BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254094.06
Rev.: July 2014
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
USO PREVISTO
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood (agar selectivo BD para Gardnerella
con sangre humana al 5%) es un medio parcialmente selectivo y de diferenciación para el
aislamiento de Gardnerella vaginalis a partir de muestras clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Gardnerella vaginalis es considerada como uno de los organismos que causa la vaginitis1-4.
Aunque el organismo puede estar presente en la flora de un alto porcentaje de mujeres
normales, nunca se ha cuestionado su importancia como causa de vaginitis no específica
(también denominada vaginosis bacteriana). En las mujeres con síntomas, G. vaginalis se
asocia frecuentemente con anaerobios tales como Prevotella bivia, P. disiens, Mobiluncus,
Peptostreptococcus y otros que forman parte habitual de la flora de la uretra o de los intestinos,
pero no de la de la vagina. En la vaginitis no específica, la flora normal de Lactobacillus está
reducida o ausente. Gardnerella vaginalis se considera un organismo indicador de la vaginitis
no específica, que, de hecho, constituye una infección polimicrobiana3,4. Aunque no se han
recomendado métodos de cultivo tales como la tinción de Gram directa para muestras vaginales
en los últimos años, muchos laboratorios todavía prefieren el cultivo1,5. G. vaginalis también
puede ser el organismo responsable de diversas enfermedades tales como partos prematuros,
corioamnionitis, infecciones urinarias, infecciones neonatales y septicemia6.
La detección del organismo en medios utilizados sistemáticamente es difícil dado que la
Gardnerella y otras bacterias tales como lactobacilos y estreptococos pueden producir alfahemólisis en medios con sangre de carnero. No obstante, en medios con sangre humana,
Gardnerella vaginalis produce una beta-hemólisis característica1,7-9. Dado que Gardnerella
vaginalis es una bacteria gram positiva, aunque a menudo está considerada como organismo
gram negativo, puede ser seleccionada en los medios con colistina y ácido nalidíxico1,10,11.
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood está basado en el agar CNA
Columbia, que aporta los nutrientes, la colistina y el ácido nalidíxico, inhibidores de las bacterias
gram negativas, pero no de las gram positivas. El medio está suplementado con peptona de
proteasa para mejorar el crecimiento de Gardnerella. Se añade anfotericina B para reducir el
crecimiento de las levaduras (por ejemplo, Candida) que también son frecuentes en las
muestras vaginales. Se añade sangre humana como nutriente y para detectar la beta-hemólisis
difusa característica del organismo.
REACTIVOS
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
Fórmula* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína
Digerido péptico de tejido animal
Peptona de proteosa
Extracto de levadura
Extracto de carne bovina
Almidón de maíz
Cloruro sódico
Agar
Colistina
Acido nalidíxico
Anfotericina B
Sangre humana, desfibrinada
pH 7,3 ± 0,2
12,0 g
5,0
10,0
3,0
3,0
1,0
5,0
13,5
0,01
0,01
0,004
5%
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
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PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ADVERTENCIA:
Contiene material de posible riesgo biológico. La sangre humana utilizada
para la preparación de este medio fue analizada para detectar la presencia
de HIV, HBsAg y otros tipos de hepatitis utilizando los criterios y métodos
empleados actualmente por los bancos de sangre para analizar sangre
humana para transfusiones y resultó ser no reactiva. Debido a que ningún
método de análisis puede ofrecer una garantía total de la ausencia del HIV,
de hepatitis y de otros agentes infecciosos, las muestras y este medio
deben manipularse como si fueran capaces de transmitir una enfermedad
infecciosa. Por tanto, se recomienda manipular este medio conforme al nivel 2
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre
que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar en una atmósfera enriquecida
con dióxido de carbono durante 48 – 72 h a 35 – 37 °C. También se puede incubar el medio
inoculado en una atmósfera microaerobia, por ejemplo, el sistema BD CampyPak.
Cepas
Gardnerella vaginalis
ATCC 14018
Escherichia coli ATCC 25922
Proteus mirabilis
ATCC 14153
Candida albicans
ATCC 10231
Sin inocular
Resultados de la prueba
Crecimiento de bueno a excelente; colonias pequeñas
blancas grisáceas, rodeadas de una beta-hemólisis difusa
Inhibición completa
Inhibición parcial o completa; ausencia de proliferación
Inhibición de parcial a completa
Rojo (de color sangre)
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Son adecuadas las torundas vaginales u otras muestras presuntivas de G. vaginalis. Se
recomienda recoger dos torundas, una para el cultivo y otra para tinción de Gram directa. Debe
utilizarse un medio de transporte (por ejemplo, BD Port-A-Cul) si las muestras no se han de
procesar de inmediato. (Véase también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
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Procedimiento de análisis
Inocular las muestras mediante extensión sobre BD Gardnerella Selective Agar with 5%
Human Blood utilizando una técnica de dilución aprobada. También inocular BD Columbia
Agar with 5% Sheep Blood. Incubar ambas placas en una atmósfera aerobia enriquecida con
CO2 a 36 ± 2 °C durante 48 – 72 h. También se debe preparar una tinción de Gram directa a
partir de todas las muestras vaginales1,2,5.
