PTH: MÉTODOS DE DETERMINACIÓN
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XIII JORNADA INTERHOSPITALARIA PTH: MÉTODOS DE DETERMINACIÓN Eva Márquez Liétor 6 de febrero 2008 PTH HORMONA PEPTÍDICA (84 aminoácidos) MANTENER LA HOMEOSTASIS Ca2+ SÍNTESIS Y SECRECIÓN CÉLULAS PRINCIPALES SÍNTESIS Y SECRECIÓN SÍNTESIS Y SECRECIÓN PTH Ca2+ SÍNTESIS Y SECRECIÓN RECEPTOR ACOPLADO A PROTEÍNAS G SÍNTESIS Y SECRECIÓN Presecuencia Prosecuencia PTH SÍNTESIS Y SECRECIÓN Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ PTH CPTH CPTH CPTH E CPTH PTH Ca2+ Ca2+ PTH PTH PTH Vitamina D PTH PTH IP3 Ca2+ TRANSCRIPCIÓN DEL GEN DE LA PTH Ca2+ SÍNTESIS Y SECRECIÓN Ca2+ Ca2+ Ca2+ PTH CPTH CPTH CPTH E Mg2+ C- PTH PTH PTH PTH PTH PTH PTH PTH PTH PTH TRANSCRIPCIÓN DEL GEN DE LA PTH METABOLISMO Y EXCRECIÓN N-terminal t1/2= 2-4’ HÍGADO C-terminal 5 veces PTHintacta (kupffer) METABOLISMO Y EXCRECIÓN PTH (1-84) C-terminal Aclaramiento renal función renal N-PTH y PTHi (1-84) C-PTH PTHi + C-terminal actividad biológica inactivos EFECTOS BIOLÓGICOS MANTENER [Ca2+] EN LEC HUESO RIÑÓN INTESTINO EFECTOS BIOLÓGICOS RECEPTOR DE PTH Activación: residuo 1-6 PTH ACCIÓN HUESO Y RIÑÓN RECEPTOR TRANSMEMBRANA ACOPLADO A PROTEÍNAS G EFECTOS BIOLÓGICOS RIÑÓN •Incrementa la reabsorción de Ca2+ en la porción distal del túbulo •Inhibe la reabsorción de fosfato en el túbulo proximal (efecto fosfatúrico) •Estimula la producción de 1,25-(OH)2-vitamina D (forma activa) aumenta la absorción intestinal de Ca2+ (efecto indirecto sobre intestino) EFECTOS BIOLÓGICOS HUESO •Receptor de PTH en osteoblastos: •Inhibe síntesis de enzimas formadoras de tejido óseo •Induce expresión de citoquinas que promueven la proliferación y diferenciación de osteoclastos (sistema RANKL/OPG) •Acción bimodal: •Temprana: induce resorción ósea (inhibe osteoblastos y activa osteoclastos) Ca2+ sérico •Tardía: remodelación ósea de sitios afectados (estimula proliferación de osteoblastos) EFECTOS BIOLÓGICOS RECEPTOR DE PTH Activación: residuo 1-6 PTH RECEPTOR TRANSMEMBRANA ACOPLADO A PROTEÍNAS G ACCIÓN HUESO Y RIÑÓN Activación selectiva explicaría los efectos dispares óseos EFECTOS BIOLÓGICOS RECEPTOR DE C-PTH Activación: residuos C-PTH Efectos biológicos de fragmentos “inactivos” Osteoblastos y osteocitos RECEPTOR TRANSMEMBRANA ACOPLADO A PROTEÍNAS G resorción ósea Contrarrestan efecto del Ca2+ Pr-PTH Péptido de 141aa con homología estructural en extremo N-terminal con PTH (13aa). Inicialmente descubierto en tumores (pulmón, mama, riñón...) Hipercalcemia grave por activación del receptor de PTH: -Incrementa resorción ósea -Aumenta reabsorción renal de Ca2+ Menor efecto fosfatúrico que PTH Pr-PTH Producción en tejidos fetales y adultos. Función fisiológica: -Feto: -Regula proliferación y mineralización de cartílago -Regula transporte placentario de calcio -Vida postnatal (acción paracrina): -Regula interacciones entre epitelio y mesénquima (desarrollo de mama, piel y folículo piloso) Elevada en hipercalcemia asociada a malignidad y en carcinomas epidermoides de pulmón, esófago, útero, piel y en otros cánceres sin relación con su localización (feocromocitoma, mielomas, linfomas...) DETERMINACIÓN DE PTH Gran controversia en varios puntos: 1.Denominación de los distintos tipos de ensayos Radioinmunoanálisis Análisis inmunométricos 1ªgeneración PTHintacta 1ªgeneración 2ªgeneración 2ªgeneración PTHbiointacta 3ªgeneración DETERMINACIÓN DE PTH 2. Uso de diferentes unidades de medida. La adopción de unidades molares es difícil por la heterogenicidad de especies moleculares de PTH. Se acepta la conversión, en ensayos de PTH intacta, de unidades de masa a unidades molares utilizando un factor de conversión. 3. En un mismo tipo de ensayo no hay estandarización para armonizar resultados entre distintos métodos. Estudio de comparación entre 15 métodos encontró una diferencia de PTH comprendida (-44%- +123%) DETERMINACIÓN DE PTH Laboratorios dependen de los intervalos de referencia aportados por los fabricantes que no son comparables entre sí FABRICANTE MÉTODO INTERVALO REFERENCIA (pmol/L) BMC Elecsys (Roche) Electroquimioluminiscencia 1.6-6.9 Modular (Roche) Electroquimioluminiscencia 1.4-7.6 Immulite 2000 (DPC) Quimioluminiscencia 1.0-7.0 Immulite (DPC) Quimioluminiscencia 1.1-7.3 Advia Centaur (Bayer) Inmunoquimioluminiscencia 1.2-8.5 N-tact PTH (Diasorin) Inmunoradiometría 1.2-4.9 DETERMINACIÓN DE PTH Intervalos de referencias se basan en adultos jóvenes y de mediana edad, pero