Formación de liposomas Los liposomas son pequeñas vesículas

Formación de liposomas
Los liposomas son pequeñas vesículas que están rodeadas por una bicapa lipídica y contienen en su interior un medio acuoso. También se pueden incluir en su interior diversas moléculas si se forman en presencia de ellas. Estas vesículas pueden fusionarse con la membrana plasmática de las células y, por consiguiente, se pueden utilizar para introducir diversas
sustancias en células concretas como fármacos, cosméticos e incluso ADN.
Material
– Agitador mecánico de tubos, ferricianuro potásico 10 m, sonicador de baño, lecitina
de huevo (10 mg), columna de Sephadex G-50 y cloruro potásico 45 mM.
Fundamento
En los fosfolípidos se diferencian una cola apolar y una cabeza polar, cuando se colocan
en una disolución acuosa se agrupan uniéndose entre sí por las colas hidrófobas, formando una bicapa que se cierra originando pequeñas vesículas o liposomas.
Procedimiento
Moléculas de
ferricianuro potásico
Añadir 1 ml de
ferricianuro potásico.
Agitar durante 5 ó 10
minutos hasta lograr
una suspensión homogénea.
Fofolípido
Liposomas
Para facilitar la suspensión
se puede calentar el tubo al
baño María a unos 40-50 ºC.
Posteriormente, se somete a
un proceso de vibración
ultrasónica (sonicación) durante
2 minutos.
Se consigue una dispersión
de vesículas cerradas
(liposomas) de tamaño
uniforme que encierran
en su interior ferricianuro
potásico.
Ferricianuro
Se pueden separar los liposomas del ferricianuro no encapsulado por cromatografía de
filtración por gel.
KCl
disolvente
Ferricianuro
Liposomas
Gránulos
de gel
Se añade la suspensión
de liposomas en la parte
superior de la columna
Sephadex G-S0 y se diluye
con una solución de KCL.
En la columna, se forman
bandas separadas de
color amarillo.
Cuando aparecen en la
parte inferior los liposomas
se recoge todo el volumen
de esa banda.
Liposomas
Técnicas
Ferricianuro