Resultados
Después de la incubación, examinar BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
para determinar la presencia de colonias de pequeñas a medianas, rodeadas de una betahemólisis difusa. Comparar este resultado con el crecimiento obtenido en la placa de BD
Columbia Agar with 5% Sheep Blood. Si aparecen colonias beta-hemolíticas sólo en el medio
selectivo Gardnerella, la presencia de G. vaginalis es muy probable. Si aparecen colonias betahemolíticas en ambos medios, asegurarse mediante tinción de Gram de que el organismo en el
medio selectivo Gardnerella es un pequeño bacilo difteroide de comportamiento variable con la
tinción de Gram. La presencia de cocos en la tinción de Gram de una colonia beta-hemolítica en
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood indica que los organismos aislados
son estreptococos o estafilococos beta-hemolíticos, pero no G. vaginalis. Se pueden desestimar
las colonias alfa-hemolíticas y no hemolíticas. En los medios con sangre de carnero,
Gardnerella produce pequeñas colonias alfa-hemolíticas o no hemolíticas. En el caso de un
cultivo mixto con otros organismos beta-hemolíticos, finalmente subcultivar nuevamente las
colonias aisladas de BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood en ambos medios
e incubar como se ha indicado anteriormente. Se requieren más pruebas bioquímicas para la
identificación final de los aislados. Consultar las referencias1,7,9.
En la tinción de Gram directa de muestras vaginales, las células “indicio” (células epiteliales
vaginales con multitud de bacilos con comportamiento variable con la tinción de Gram) estarán
visibles si la paciente sufre de vaginosis bacteriana1,5.
Interpretación de los resultados
Si se ha aislado G. vaginalis de muestras vaginales, el diagnóstico resultante debe compararse
con cuidado con los síntomas clínicos subjetivos y objetivos. Por lo general, si Gardnerella es la
causa de la vaginosis bacteriana, las pacientes padecen un flujo mayor y con mal olor. El pH de
las secreciones es >4,5 y las células “indicio” se encuentran presentes en la tinción de Gram.
Consultar las referencias para obtener los detalles1-3,5.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood es un medio parcialmente selectivo
para el aislamiento de Gardnerella vaginalis4,11. G. vaginalis produce colonias beta-hemolíticas
en el medio con sangre humana, y colonias alfa-hemolíticas en medios con sangre de carnero.
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood no inhibe otros organismos gram
positivos tales como los estreptococos, los estafilococos o la Listeria que puede o no producir
beta-hemólisis en los medios con sangre humana y esto también puede ocurrir en las muestras
vaginales. Por tanto, se necesitan realizar pruebas bioquímicas y por microscopio para
confirmar la identidad de un aislado como G. vaginalis.
La presencia de G. vaginalis en una muestra vaginal no necesariamente indica que el
organismo aislado es la causa de una infección.
No utilizar BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood para la determinación de
reacciones hemolíticas de organismos diferentes de Gardnerella vaginalis.
REFERENCIAS
1. Clarridge, J.E., and C.A. Spiegel. 1995. Corynebacterium and miscellaneous irregular grampositive rods, Erysipelothrix, and Gardnerella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F.
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Society for Microbiology, Washington, D.C.
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3. Hammann, R., Lang, N., and H. Werner. 1984. Die Rolle von Gardnerella vaginalis und
Anaerobiern – Ätiologie der unspezifischen Kolpitis. Fortschr. Med. 102: 255-258.
4. Hammann, R., A. Kronibus, N. Lang, and H. Werner. 1987. Quantitative studies on the
vaginal flora of asymptomatic women and patients with vaginitis and vaginosis. Zbl. Bakt. A
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5. Spiegel, C.A., Amsel, R., and K.K. Holmes. 1983. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct
Gram stain of vaginal fluid. J. Clin. Microbiol. 18: 170-177.
6. Martius, J., and D.A. Eschenbach. 1990. The role of bacterial vaginosis as a cause of
amniotic fluid infection, chorioamnionitis and prematurity – a review. Arch. Gynecol. Obstet.
247: 1-13.
7. Greenwood, J.R. et al. 1977. Haemophilus vaginalis (Corynebacterium vaginale) method for
isolation and rapid biochemical identification. Health Lab. Sci. 14: 102
8. Kretzschmar, U.M., R. Hammann, H.J. Kutzner. 1991. Purification and characterization of
Gardnerella vaginalis hemolysin. Curr. Microbiol. 23: 7-13.
9. Piot, P., et al. 1982. Identification of Gardnerella (Haemophilus) vaginalis. J. Clin. Microbiol.
15: 19-24.
10. Harper, J.J, and G.H.G. Davis. 1982. Cell wall analysis of Gardnerella vaginalis
(Haemophilus vaginalis). Int. J. Syst. Bacteriol. 32: 48-50.
11. Goldberg, R.L. and J.A. Washington II. 1976. Comparison of isolation of Haemophilus
vaginalis (Corynebacterium vaginale) from Peptone-Starch-Dextrose Agar and Columbia
Colistin-Nalidixic Acid Agar. J. Clin. Microbiol. 4: 245.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood
Nº de cat. 254094
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 257664
Medios en placa listos para usar, 120 placas
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