sus límites varían en ciertos grupos: -Ancianos: elevación edad-dependiente relacionada con la disminución de función renal. -Embarazadas: disminución en el primer trimestre seguido por un aumento hasta valores normales a término del embarazo -Recién nacidos: presentan hipocalcemia porque su glándula ha estado suprimida durante el embarazo y tarda en responder DETERMINACIÓN DE PTH Mejora de sensibilidad clínica: Uso de intervalos de referencia dinámicos (rangos de valores de PTH en suero obtenidos a partir de modificaciones extremas de las [Ca2+] en individuos sanos) mejor que intervalos gaussianos (valores de PTH en individuos con valores de Ca2+ normales) DETERMINACIÓN DE PTH RADIOINMUNOANÁLISIS Inmunoanálisis competitivos con Ac dirigidos hacia porciones más antigénicas (región media o C-terminal) Limitaciones Detectan péptidos PTH amino terminal truncados y PTH (1-84). IR avanzada resultados anormalmente elevados DETERMINACIÓN DE PTH ANÁLISIS INMUNOMÉTRICOS -Inmunorradiometría (IRMA) M= radiación (I125) -Inmunoquimioluminiscencia (ICMA) M= enzima o sonda quimioluminiscente SS= soporte sólido M SS DETERMINACIÓN DE PTH SS E + + SS E + SS S SS DETERMINACIÓN DE PTH 1.Gran sensibilidad y especificidad por uso de Ac de secuencia específica 2.Rango de concentración más amplio 3.Menos tiempo de incubación DETERMINACIÓN DE PTH Capaces de realizar diagnóstico diferencial de hipercalcemia: -Niveles elevados de PTH en trastornos hiperparatiroideos -Niveles deprimidos de PTH en hipercalcemia con base no paratiroidea Resultados reproducibles en pacientes con diálisis (gran retención de fragmentos C-PTH) DETERMINACIÓN DE PTH Análisis inmunométricos PTH intacta (1-84) PTH (7-84) Ensayos de PTHintacta: - Detectan formas moleculares con efecto biológico opuesto - Sobreestiman la concentración de PTH Nuevos inmunoanálisis DETERMINACIÓN DE PTH Detectan exclusivamente PTH (1-84), no reaccionan con fragmentos grandes N-terminales truncados detección 1 7 captura 34 PTH bio-intacta 84 DETERMINACIÓN DE PTH No se ha determinado qué inmunoanálisis es superior: -Los resultados de ambos se correlacionan tanto en sujetos normales como en pacientes con IR, aunque los valores obtenidos con los primeros son ~ 50% superiores -Punto de vista científico: medir la verdadera concentración de PTH (1-84) haría posible entender mejor la fisiología de la glándula paratiroides y el metabolismo fosfocálcico -Punto de vista clínico: valores con PTH bio-intacta no son mejores para discriminar enfermedades óseas asociadas a fallo renal y tienen igual sensibilidad diagnóstica en hiperparatiroidismo primario DETERMINACIÓN DE PTH Muestra de elección: SUERO PTH es inestable Retraso 2-4h en separación y congelación rápida Separar Congelar descenso de 6% descenso de 8% Extracción en ayunas y por la mañana incremento bifásico (18:00 y 02:00) Podría utilizarse plasma con EDTA que estabiliza la muestra pero es incompatible con algunas técnicas analíticas DETERMINACIÓN DE PTH PTH = 10-57 pg/mL PTH>>>57 seguimiento 10<PTH<57 normal -Hipocalcemia sintomática y PTH normal pérdida de la reserva de la glándula paratiroidea y posible indicador temprano de hipoparatiroidismo funcional -PTH normal en hiperparatiroidismo primario fragmentos inhibitorios son liberados por una glándula anormal. Alerta a los clínicos el descenso de PTH en respuesta a hipocalcemia inducida por fragmentos C-PTH DETERMINACIÓN DE PTH Interpretación de niveles de PTH junto con : -Calcio total o iónico -Albúmina (complemento a la medida de calcio total) -Creatinina (indicador de función renal) -Fósforo y AMPc en orina También podrían servirnos la cuantificación de vitamina D3 y calcitonina que también forman parte del sistema de regulación del metabolismo mineral. DETERMINACIÓN DE PTH • • • • • • VALORES ELEVADOS Hiperparatiroidismo (primario y secundario) Sd. Zollinger Ellison Neoplasias IRC Acidosis tubular renal proximal y distal Enfermedad celíaca VALORES DISMINUIDOS • Hipoparatiroidismo • Paratiroidismo autoinmune • Hipomagnesemia • Hipocalcemia neonatal transitoria • Sd. Di George • Alcoholismo • Sarcoidosis DETERMINACIÓN DE PTH • • • • VALORES ELEVADOS Ejercicio intenso Fractura ósea Obesidad postparto Fármacos: – – – – – – Litio Isoniazida Corticoides Anticonvulsivantes Furosemida Rifampicina... VALORES DISMINUIDOS • • • • • • Embarazo Neonatos Pérdida de peso Trasplante renal Hemodiálisis Fármacos: – – – – Heparina Cimetidina, famotidina Propranolol Gentamicina
