
D- En la foto de los geles indicar a que corresponde cada calle. ¿Por qué se siembra un
marcador de Peso molecular? Indique a que PM corresponde cada banda del
marcador
E- Calcule el Rf para el marcador de PM, realice la grafica log (PM) vs Rf y extrapole el
PM de 3 bandas nítidas de sus muestras. ¿En los geles SDS-PAGE una banda
corresponde a una proteína determinada?
F- Idem incisos D y F pero para el Western blot.
DISCUSION: en este inciso deben discutir los resultados obtenidos haciendo una relación
entre la cuantificación de las distintas muestras y lo observado en el gel. ¿Existe alguna
relación entre el material de partida y la concentración de proteínas obtenida? ESTO PARA
LOS DATOS DE TODOS LOS GRUPOS.
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Introducción a la biología celular y molecular
Comparar el patrón de expresión proteica de los diferentes órganos a partir del SDS-PAGE.
Diferencias entre lo observado en el WB y en el SDS-PAGE. Además decir que dificultades
encontraron o errores se cometieron y como ellos pudieron influir en los resultados
observados (esto únicamente para sus resultados).
INFORME TP 6:
“Microscopía óptica e Histología”
INTRODUCCION
1- ¿Qué diferencias encuentra entre el microscopio de contraste de fase, el microscopio
invertido y el de campo claro? Diferenciar sus utilidades
2- ¿Qué consideraciones debe tener a la hora de seleccionar el tipo de microscopio y el
tratamiento de la muestra antes de ser visualizada (tinción, fijación, etc)?
3- Enumere los pasos seguidos para la preparación de las muestras histológicas y para que
sirve cada uno de ellos.
4- Describa para que sirve cada una de las soluciones utilizadas durante la tinción de las
muestras con Hematoxilina-eosina (H-E). ¿Qué clase de colorantes son, qué
componentes celulares van a teñir?
5- Confeccione una tabla con los valores normales de cada tipo de células blancas en el
frotis de sangre humano adulto.
RESULTADOS
En esta sección ustedes deben:
A- Hacer los croquis de las imágenes observadas en los preparados. Indicar las
estructuras reconocidas, el tipo de tinción realizada, tipo de microscopio utilizado y aumento.
Si le es posible indique estructuras visualizadas en los cortes histológicos. En todos lo casos
indicar morfología y color de los citoplasmas y núcleos observados.
B- Completar los esquemas de los microscopios identificando los componentes
indicados.
INFORME TP 6:
“Cariotipo.”
INTRODUCCION
1-¿Para qué sirven las técnicas de cariotipo, bandeo G y Fish?
2- Dé ejemplos de usos clínicos de las técnicas de cariotipo y genotipificación.
3- ¿Qué indica el índice mitótico y su uso en clínica?
4- Indicar para que sirven cada una de las soluciones utilizadas en este protocolo
5- ¿Qué es la colchicina y para que se utiliza?
RESULTADOS
A- Indicar el índice mitótico de las muestras analizadas
B- Indicar los pares de cromosomas.
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